Способ определения активности полиеновых антибиотиков

Союз Советски кСоциапнстическикРеспублик ОП ИСАНИЕИЗОБРЕТЕН ИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ и 741154(23) Приоритет оо делам изооретеиий и открытий(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ПОЛИЕНОВЫХ АНТИБИОТИКОВ 1Изобретение относится к медтцинской нромышленности и может быть использовано дляопределения активности полиеновых антибиотиков.Известны способы определения активностиполиеновых антибиотиков, например биологический способ, заключающийся в измерениивеличины зон угнетения роста тест-микроба напитательном агаре 11Однако известный способ определения активности полиеновых антибиотиков является очень тотрудоемким и не обладает быстротой определения: требуется не менее 18 ч для выявлениязон угнетения роста тест-микроба, по которымсудят об активности антибиотика,Наиболее близким к изобретению являетсяспособ определения активности антибиотиковпо кинетике процесса их взаимодействия с дрожжами с помощью микрокалориметра.Однако этот способ отличается малой чувст 20вительностью.Целью изобретения является повышение чувствительности определения активности антибио.тиков,2Для достижения указанной цели в качестве исходного одноклеточного организма используют хлореллу, а активность антибиотиков устанавливают по изменению величины интенсивности начальной вспышки послесвечения клеток хлореллы при их взаимодействии с антибиотиками.Кроме того, для достижения указанной цели интенсивность начальной вспышки послесвечения измеряют в интервале 10 4 - 10с.П р и м е р 1. Определение активности об. разцов нистатина.Хлореллу выращивали на среде Тамия В общепринятых условиях и сохраняли при +4 С. Строили стандартную кривую зависимости начальной вспышки индукционной кривой послесвечения хлореллы от концентрации нистатина. Для этого стандарт нистатина растворяли в диметилформамиде 1 мг/мл и готовили ряд разведений из этого раствора 10 , 10 з 10 " в фосфатном буффере рН 7,0. Далее растворы нистатина в фосфатном буффере в количестве 0,5 мл вносили в 1 мл (3 10 клеток хлореллы-подсчет вели с помощью камеры Горяева) суспензии клеток хлореллы в фосфатном буффере рН 7,0.,01 - ,01 -2 0,02 15 Леворин Амфотер цин В 0,02 -Трудоемкость Трудоемкоеысокая низкая 3 7 Одновременно готовили контроль - суспензию клеток хлореллы без внесения полиенового анти. биотика. Контрольные и опытные образцы выдерживали перед регистрацией послесвечения 5 мин при +20 С и освещении 10 эрг/см с. Затем исследуемый образец помещали в установку и экспонировали его в темноте 3 мин для получения индукционной кривой послесвечения. Индукционная кривая послесвечения кле. ток хлореллы характеризуется следующими параметрамизеличиной начальной вспышки по. слесвечения (А) и устанавливающимся эначе. нием интенсивности послесвечения (С) (фиг. 1) Величину начальной вспьппки контроля суспензии клеток хлореллы принимали за 100%, По вели. чине снижения начальной вспышки послесвече. ния опытного образца хлореллы определяли содержание в пробе нистатина, пользуясь стандартной кривой ( фиг. 2). иологическии метод по утнетениюста тест-микроба"Определение активнического антибиотик Пример 2.гептаенового неароматфотерицина В.Применяли установку и взве как в примере 1. Строили станд зависимости начальной вспышки кривой послесвечения клеток хл центрации стандарта-амфотерицин Концентрацию амфотерицина В растворах определяли по сниже ти послесвечения их смеси (1:2) хлореллы в фосфатном буфере лы) ор риву онно от конг, 3),ореллыа В (фив опытн р 3. Определение активно и м лев орииа.Применяли установку реллы, как в примерах 1 дартную кривую и опред тибиотика в опьпных рас рах 1 и 2 (фиг, 4). и взвесь клеток хлои 2. Строили станеляли содержание антворах, как в приме. В таблтще приведеньспособов определенияантибиотиков. нию интенсивносс суспензией Р 7,0. равнительные данныевности полиеновых Предлагаемый способ обеспечивает быстроеи точное определение активности полиеновыхантибиотиков с низкой трудоемкостью.Формула изобретения1. Способ определения активности полиеновыхантибиотиков путем установления фиэико-химических характеристик взаимодействия антибиотиков с одноклеточными организмами, о т л и.ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения чувствительности способа, в качестве исходного одноклеточного организма используют хлореллу, а активность антибиотиков устанавливаютпо изменению величины интенсивности начальнойвспышки послесвечения клеток хлореллы приих взаимодействии с антибиотиком,2. Способ по п, 1, о т л и ч а ю щ и й с ятем, что интенсивность начальной вспышки послесвечения измеряют в интервале 1 О 4 - 10 с.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Гров Д. С., Рендзлл В. А. Руководство полабораторным методам исследования антибиотиков. Пер, с англ. М Медгиз, 1958.2, Вц.Вгт., Мусо Яос., 977, ч, 11, М 2.