Способ разделения белков шерсти овец

О П И. С А-Н-ИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ Союз Советсник Социапистическик Республик(23) Приоритет 0 сударственный комитет ссср о делам изобретений и открытий6 публиковано 1279 Бюллетень Йо 45 43,865,88,8) икования описания 08,12,79 та щЫивфыъммэмвваежам. аак, м,. 2) Авторы изобретени В.В енюк и И.А, Ма 71) Заявител 54) СПОСОБ РАЗДЕЛЕНИЯ БЕЛКОВ ШЕРСТИ ОВЕЦ Изобретейие относится к улучшенному способу разделения белков шерсти овец, который может найти применение в лабораторной практике при изучении химической структуры химического состава и качества шерсти овец.Известен способ выделения из шерсти овец тирозин-содержащих белков 1, который состоит в растворении шерсти в смеси 6 М мочевины и 0,2 М тиогликолята натрия при рН 11, алкилировании иодацетатом сульфгид" рильных групп, выделении,богатых тирозином белков в виде Б-карбоксиметилпроиэв одних фрак циониров анным осаждением и диализом. Однако этот метод позволяет выделять иэ шерсти овецтолько фракцию белков богатых. тирозином, к,тому же обработка шерсти тиогликолятом сопровождается длитель- ной очисткой белков от мочевины с применением мелкопористых диализных мембран.Наиболее близким к заявляемому является способ разделения белков шерсти овец (2, включающий: окисление шерсти 1,6-ной надуксусной кислотой в течение 48 ч при 25 ,промывку и высушиваяие шеости,последующее О и днако этот способи ть белки шерсти ове пы, причем тирозинприсутствуют во в в виде примесей и елению истинного с каждой Фракции. озволяет раэц лишь на триодержащие ех трех фрак- препятствуют держания бел б р растворение окисленной шерсти в едкой щелочи (24 ч при 25 О), отделениенерастворившейся части шерсти, представляющей собой бета-кератоэу,фильтрованием, определение содержанияв фильтрате общего, белка и альфа-ке,ратозы, и, наконец, расчет содержания гамма-кератоэы как разницы между общим белком и альфа-кератозой.Таким способом белки, выделенныеиз шерсти овец, были разделены на тргрупПы; бета-кератозы, представляющие собой кутикулу и остатки клеточных оболочек шерстяного волокна;альфа-кератозы - белки высокого молекулярного веса с низким содержаниемсеры и гайма-кератоэы - низкомолекулярные белки с высоким содержаниемсеры. При этом лишь одна группа белков (бета-кератозы) может быть получена в чистом виде.О25 делигруп с702029 Таблица 1 Результаты разделения шерсти овец асканийской тонкорунойпороды и австралийского мериноса. Соотношение различныхг пп белков 1 Шерст елкигатырой е римыещелочи Асканийска тонкоруная 6 56 5,2 23 6 встралийскеринос 5,4 Цель настоящего изобретения - повышение селективности разделения белков шерсти овец.Поставленная цель достигается описываемым способом разделения белковшерсти овец, заключающимся в том, 5что осуществляют обработку шерсти40-кратным объемом надмуравьиной кислоты в течение 25-35 мин при охлаждении с последующей нейтрализацией охлажденного надмуравьиного экстракта20-ым раствором едкого натра дорН 6.0-7.0, последующим диализом против водопроводной воды через оберточный целлофан и удалением выпавших восадок белков.Шерсть, после отделения надмуравьинокислого экстракта, окисляют1,6-ой надуксусной кислотой прикомнатной температуре в течение 48 ч,промывают дистиллированной водой,просушивают, растворяют в едкой щелочи(24 ч, комнатная температура), нерастворившиеся белки отделяют фильтров анием,Отличительными признаками способа являются: обработка шерсти 40 кратным объемом надмуравьиной кислоты в течение 25-35 мин при охлаждении с последующей нейтрализацией охлажденного надмуравьиного экстрактаедким натром, диализом против водопроводной воды через оберточный целлофан и удалением выпавшИх в осадокбелков .Использование настоящего способапозволяет разделить белки шерсти 35овец на 4 фракции, одна из которыхпредставляет собой тирозинсодержащиебелки, а остальные три - бета-.кератозы, альфа-кератозы - белки высокого молекулярного веса с низким содержанием серы,и гамма-кератозы - низкомолекулярные белки свысоким содержанием серы. Последние три типа белковсвободны от тирозин-богатых белков . П р и м е р, Шерсть заливают ох 45 лажденной до Онадмуравьиной кислотой (на единицу веса шерсти 40 частей надмуравьиной кислоты) и выдерживают 30 мин при Ос.Надмуравьинокислый экстракт отделяют фильтрованием через стеклянныйфильтр. Остаток шерсти на фильтрепромывают небольшим количеством муравьиной кислоты, затем дистиллированной водой до нейтральной реакции.Промывку муравьиной кислотой и надмуравьинокислый экстракт объединяют,охлаждают до 0 и медленно нейтрализуют раствором едкого натра.Нейтральный раствор диализуют через оберточный целлофан против дистиллированной воды в течение 12 ч.Выпавшие в осадок белки центрифугируют и промывают дистиллированной водой.Остаток шерсти, после обработкипоследней надмуравьиной кислотой помещают в колбу, заливают стократнымобъемом 1,6-ой надуксусной кислоты,Плотно закрывают и окисление проводят при комнатной температуре в течение 48 ч при непрерывном встряхивании.Окисленный остаток шерсти тщательно промывают на стеклянном. фильтредистиллированной водой, затем заливают стократным объемом 0,02 М раствором едкого натра и растворяют прикомнатной температуре, непрерывновстряхивая в течение 24 ч,Нерастворившиеся белки отделяютфильтрованием. К фильтрату добавляютледяную уксусную кислоту до конечнойконцентрации 5 и оставляют на 24 чв холодильнике. Выпавший осадок.(бед-.ные серЬй белки) отделяют фильтрованием.В фильтрате, представляющем собойраствор богатых серой белков, шерсти,содержание белка определяют по Кьельдалю или спектрофотометрически при272 нм. Белки сушат лиофилиэациейРезультаты разделения белков шерсти овец асканийской тонкоруной породы и австралийского мериноса, а также аминокислотный состав этих белковприведены в табл. 1-3.702029 Таблица 2 Содержание серы в различных группах белков шерсти (Ъ)Австралийскогомериноса Белки Богатыеном ози 4,21 Нераств орищелочи 2,5 8 Бедные серойБогатые серой 81,2 3 Таблица остав белковых фракций шерсти по данным на бумаге кислотных гидролизатов (В) отный графи минок хром к Аминокйс р 1. Фракции асканийскойслота 10,0 11,8 и 2 стеинов,8 ини Аспарагиновта,сло 0 32,2 2 ицин, с ерин оэая кис 4 7,0 10,0 они б нин 9 2 0 4,ирози 4 4,б Валин, метионин 2 8 фенилалани 8,4 б,Лейцин, изолейцин ой рсти Фракции австра Цистеиновая кислот 3 2