Способ получения флавоноидов

Оп ИСАНИЕИЗОБРЕТЕН ИЯК ПАУЕНУУ Срез Советских Социалистичесюа Реслублин(61) Дополнительный к патент 22) Заявлено 27,01.75 (21) 2100757/28-13 23) Приоритет - (32)(51) М. Кл.е А 61 К 35/7 Государственный комитет: Совета Министров СССР оо делам изсоретевкй и открытий) Дата опубликования описания 28. Иностранцы Имре Силадьи, Ене Терек н Дьюла Штнбер(72) Авторы изобретения Иностранное предприятиеедьневень Кутато Интезет(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ фЛАВОНОИДО оде целевой проракции этиленрид кальция, и в ример, хромато 1 О Изобретение относится к фармацевтической промышленности н касается получения лекарственных препаратов, которые могут быть использованы при лечении болезни печени,Известен способ получения флавоноидовиз семян растений расторопши (б 0 у Ьцптща 1 апцгп или 8 РуЬце еЬц 7 пепитСоое е 12 цп) путем обработки размельченныхобезжиренных семян системой органическихрастворителей, диспергирования с двухфазной не смешивающейся друг с другом системой растворителей, упаривания и осаждения.11 ,Однако известный способ не обеспечивает высокой чистоты целевого продукта.Целью изобретения является повышениечистоты целевого продукта, Цель достигается тем, что сырье кипятят с четыреххлористым углеродом, затем обрабатываютполярным растворителем, например, формамидом, смесь экстрагируют ацетоном илиэтилацетатом с последующим добавлениемводного раствора хлорида натрия, из образованной при этом двухфазной системы растворителей осаждают в вдукт после повторной эксгликолем, содержащим хлслучае необходимости, награфируют на колонке,Способ осуществляют следующим обраом. Размолотые семена видов бР ЬО ттт(расторопши) или их разновидностей, послетого как семенную кожуру подвергают обогащению путем экстракции жира и крахмала,осуществляемому с помощью растворителяжиров, предпочтительно галогенированногоуглеводорода с удельным весом свыше 1,35переводят в растворимую форму с помощьюсильно полярного растворителя, например,формамида, диметилформамида, диметил-.сульфоксида,В качестве растворителя жира применяют четыреххлористый углерод, так как он не огнеопасен и хорошо растворяет выкристаплизовывающиеся нз масла при стоянии природные сложные эфиры кислот жирного ряда С 1 - Сщ (т.пл, 79-84 С). В четырехФлавоноидные компоненты распределяютмежду двумя 1 оастворителями, Распределеэкстракции в системе из этилацетата, сильно полярного растворителя и водного расл.вора хлористого натрия, В качестве системы экстракции предпочтительно применяютсмесь иэ этилацетата, формамида и 2%-ноговодного раствора хлористого натрия в объемном соотношении 60:25;15. Отдельные компоненты получают в чистом виде, их физические константы совпадают с указаннымив литературе,Компоненты можно отделять друг от друга при помощи колоночной хроматографии,В качестве носителя применяют силикагель,в качестве неподвижной фазы - сильно полярный растворитель и в качестве подвижной фазы - элюотропный ряд, который состоит из приготовленных с помощью хлороформа, н-бутилацетата и этилацетата смесей растворителей различного состава,Для получения чистого силидианина в качестве исходного вещества применяют семена Й 2 Ьип 1 еЬигпеииь осажденный в водесырой продукт кристаллизуют из небольшого количества метанола. Для получения чищества используют семена вариантов Ь 1 у - .Ьив аа 1 апци 1(расторопши пятнистой),цветущие лиловым или белым цветом. Осажденный в воде сырой продукт кристаллизуют иэ небольшого количества метанола ипри желании кристаллизуют из смеси ацетонметанол,П р,и м е р 1. 6 кг тонко размолотыхсемян ,эЬигтеиги (26% масла, 3% флавона) сусцендируют в емкости с четыреххлористым углеродом, Через несколько минутнижнюю, состоящую из содержащих маслои крахмал частиц семян осажденную фазупереводят в другую емкость для перегонки.Емкость для перегонки заполняют растворителем, благодаря атому устанавливаетсяобъемное соотношение между ржаво-коричневого цвета осажденной фазой и растворителем, равное 1:3. Растворитель нагреваюти поддерживают при слабом кипении (77 О),облагодаря этому достигается аффект смешения. Путем регулирования нагрева емкостидля перегонки устанавливают скорость циркуляции системы 7 кг ССР 4 на 1 кг семенного материала в час. После пятичасовойэкстракции, когда фаза растворителя подсеменной кожурой осветляется, процесссчитают законченным. Твердые фазы отфильтровывают и высушивают, Четыреххлористый углерод путем отгонки освобождают хлористом углероде флавоноиды не: претер- ношении 1:0,5-1;1 экстракцию осуществпевают никакого термического разложения, ляют в течение 2-4 ч,Размолотые семена или обезжиреннаясеменная кожура в соотношении к обогащен-ной семенной кожуре из расчета ние осуществляют путем фракционированной1:0,5-2 г/объем, в случае размолотых семян 10:0,5-2 г/объем, смешивают с раствоlрителем и затем при комнатной температуре выдерживают 5-15 ч,За это время лекарственное растение 10претерпевает изменения: сначала оно вспенивается, затем становится коричневым,набухавт и под действием полярного растворителя приобретает вид стекловидной смолы,Экстракцщо осуществляют при комнатной 15температуре, например, путем перколяцииили экстракции с обратным холодильникомв пространстве над жидкостью, Если осуществляют перколяцию при комнатной температуре, на вес переведенного в растворимую 20форму материала применяют рассчитанноечетырехкратное количество растворителя,Если экстракцию осуществляют в простран-.стве над жидкостью и в точке кипения, товесовое соотношение материала и растворителя составляет 1:1,При перколяции лекарственного растенияпри комнатной температуре применяют этилацетат. Если к перколянту прибавляют 24%-ный водный раствор хлористого натрия, З 0 стого силимарина в качестве -доходного вето образуется двухфазная тройная системарастворителей (этилацетат-формамид - раствор хлористого натрия, объемное соотношение 50:25:25), Для экстракции применяют любой известный экстрактор жидкостьжидкость, После частичного испарения этил-ацетатной фазы светло-желтого цвета флавонбиды непрерывно переносят в значительно насыщенный Са Сйй этиленгликоль,причем при энергичном перемешивании,верх:40,няя фаза непрерывно насыщается неполярным углеводородом, предпочтительно петролейным эфиром, В верхней фазе скапливаются остатки жирного масла, хлорофилла ижелтых красителей, в нижней фазе - флавоно 45.иды. Нижнюю (этиленгликолевую) фазу припостоянном перемешивании диспергируютвводе (1:5 - 1,10) по объему. Экстрактосаждают в виде тонкого желтого порошка,50который хорошо отфильтровывается. Находящаяся сверху жидкость прозрачная. Выход составляет в зависимости от качествалекарственного растения 1-4%, т,пл, 150160 С,Если для экстракции до истощения применяют ацетон или матанол и экстракциюосуществляют в пространстве над жидкостью при кипении, растворителя требуетсяменьше, затраты времени меньше, так, например, при использовании ацетона в соот 598544от жирного масла и таким образом регене- ровывают, промывают небольшим количест рируют, Получают следующие продукты: вом метанола и высушивают, Получаютобогащенная семенная кожура 3,5 кг 39,2 г слабо оокрашенного продукта с(15,8%), не представляющий ценности фла- б в 196 мл кипящего ацетона, раствор филывон 0,7%, жирное масло 1,54 кг (25,7%), руют и насыщают 98 мл метанола, Полу3,5 кг высушенной семенной кожуры чают кристаллический метилат (т.пл. 172 ф медленно гомогенизируют с формамидом в 176 С). 34 г продукта белого цвета растсоотношении 1;1 в течение 15 мин и вы- воряют при 50 С в смеси из 340 млдерживают в течение 15 ч, Полученную ко 10%-ного метанольного раствора С, С иричневого цвета набухшую массу помещают 240 мл перегнанного формамида, растворв устройство для перколяции с 24 л атил- фильтруют и при перемешивании прикапыацетачЪ, быстро выпускают и темно-красный вают к 6000 мл дистиллированной воды,предварительный экстракт отводят для гомо- После выдержки в течение 15 ч при 4 Сгенизирования. Затем первый перколят отво- Ы вьшеляется силидианин-гидрат в форме хлопье-одят ао скоростью 2 л/ч для дальнейшей пе- видных игл. Выход 31,6 г т,пл.189-191 С,,- 2 ореработки. Затем с 14 л перколята, полу- - и = +214 (С - 025, 95%-алыйченных при продоЛжении процесса, начинают этанол), Продукт по сравнению с подлиннымэкстракцию следующей загрузки лекарствен- образцом не показываетникакого пониженияных растений (первый перколят второй за- Э точки плавления,грузки), Из лекарственных. растений атил- П р и м е р 2. 3 кг тонко размолотыхацетат регенерируют с помощью водяного семянй,%аапци(масло 10,6%, флавонпара, Первый перколят поступает в квази,3%) гомогенизируют в 300 мл диметилнепрерывный экстрактор (смеситель отстой- формамида в течение нескольких минут иник). Экстрактор работает по принципу про выдерживают в течение 15 ч, Переведенноетивотока. Первый перколят диспергируют в в растворимую форму сырье заливают 3 л3%-ном водном растворе хлористого натрия, ацетона, кипятят в течение 4 ч, Желто-коКоличество флавонов в солевой жидкости ричневого цвета двухфазный. экстракт вызатем акстрагируется в последующей второй нарывают на водяной бане при температурестадии с помощью чистого этилацетата, 30 50 С при пониженном давлении до тех пор,При непрерывном процессе применяют пока не останется никакого растворителя.0,6 л раствора соли на 1 л перколята, при Верхняя фаза полученной двухфазной эмульпоследуюшей экстракции - 0,4 л этилацета- сии состоит из 302 г масла, нижняя фазата на 1 л перколята, время обработки из 330 мл раствора флавона в диметилфорЭ 5Зй мин, Коричнево-красный солевой рафи- мамиде. Нижнюю фазу отделяют и переменат отбрасывают. шивают со смесью из. 400 мл атилацетатаСветло-желтый не содержащий формамида. и ЗЗО мл 2%-ного водного раствора хлсраствор атилацетата выпаривают в вакууме, ристого натрия. Нижнюю, красного цветаПолучают 250 г светло-коричневого цвета водную фазу, которая содержит Ца С 8 еще40аморфного остатка. Остаток растворяют в два раза встряхивают каждый раз по 200 мл"1 л 10%-ного метанольного раствора СаСР 2 этилацетата, объединенные, составляющиеи суспендируют в петролейном эфире до примерно 900 мл фазы встряхивают сочистки. жира, Нижнюю содержащую С ОС 82Зх 150: мл 2%-ного водного раствора хлори.фазу при постоянном перемешивании в тече-. стого натрия, т.е, диспергируют.(распреД 5ние 1 ч прикапывают в воду где флавоноид-,деляют флавоноиды., 900 мл светло-желто 17ная смес осаждается в виде осадка жал- . го этилацетатноо экстракта выпаривают втрго цвета. Находящаяся сверху жидкость вакууме при 50 С до 1/3 его объема, Конпрозрачная и светлая, Остаток отсасывают центрированный акстракт гомогенизируют с,в вакууме промывают путем суспендирова- . 75 мл этиленгликоля, содержащего 5% .ния в воде и затем лерерабатывают. Полх= СаС 12, при энергичном механическом перечают 130 г (по отношению к весу приме-; мешивании и наеышают во время перемешиненной семенной кожуры 2,2%) сырого про- вания путем прикапывания 300 мл петроо,.дуктв светло-желтого цвета, т,пл. 155- лейного афира (т. кип, 30-40 С). Содержа 180 С, ние остаточного масла в верхней фазе со, 130 г содержащего 60% силидианина сы- ставляет 5,5%. Полученные 100 мл этиленрого продукта растворяют в, 384 мл мета- гликолевой фазы красно-коричневого цветаиола. Раствор насыщают путем прикацы- затем выливщот в 1000 мл дистиллированвания 15 мл воды, затравливают:кристал- ной воды, Образовавшийся осадок хорошолом и затем оставляют на 2-3 дня в холо отстаивается, находящаяся над ним жидкостьдильнике. Кристаллический продукт отфилвт- прозрачная. Отфильтрованный и промытыйй 98544 Составитель С. МалютинаРедектор Т. Девятко Техред К. 1.аврон Корректор А, Лакида Заказ 1289/52 Тираж 703 ПодписноеЦНИИПИ Государственного комитетаСовета Министров СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Филиал ППП Патент", г. Ужгород, ул. Проектная 4 водой осадок высушивают в вакууме. Выход57,3 г (1,9%), т. пл. 153 159 оС40 г сырого продукта, содержашего 50%силимарина, измельчают до состояния тонкого порошка и путем быстрого внесениярастворяют в 70 мл метанола. Самопроизвольно кристаллизуюшийся, без фильтрования, красно коричневый сироп выдерживаютс4-5 дней при+4 С, Кристаллы отделяют нацентрифуге, суспендируют 2-3 раза в небольшом количестве метанола, отфильтровывают и сушат в вакууме, Получают 14 гслабо окрашенного продукта, который плавится при 158-162 С. Продукт перекристаллизуют путем растворения при нагревании в15300 мл смеси ацетон - метанол при соотг..ношении 1;1 и выпаривании раствора до половины его объема. Получают 9,9 г продукта белого цвета. Т, пл, 163-168 С,ГЫ 3 = . +10,8 (С,25, 95%-ный этанол). %з маточного раствора путем упаривания получают дальнейшую фракцию,Предлагаемый способ обеспечивает получение продукта высокой степени чистоты,25 Формула изобретенияСпособ получения фщдоноидов из семян,растения расторопши(542 уЬце маланин,б 3 уЬоа еЬцгиецвСомеЕПоп) путем обработкиразмельченных обезжиренных семян системой органических растворителей, диспергирования с двухфазной не смешиваюшейсядруг с другом системой растворителей, упаривания и осаждения, о т л и ч а ю ш и йс я тем, чтос целью повышения чистотыцелевого продукта, сырье кипятят с четыреххлористым углеродом, затем обрабатываютполярным растворителем, например формамидом, смесь экстрагируют ацетоном или этыацетатом с последующим добавлением водного раствора хлорида натрия, из образовавшейся при этом двухфазной системы растворителей осаждают в воде целевой продуктпосле повторной экстракции этиленгликолем,содержашим хлорид кальция, и в случае необходимости хроматографируют на колонке,Источники информации, принятые во внимание при экспертизе;1.Патент Германии Хо 2017789,кл, 30 И 2/03, 1940,