Способ прогнозирования течения острого вирусного гепатита

СОВХОЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 805401 я 5 6 01 К 33/68 ГОСУДАРСТВЕННО ВЕДОМСТВО ССС ГОСПАТЕНТ ССС ТЕНТН Е ИЗОБРЕТЕНИЯ О Оч АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(21) 4870096/14 (22) 01.10.90 (46) 30.03.93, Бюл. Ь 12 (71) 1-й Ленинградский медицинский институт им, акад, И,П.Павлова (72) Т.В,Антонова и В,Б.Барановская (56) Соринсон С.М. Вирусные гепатиты. Л,: Медицина, 1987, с. 42-46, (54) СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАЙИЯ ТЕЧЕН И Я О СТРО ГО В И РУ С Н О ГО. ГЕ ПАТИ ТА. (57) Изобретение относится к медицине, а именно к инфекционным болезням, и может быть использовано для прогнозирования Изобретение относится к медицине, а Именно к инфекционным болезням, и может быть использовано для прогнозирования тяжелой формы острого вирусного гепатита (О В Г).Целью настоящего изобретения является повышение точности способа прогнозирования тяжелой формы острого вирусного гепатита,Поставленная цель достигается тем, что в известном способе прогнозирования тяжелой формы острого вирусного гепатита, включающем биохимическое исследование крови, согласно изобретению, определяют содержание восстановленного глутатиона (ВГ) и активность глюкозо-фосфатдегидрогеназы (Г-ФДГ) в эритроцитах и их соот- ношение и при значениях соотношения, равном и более 1,0, диагностируют тяжелую форму заболевания.При обследовании 70 больных легкой, среднетяжелой и тяжелой формами острого вирусного гепатита было установлено, что тяжелои формы острого вирусного гепатита; Цель, достигаемая изобретением, заключается в повышении точности прогноза развития тяжелой формы вирусного гепатита. Сущность изобретения: осуществляют определение уровня восстановленного глутатиона и активности глюкоза-фосфатдегидрогеназы в эритроцитах и при соотношении между этими показателями, равном и превышающем 1,0, диагностируют тяжелую форму острого вирусного гепатита. Способ позволяет в ранние сроки прогнозировать тяжесть течения вирусного гепатита. величина отношения содержания ВГ - ведущего компонента антиоксидантной системы клетки -к активности Г-ФДГ, фермента, участвующего в метаболизме антиоксидантов, уже в ранние сроки отражает степень тяжести заболевания и может быть использована для прогноза тяжелой формы вирусного гепатита.Указанные выше признаки в доступнойлитературе не обнаружены, что свидетель ствует о соответствии предлагаемого решения критерию "существенные отличия",Способ может быть осуществлен следующим образом.Венозную кровь забирали утром натощак в силиконированные пробирки содержащие 1 мл раствора состава: трехзамещенный цитрат натрия 1,9%, хлорид натрия 0,9%; желатина 3%. Кровь перемешивали с указанным раствором и центрифугировали (3000 оборотов/мин, 4 С, 7 минут), Плазму и лейкоцитарный слой отсасывали й удаляли. Эритроциты троекратно отмывали в 0,90 растворе хлорида натрия (3000 оборотов/мин, 4 С, 5 минут), Надосадочную жидкость удаляли, а в эритроцитах определяли содержание ВГ и ак-тивность Г-ФДГ, 5Уровень ВГ определяли по модифицированному методу, основанному на восстановлении"нитропруссида натрия глутатионом в щелочной среде с образованием окрашенного соединения, 0,5 мл гемо - лизата, полученного при разведении взвесиэритроцитов дистиллированной водой (1:1), смешивали с 1 мл 10% раствора трихлоруксусной кислоты. После перемешивания и 10- минутной инкубации на ледяной бане 15 пробы центрифугировали 5 минут при 3000 оборотов/мин. 1 мл надосадочной жидкости вносили в пробирку, содержащую 2 мл насыщенного раствора хлористого натрия. Затем к смеси добавляли 0,5 мл 0,08 М 20 раствора нитропруссида натрия и 0,5 мл 200 раствора углекислого натрия, Через 15 сек после быстрого тщательного перемешивания пробы фотометрировали при длине25волны 540 нм, Содержание ВГ определяли по калибровочному графику. Результаты выражали в мкмоль ВГ на 1 г гемоглобина, содержание которого определяли стандарт ным гемиглобинцианидиым методом.Принцип метода заключается в том, что гемоглобин при взаимодействии с железосинеродистым калием окисляется в метгемоглобин, образующий с ацетонциангидрином окрашенный гемиглобинцианид, интенсивность окраски которого пропорциональна количеству гемоглобина, 0,02 мл гемолизата приливали к 5,0 мл трансформирующего раствора в пробирке, хорошо перемешивали и через 10 мин измеряли на спектрофотометре при длине волны 540 нм против "холостой" пробы (воды). Расчет содержания гемоглобина производили по калибровочному графику.Определение активности Г-ФДГ в эритроцитах производили по динамике уровня НАДФН спектрофотометрическим методом, основанным на определении количества восстановленного НАДФ, образующегося при окислении глюкозо-фосфата в 6-фосфоглюкозолактон, Измерение содержания НАДФН регистрируется по возрастанию оптической плотности раствора при длине волны 340 нм, Инкубационная среда содержала 0,05 М триэтаноламиновый буфер, рН - 7,5-2,9 мл; 10 мМ раствор НАДФ - 0,1 мл; гемолизат, полученный при разведении взвеси эритроцитов дистиллированной водой (1;5) - 0,04 мл; 30 мМ раствор глюкозо-фосфата натрия (" Серва" ) - 0,05 мл, Оптическую плотность раствора определяли 30 35 40 45 50 ф 55 через 10 с и через 5 минут после внесения в среду глюкозо-фосфата натрия. Инкубацию осуществляли при комнатной температуре, Активность фермента рассчитывали на основе миллимолярного поглощения НАДФН, равного 6,22 мМ см", и выражали в мкмоль НАДФН/г гемоглобина в мин, Содержание гемоглобина оценивали приведенным выше гемоглобинцианидным методом,Затем определяли соотношение ВГи при значениях, равных и более 1,0, диагностировали тяжелую форму заболевания.Выбор данной величины соотношения в качестве прогностического критерия обусловлен ретроспективным анализом результатов обследования 70 больных острым вирусным гепатитом, у 14 из которых была легкая форма заболевания, у 32 - форма средней тяжести, у 24 - тяжелая. Оказалось, что у всех больных"легкой и средней тяжести формами ОВГ величина соотношенияВГв первые дни желтушного периода была ниже 1,0 и составила соответственно 0,62 + 0,06 и 0,41 4- 0,02. При тяжелой форме вирусного гепатита, не осложненного острой печеночной недостаточностью, величина показателя превысила 1,0 (в среднем 1,04 . 0,09), а в случаях с развитием печеночной энцефалопатии составила 1,31 + 0,13, При этом важно отметить, что у большинства больных (16 из 24) тяжелой формой вирусного гепатита соотношениеВГбыло выше 1,0, а у 5 больных значения показателя были близкими к 1,0 (0,87-0,98).Способ иллюстрируется следующими примерами;П р и м е р 1. Больной С., 21 года. история болезни 5552, поступил в стацио- нар на 8 день болезни с жалобами на слабость, боль в коленных суставах. Начало заболевания постепенное, нарастала слабость, на 6 день болезни было зарегистрировано повышение температуры до 380, был однократно жидкий стул. При поступлении состояние расценено как удовлетворительное, отмечалась субиктеричность склер, печень на 1 см выступала из-под реберной дуги, пальпировэлась селезенка. Пульс 68 у/мин, артериальное давление 150/80 мм, рт,ст, Лабораторные показатели: АлАТ - 58,0 ммоль/ч л, билирубин - 30 мкмоль/л, сулемовый титр - 2,0 мл, тимоловэя проба - 1,6 ед, Обнаружен Нв, А 9. Соотношение, составило 1,01, что позволилопредположить возможность развития убольного тяжелой формы ОВГ В, И действительно, состояние больного постепенно 5ухудшалось, сохранялась слабость, появились боли в правом подреберье, снижениеаппетита вплоть до анорексии, прожилкикрови в отделяемом из носа, субфибрильнаятемпература, нарушение сна, стала нарастать желтуха, увеличились размеры печени+2 см), сохранялась гиперферментемия, На68 день болезни АлАТ - 60,0 ммоль/ч л,билирубин - 302 мкмоль/л, сулемовый титр -1,3 мл, тимоловая проба - 6,5 ед протромбиновый индекс - 72 , Проводилась стандартная терапия тяжелой формы вирусногогепатита. Лишь на 98 день болезни больнойбыл выписан из стационара с остаточнойгипербилирубинемией и гиперферментемией,П р и м е р 2, Больной Ш 17 лет,история болезни 24484, поступил в клинику .на 5 день болезни, 2 день желтухи с жалобами на слабость, снижение аппетита, 25тошноту, однократно рвоту, боль в зпигастральной области, Заболел остро, в течение2 дней регистрировалось повышение температуры до 38-39 С, отмечались слабость,снижение аппетита, тошнота, боли в суставах, При поступлении состояниерасценивалось как "относительно удовлетворительное", Умеренная желтуха кожи ислизистых, Печень ца 2 см выступала из-подреберной дуги, селезенка не пальпировалась, Пульс 72 у/мин, АД - 110/60 мм рт.ст,Лабораторные показатели: АлАТ - 53,8ммоль/ч л, билирубин 167 мкмоль/л, сулемовый титр - 1,64 мл, тимоловая проба - 6,3ед. Обнаружен Нв, Ац, Соотношение 40ВГсоставило 1,29, указывая на вероятность развития тяжелой формы ОВГ, чтои подтвердилось придальнейшем наблюдении за больным. Состояние прогрессивно 45ухудшалось и на 8 день болезни уже расценивалось как тяжелое, нарастала слабость,отмечались тошнота, анорексия, появилисьпрожилки крови в отделяемом из носа, сократились размеры печени. АлАТ - 39,4 50ммоль/ч л, билирубин - 190 мкмоль/л.протромбиновый индекс 51%. Больной былпереведен в отделение реанимации и интенсивной терапии, Проводимое лечение.позволило купировать синдром интоксикации, однако желтуха неуклонно нарастала ик 25 дню болезни содержание билирубинасоставляло 364 мкмоль/л. Постепенно самочувствие больного улучшалось, стала угасать желтуха. Больной выписан на 56 день болезни в удовлетворительном состоянии состаточной гипербилирубинемией,П р и м е р 3, Больной К 55 лет, историяболезни 115, поступил в стационар на 7 деньболезни, 1 день желтухи с жалобами на слабость, снижение аппетита, тошноту, боль.вправом подреберье, эпигастрии, кожныйзуд. Заболел остро, в течение 3 дней отмечалось повышение температуры (38-38,4),затем температура субфибрильная, беспокоили слабость, снижение аппетита, боль вправом подреберье, боль в суставах, Припоступлении состояние средней тяжести,.температура 38,2 О, умеренная желтуха кожии слизистых, гепатомегалия, пальпировалась селезенка. Пульс 90 у/мин, АД -120/80мм рт.ст, Лабораторные показатели: АлАТ -33 ммоль/ч л, билирубин - 146 мкмоль/л,сулемовый титр - 1,78 мл, тимоловая проба -4,0 ед, Соотношение составилоВГ1,18, свидетельствуя о возможном развитиитяжелой формы заболевания, Дальнейшеенаблюдение подтвердило такой прогноз, фСостояние больного прогрессивно ухудшалось, на 9 день болезни - резкая слабость,тошнота, рвота, головокружение, черныйстул. Состояние расценивалось как тяжелое, желтуха нарастала. На 10 день болезнипротромбиновый индекс снизился до 51;.Больной переведен в отделение реанимации и интенсивной терапии. В результатепроведенного лечения самочувствие улучшилось. В удовлетворительном состояниина 56 день болезни больной выписан изстационара с остаточной гипербилирубинемией,Приведенные примеры демонстрируютпреимущества предлагаемого нами способа(повышение точности диагностики, возможность прогнозирования тяжелой формыОВГ уже в ранние сроки заболевания) посравнению с прототипом,Использование изобретения позволяетдостичь следующего:1. Обеспечить прогнозирование тяжелой формы ОЕГ уже в ранние сроки заболевания,2. Повысить точность диагностики формы тяжести ОВГ.3. Обеспечить назначение своевременной и адекватной терапии в соответствии сформой тяжести заболевания,Формула изобретенияСпособ прогнозирования течения острого вирусного гепатита, включающий клиническое обследование больного илабораторный анализ крови, о т л и ч а ющ и й ся тем, что, с целью повышенияточности способа за счет более раннего про1805401 Составитель В.БарановскаяТехред М,Моргентал Корректор Н.Милюкова Редактор А,Егорова Заказ 939 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035. Москва, Ж, Раушскаянаб 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул, Гагарина, 101 гноза, в эритроцитах определяют уровень восстановленного глутатиона и активность глюкозо-б-фосфатдегидрогеназы.с последующим расчетом отношения первого показателя к второму и при значении этого отношения равном единице и более прогнозируют осложненное течение заболевания ввиде тяжелой формы.