Способ исследования нарушений в гистосовместимом почечном трансплантате

СОЮЗ СОВЕТСКИСОЦИАЛИСТИЧЕСКРЕСПУБЛИК А 1 5 ц 5 009 В 2328 ИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯВИДЕТЕЛЬСТВУ ОПИСАН К АВТОРСКОМУ АРУШЕ- ПОЧЕЧпл лы оставшиеся лоск ыря в виде узко ями обеих мочеточн ты стенок мочевого канала. зведения моделитственное непреющейся в почках через естествен- мочеиспускательпредоставляется и оценивать колиый состав выделях моделируемой ОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕЕДОМСТВО СССРОСПАТЕНТ СССР)(71) Донецкий государственный медицинский институт им, М,Горького(56) Авторское свидетельство СССР(54) СПОСОБ ИССЛЕДОВАНИЯ ННИЙ В ГИСТОСОВМЕСТИМОМНОМ ТРАНСПЛАНТАТЕ(57) Изобретение относится к медицине, аименно к экспериментальной медицине,Сущность изобретения: удаляют из реципиентного организма одну интактную почку настороне, противоположной аллотрансплантации донорской, перемещают донорскуюаллогенную почку в таз реципиента. формит соустье между реципиентным и донорИзобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к патофиэиологическим проблемам трансплантологии и предназначено для исследования механизмов отторжения пересаженной почки,Известен способ исследования функциональных нарушений в почках бесфистуль.ным методом, при реализации которого оперативным путем ликвидируют ре.,ервуар, мочевого пузыря субтотальной его резекцией, лишают культю мочевого пузыря его запирательного механизма рассечением внутреннего уретрального сфинктера и. герметично сшивают над последним и усть ским мочеточниками, определяют в моче маркеры нефроальтерации, при исчезновении которых в очередной мочевой пробе устанавливают первичное "выключение трансплантата, а при повторном их появлении - "включение" последнего. При этом анастомозируют нижний отдел реципиентного мочеточника с культей мочеточника трансплантата по типу "бок в конец", а затем при субтотальном удалении резервуара мочевого пузыря формируют герметичный канал между устьем мочеточника реципиента и внутренним отверстием уретры Йз оставшихся лоскутов стенки мочевого пузыря, при тотальном удалении резервуара мочевого пузыря формируют соустье между культей реципиентного и стенкой донорского мочеточников по типу "конец в бок", а затем герметично соединяют мочеточник трансантата с реципиентной уретрой. 2 э.п. фВ результате воспрои устанавливается беспрепя рывное выведение образу мочи во внешнюю среду ный анатомический путь - ный канал, благодаря чему возможность динамическ чественный и качественн ющейся мочи в условия патологии почек.Известен также способ экспериментального исследования нарушений в почечном трансплантате, при осуществлениикоторого перед взятием проб мочи из реципиентного организмаудаляют обе почки смочеточниками и мочевым пузырем до егошейки, пересаживают донорскую почку смочеточником на подвздошные сосуды реципиента, после чего мочеточник транс. плантата герметично соединяют смочеиспускательным каналом реципиента.Недостатком способа является то, чтоон не позволяет исследовать экскреторныепроявления и механизмы нефропатии отторжения, особенно терминальных ее стадий, поскольку нарушения азотистого иводно-электролитного баланса в условияхпрогрессирующего криза отторжения развиваются раньше, чем наступает "почечнаясмерть" трансплантата, Закономерная вэтих условиях гибель животного с единственной почкой-трансплантатом не позволяет оценить регистрируемые "на выходе"терминальные экскреторные симптомы напредмет обратимости криза отторжения,что имеет большую научно-практическуюценность. Таким образом, проведению точного и информативного исследования нефропатии отторжениягистонесовместимого почечного трансплантата препятствуют системные нарушения игибель животного-реципиента, ограничивающие исследовательскую глубину эксперимента.Цель изобретения - повышение точности и информативности исследования засчет сохранения жизни реципиента в условиях развившегося криза отторжения нефротрансплантата,Цель достигается тем, что после удаления из организма реципиента одной из интактных почек преднамеренно сохраняют вортопозиции вторую интактную почку настороне пересадки донорской аллопочки ипосле ликвидации резервуарной функциимочевого пузыря формируют соустье междуреципиентным и донорским мочеточника-ми, после чего определяют в непрерывновыделяющейся моче маркеры нефроальтерации, при исчезновении которых в очередной мочевой пробе устанавливаютпервичное "выключение" отторгающегосятрансплантата, а при повторном их.появлении - "включение" последнего,Способ осуществляется следующим об-,разом.Удаляют из реципиентного организмаодну интактную почку и пересаживают у ре-,ципиента резервуарную функцию мочевогопузыря субтотальной или тотальной его ре зекцией и формируют соустье между реципиентным и донорским мочеточниками, Герметиэируют нижеобразуемоемочеточниково-мочеиспускательное соеди 5 нение на месте ликвидированного резервуара мочевого пузыря и наблюдают непрерывное мочевыделение через уретруиз трансплантата и интактной почки. Исследуют мочевые пробы в динамике развиваю 10202530354045 50 55 щегося криза отторжения, определяя в них маркеры нефроальтерации до момента ихисчезновения из очередной порции, по которому устанавливают первичное "выключение" нефротрансплантата. В случае повторного появления маркеров нефроальтерации в выделяющейся моче диагностируют обратимое течение криза и включение" нефротрансплантата.П р и м е р 1. У беспородной собакиосуществляли забор донорской почки вследза перфузией трансплантата ин ситу через почечную артерию. "Отмытую" почку консервировали бесперфузионным методом в охлажденном до 4 СС растворе "Евроколлинз", У собаки-реципиента в период консервации донорской почки под наркозом через полную срединную лапаротомию произвели правостороннюю нефрэктомию, удалив почку с мочеточником во всю его длину,Затем субтотально резецировали мочевойпузырь вместе с устьем мочеточника удаленной почки, оставив вокруг второго устья и внутреннего отверстия уретры короткиелоскуты стенок пузыря. Затем произвели типичную гетеротопическую трансплантацию консервированной донорской аллопочки на подвздошные сосуды на стороне оставшейся интактной почки реципиента, т.е. слева. Через наружное отверстие мочеиспускательного канала ввели в восходящем направлении гибкий катетер, который далее через внутреннее отверстие провели в устье и далее в просвет левого реципиентного мочеточника, В нижней трети последнего непосредственно над концом введенного катетера продольно рассекли стенку мочеточника и вывели конец катетера наружу. Конец культи мочеточника трансплантата одели на конец катетера и продвинули его к предобразованному отверстию реципиентного мочеточника, сшив оба просвета на катетере в виде межмочеточникового соустья по типу "бок в конец" атравматичными несквозными. швами, Не извлекая катетера, над последним сшили ранее выкроенные лоскуты мочевого пузыря в виде узкого герметичного канала между устьем оставшегося левого мбчеточника и внутренним отверстием уретры, Убедившись в герметичности обоих мест соединения новообразо .с,90 некротизированных и некробиотически измененных канальцевых клеток, в связи с чем под наркозом осуществили 45 50 55 ванного мочевого тракта, катетер извлекали, тотчас получив из наружного отверстия мочеиспускательного канала капельное непрерывное мочевыделение. В выделяемой через единый канал интактной почкой и аллотрансплантатом моче ежедневно в посттрансплантацион нам периодеисследовали содержание маркеров повреждения почечной паренхимы - специфических белковых фракций, активностьнейтральной глюкозидазы и гексозаминидазы, концентрации которых по мере прогрессирования нефропатии отторжения существенно изменялись. Динамическая регистрация указанных параметров позволила установить, что "почечная смерть" трансплантата наступила на Н-е сутки, когда после прогрессирующего нарастания концентрации маркеров нефроальтерациивплоть до последней пробы, в очереднойотметили отсутствие этих веществ, что отражало "отключение" пересаженной почки как экскреторного органа. Выделяющаяся изинтактной реципиентной почки моча практически не содержала патологических примесей и по результатам анализов былаблизка к нормальной, Опытное животное при этом сохраняло относительно удовлетворительное состояние и имело признакиполного заживления операционной раныбрюшной стенки, В течение последующихсуток по повторным исследованиям порциймочи признаков "включения" зкскреторнойфункции нефротрансплантата не отметили, в связи с чем для морфологической верификации "почечной смерти" произвели транскутанную нефробиопсию трансплантата иглой ВНИИКиЭХ, При светооптическом исследовании биоптата обнаружили около трансплантатэктомию через нижний лево- сторонний трансректальный доступ. Реципиент после удаления трансплантата остался живым. Комплексное морфологическое исследование удаленного трансплантата выявило в нем все признаки, характерные для клеточного (тубуло-интерстициального) типа отторжения пересаженной аллопочки,П р и м е р 2. Забор донорской почки с мочеточником во всю его длину вместе с концевым внутрипузырным сфинктером осуществили у беспородной собаки с последующей консервацией трансплантата бесперфузионным методом в растворе "Евроколлинэ", В ходе консервации у собаки-реципиента под наркозом удалили правую почку с мочеточником во всю длину и 101520253035 мочевой пузырь вместе с юкставезикальным отделом левого мочеточника. отрезав последний ниже уровня подвздошных сосудов реципиента, Консервированную алло- почку пересадили в таз реципиенту анастомозированием ее сосудов с подвздошными. Затем в просвет мочеточника пересаженной почки в восходящем направлении до юксталоханочного его отдела ввели мочеточниковый катетер М 6, где на кончике катетера произвели продольную уретеротомию около 5 мм. Через сформированное отверстие конец катетера провели в просвет культи реципиентного мочеточника и, адаптировав оба отверстия на используемом каркасе, сформировали донорско-реципиентное межмочеточниковое соустье "конец в бок" атравматичными адвентициально-мышечными швами. В завершение воспроизведения модели конец мочеточника трансплантата с помощью второго конца используемого "каркасного" катетера внедрили в реципиентную уретру до легкого натяжения, герметизировав место стыка мочеточника трансплантата с реципиентным мочеиспускательным каналом одним рядом поверхностных кетгутовых швов. Катетер извлекли через наружное отверстие уретры и тотчас зарегистрировали наружное непрерывное мочевыделение. В посттрансплантационном периоде ежедневно исследовали пробы мочи на предмет выявления в ней маркеров нефроальтерации - специфических белковых фракций и активность нейтральной глюкозидазы и гексоэаминидазы. Наблюдаемый в динамике криз отторжения завершился "почечной смертью" трансплантата на 6 сутки, когда в очередной порции мочи исчезли резко возросшие накануне параметры маркеров повреждения почечной ткани, что указало на первичное "выключение" трансплантата. Животное оставалось при этом в относительное удовлетворительном состоянии; отмечали лишь пиретическую реакцию и легкий озноб в течение двух суток, На 2 сутки под наркозом последовательно произвели нефробиопсию трансплантата, морфологическую экспресс-диагностику жизнеспособности трансплантата и некротрансплантатэктомию, В гистопрепаратах удаленного трансплантата выявили массивную инвазию почечной стромы лимфоцитами, распространенный тубулонекроз, отечные изменения стенок артериол, на основании которых диагностировали острую нефропатию отторжения смешанного (сосудистоклеточното) типа, Сразу после некротранспиантатэктомии однопочечному реципиенту произвели ретрансплантацию1788518 Составитель А,Кот Техред М.Моргентал Редактор Корректор М.Керецман Заказ 74, Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул. Гагарина, 101 аллопочки по вышеописанной методике.Сверхострое отторжение ретрансплантированной почки спровоцировали ежедневнымвведением препарата "У" и по экскреторным знакам выделяющейся мочи к 3 суткамзарегистрировали смерть трансплантата,которую подтвердили морфологическими. иследованиями. Животное-реципиент осталось при этом живым. блатодаря наличию ворганизме собственной интактной почки,которая к этому сроку в момент ревизии исанации брюшной, полости перед ушиванием операционной раны уже имела явныепризнаки компенсаторной гипертрофии,Способ апробирован и использован приисследовании патогенетических механизмов финальных стадий нефропатии отторжения на 9 беспородных собаках самцах вДонецком мединституте.Изобретение целесообразно использовать для изучения патогенеза, а также оценки эффективности корригирующихвоздействий на течение и обратимость отторжения гистонесовместйм почечноготра нсплантата,Формула изобретения1. Способ исследования нарушений вгистосовместимом почечном трансплантате, включающий удаление из реципиентного органйзма одной интактной почки,пересадку аллогенной донорской почки втаз реципиента, ликвидацию у него резервуарной функции мочевого пузыря, восстановление непрерывности мочевыводящеготракта трансплантата формированием герметичного мочеточниково-мочеиспускательного соединения с последующим изучением в динамике проб выделяющейсяиэуретры мочи,отл ича ющий ся тем,что, с целью повышения точности и информативности исследования за счет сохране 5 ния интактной почки реципиента и егожизни в условиях развившегося кризиса отторжения нефротрансплантата удаляют интактную почку на стороне,противоположном аллотрансплантации до 10 нЪрской, формируют соустье между реципи- .ентным и донорским мочеточниками, азатем определяют в моче маркеры нефроальтерации и при их исчезновении в очередной мочевой .пробе устанавливают15 первичное "выключение" трансплантата, апри их повторном появлении "выключение"последнего,2. Способ по и. 1, отл и ч а ю щи й с ятем, что, с целью снижения травматичности20 операции при субтотальном удалении ре, зервуара мочевого пузыря, формируют соустье между нижним отделомреципиентного мочеточника и культей мочеточника трансплантата по типу "бок в ко 25 нец", а затем герметизируют соустьемочеточника реципиента с внутренним отверстием уретры лоскутами стенки мочевого пузыря,3. Способ пои. 1, отл ич а ю щи йс я30 тем, что, с целью снижения травматичностиоперации при тотальном удалении резервуара мочевого пузыря, формируют соустьемежду культей реципиентного и стенкой донорского мочеточников по типу "конец в35 бок", а затем герметично соединяют мочеточник трансплантата с реципиентной уретрой.