Способ дифференциальной диагностики саркоидоза и ревматизма

(51)5 6 01 М 33,53 РЕТЕНИЯ ИСАНИЕ ВУ ИДЕТЕЛ РС КОМУ.А. Шосуды. М.,дицине и ференци- ревматизнической ференциОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНЕДОМСТВО СССРОСПАТЕНТ СССР) 21) 4849391/1422) 09.07.9046) 23,11,92. Бюл. М 43(71) Московский научно-исследовательсинститут туберкулеза72).В.Н. Адамович, Е.И. Шмидт, Нтак и А,Р. Шихман56) Рабухин А,Е. Избранные тр1983, с. 73,54) СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДАГНОСТИКИ САРКОИДОЗА И РЕВМАТМА157) Изобретение относится к меможет быть использовано при дифальной диагностике саркоидоза има, протекающих со сходной кликартиной. Цель изобретения - диф Изобретение относится к медицине и может быть использовано при дифференциальной диагностике саркоидоза и ревматизма, протекающих со сходной клинической картиной.Дифференциальная диагностика саркоидоза и ревматизма остается до настоящего времени сложной задачей ввиду сходства клинико-рентгенологической картины двух заболеваний (Рабухин А.Е, и др 1975; А,Г. Хоменко, О. Швайгер, 1982; В.Н, Адамович и др, 1988). Оба заболевания могут проявляться артралгиями, артритом, узловатой эритемой, плевритом, перикардитом, поражением проводящей системы сердца, лимфоаденопатией. И саркоидоз, и ревматизм могут протекать с периодами обострения и ремиссии. Морфологической основой как саркоидоза, так и ревматизма является гранулема, Ошибочность диагностики саркоидоза составляет 61 - 730 ( Филиппов В.П. и ,щх, 1982; В.Н. Адамович, С,Е, Борисов,альная диагностика саркоидоза и ревматизма на ранних этапах и повышение точности диагностики. Способ осуществляется путем определения в сыворотке крови методом иммуноферментного анализа титров А-полисахарида и антител к А-полисахариду стрептококка. При наличии А-полисахарида и при титрах антител к нему выше 1,4 оптич. ед, диагностируют ревматизм; при отсутствии А-полисахарида и при титре антител к А-полисахариду меньше 1,4 оптич. ед, саркоидоз, Использование способа позволяет повысить эффективность дифференциальной диагностики, сократить время обследования больного на 2 недели, назначить адекватную терапию в более короткие сро- ки 1985). Частота поражения легких при ревматизме.достигает 44; (Ясиновский М,А, идр 1969; Саксонов С.И,. и др., 1982).Известен способ диффенциальной диагностики ревматизма путем определения антистрептолизина(АСЛв сыворотке крови (Рабухин А,Е. Избранные труды. М., 1983, с, 73). Однако указанный способ имеет ряд существенных недостатков: накопившийся международный опыт, а также данные отечественных исследователей свидетельствуют о том, что АСЛ-О 23 - 560 ь обследованных дает ложноположительные и/или ложноотрицательные и/или ложноотрицательные результаты, что значительно снижает его диагностическую ценность. Так, АСЛвыявляется в повышенном титре при таких заболеваниях, как анкилозирующий спондилоартрит, туберкулез и др. По данным ВОЗ, он был выявлен у 20 Д здоровых школьников вне связи с перенесенной стрептококковой инфекцией и приА-полисахарид сорбировали в ФБС в интер 5 вале концентраций от 0,1 до 20 мкг/мл в 20 25 30 35 50; отсутствии каких-либо проявлений ревматизма, В то же время примерно у половиныбольных ревматизмом титр АСЛостаетсянормальным, что не позволяет считать егоспецифическим и адекватным тестом диагностики ревматизма, Возможно, это связано с тем, что АСЛотражает иммунныйответ организма лишь на внеклеточный ан-тиген стрептококка, не являющийся специфичным для ревматизма. Кроме того,недостатком данного способа дифференци-альной диагностики является тот факт, чтоАСЛциркулирует в крови в течение сравнительно короткого промежутка времени,что не позволяет использовать его при поздних проявлениях ревматизма, диагностикакоторьх особенно сложна в связи с частымсубклиническим течением процесса.А-полисахарид стрептококка, в отличиеот АСЛ-О, является группоспецифическимантигейом стрептококка, отражающим иммунный ответ на антиген клеточной стенкистрептококка. что, по данным ВОЗ. (1989),имеет непосредственное отношение к патогенеэу ревматизма и позволяет рассматривать показатели сенсибилиэации кполисахариду как специфические для ревматизма, что подтверждается многочисленными исследованиями,Преимуществом данного способа является также длительная персистенция антигенов клеточной стенки (А-полисахарид) вкрови, что позволяет диагностировать ревматический процесс, развившийся в поздние сроки после перенесеннойстрептококковой инфекции, и благодаряэтому кардинально улучшить дифференциальную диагностику с саркоидозом.Комплексное определсние А-полисаха рида и антител к нему, позволяющее выя-. 4вить различные стороны иммунного ответана стрептококк. является чрезвычайно важным для своевременной диагностики различных проявлений ревматизма и решаетважную задачу дифференциальной диагностики ревматизма и саркоидоза,Целью изобретения является ранняядиагностика и повышение точности диагностики заболеваний.Способ осуществляется следующим образом, Забор крови производится из кубитальной вены в обьеме 5 мл. Далеепроводится исследование сыворотки кровиметодом иммуноферментного анализа.Подбор оптимальных концентраций 5сорбируемых антигенов осуществляется впрямой модификации ИЭА с использованием иммуноглобулиновых фракций антисывороток к А-полисахариду и клеткамстрептококка группы А типа М 29, меченнь 1 х пероксидазой хрена. Для сорбции всех антигенов использовали 96-луночные полистироловые плашки (Оупагесп, Швейцария) течение 18 ч при 4 С. Послеокончания сорбции плашки промывали Твин-ФБС и в лунки вносили соответствующие антитела, меченные пероксидазой хрена, в концентрации 250, нг/мл по пероксидазе хрена. (После промывки плашек с сорбированными микробными клетками в лунки добавляли 20% нормальную человеческую сыворотку в Твин-ФБС и инкубировали 2 ч при 37 С. Данный этап проводили для блокирования возможно присутствующих на поверхности клеток рецепторов к Гс-фрагменту 1 дО). Каждую пробу исследовали параллельно в трех лунках, Инкубацию проводили при 37 С в течение 2 ч. Сыворотки разводили Твин-ФБС. После инкубации и отмывки плашек в лунке вносили по 0,2 мл соответствующих вторичных антител, меченных пероксидазой хрена. Концентрация вторичных антител, определяемая по пероксидазе.хрена, составляла 500 нг/мл, Инкубацию проводили при 37 С в течение 2 ч, После инкубации и отмывки в лунки вносили субстрат. - 0,35% раствор о-фенилендиамина с 0,006% Н 202 в 0,1 М цитратно-фосфатном буфере, рН 5,0, и инкубировали 30 мин при 4 С в темноте, Реакцию останавливали добавлением в каждую лунку 0,1 мл 4 М серной кислоты. Оптическую плотность продукта пероксидазной реакции определяли при длине волны 490 нм на вертикальном абсорбциометре МВ или Мй(Оепатесп, Швейцария). Максимальные показатели оптической плотности продукта пероксидазной реакции отмечались при сорбции А-полисахарида - 5 мкг/мл. Эти концентрации указанных антигенов в дальнейшем были использованы во всех клиника-иммунологических исследованиях по определению антител.Оптимальное фиксированное разведение при определении антител к А-полисахаРиду 1,1000,При определении уровня антител к используемым антигенам все сыворотки от индивидуальных больных в динамике исследовали на одной плашке, одновременно на каждой плашке определяли уровень антител в эталонной сыворотке (эталоном служил пул 50 донорских сывороток).Оценку уровня антител, определяемых в ИФА, проводили с использованием двух показателей: абсолютного и относительного, Абсолютный показатель уровня антител исследуемой сыворотки рассчитывали из от 1777082ношения оптической плотности продукта пероксидазной реакции исследуемой иэталонной сывороток, взятых в одинаковом фиксированном разведении. Верхней границей нормального уровня антител считали такой уровень, ниже которого определялись 80 - 90 Д абсолютных показателей уровня соответствующих антител контрольной группы здоровых доноров. Относительный показатель уровня антител определяли как процент лиц, у которых абсолютный показатель превышал верхнюю границу нормы,Для выявления циркулирующих антигенов стрептококка группы А в сандвич-системе ИФА былииспользованы иммуноглобулиновые фракции кроличьих антисывороток к А-полисахариду стрептококка группы А, Оптимальной концентрацией сорбированных иммуноглобулинов была концентрация 5 мкг/мл.Оптимальным фиксированным разведением при определении А-полисахарида было выбрано разведение 1:10.При опред:лении циркулирующих анти- генов стрепток окка все сыворотки от индивидуальных больных в динамике исследовали на одной плашке, параллельно на каждой плашке определяли уровень соответствующих циркулирующих антигенов в эталонной сыворотке (эталоном служила сыворотка больного ревматизмом с детектируемыми антигенами стрептококка),Оценку уровня циркулирующих антигенов осуществляли по двум показателям: абсолютному и относительному, Абсолютный показатель уровня антигенов определяли из отношения оптической плотности продукта пероксидаэной реакции исследуемой и эталонной сывороток, взятых в одинаковом разведении, Средний абсолютный показатель уровня антигенов рассчитывали как среднеарифметическое абсолютных показателей больных, у которых были выявлены соответствукш ие циркулирующие антигены, Относительный показатель уровня анти- генов определяли как процент лиц, у которых выявлялись соотве ствующие анти- гены,При отсутствии А-полисэхэридэ в сыворотке крови диагностируют саркоидоэ, а при наличии А-полисахарида диагностируют ревматизм.При титре антител к Л-полисахариду, большем, чем 1,4 оптич.ед., диагностируют ревматизм, а при сохранен 1 и нормы диагностируют саркоидоз.Способ поясняется следчющими примерами.П р и м е р 1. Больная К., 28 лет (и. б М 6021), поступила в клиник 1 с жалобами на50 предлагаемому способу А-полисахаридстрептококка в сыворотке крови не обнаружен. Антитела к А-полисахариду 1,04 оптич.ед Диагостирован саркоидоз 1.Диагноз впоследствии подтвержден морфологически. Предлагаемым способом обследованы 116 больных, нуждавшихся в проведении дифференциального диагноза между саркоидозом и ревматизмом, Из них у 53 больных диагностирован саркоидоз, у 63 больнь 1 х -5 1020 25303540 сердцебиение, боли всуставах,субфебрпль нчю температуру. С 14 лет страдает ревматизмом, митральным пороком сердца. Состояние при поступлении удовлетворительное. В сердце аускультативная картина сочетанного митрального порока, недостаточности аортального клапана. В легких - дыхание с жестким оттенком, Небольшое увеличение подмышечных и передне-шейных лимфоузлов. Рентгенологически: равномерное усиление легочного рисунка. Оба корня умеренно расширены, несколько анфильтрированы. В анализе крови СОЭ - 30 ммч, Увеличение теней корней легких, увеличение периферических лимфоузловобусловили необходимость исключения саркоидоза, Проведено исследование крови по предложенному способу, А-полисахарид - ; антитела к А-полисахариду стрептококка 3,20 оптич. ед,Диагностирован ревматизм в активной фазе. Правильность установленного диагноза подтверждена эффективностью антиревматической терапий и дальнейшим динамическим наблюдением за течениемзаболевания,П р и м е р 2. Больная М., 47 лет(и.б, М 1423), поступила в клинику с жалобами на сухой кашель, субфебрильную температуру, периодические боли в грудной клетке. В детстве перенесла полиаотоит, рэсценивээшийся как ревматический. В 1988 г, появились боли в грудной клетке, субфебрильная температура, сухой кашель, Лечение антибиотиками без эффекта, Флюорографически выявлено расширениетеней корней легких. При поступлении состояние удовле гвооительное. В легких везикулярное дыхание. Короткий систологический шум а верхушке сердца, На рентгено- и томограммах грудной клетки;усиление легочного рисунка в прикорневыхотделах билатерально, в основном за счет сосудистого компонента, увеличение всех групп внутригрудных лимфоузлов. В кг инических анализах крови и мочи отклонений от нормы не выявлено. С учетом данных анамнеза проводился дифференциальный диагноз саркоидоза и ревматизма, По1777082 новного заболевания, сократить сроки пребывания больного в стационаре до уточнения диагноза на 2 недели, уменьшить общую длительность стационарного лечения и улучшить прогноз эа счет правильно назначенного лечения. Составитель М, ИвановТехред М,Моргентал Корректор Н, Ревская Редактор Заказ 4120 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101 ревматизм. Точность диагностики была подтверждена клинико-морфологическими данными.А-полисахарид стрептококка был обнаружен описанным выше способом у 92,2 О 5больных ревматизмом, причем у 23,6 О - ввысоком титре,При саркоидозе у 81,1 ф больных А-полисахарид не был обнаружен, а в высокомтитре он не был обнаружен ни у одного 10больного саркоидозом,При сравнении результатов исследования антител к. А-полисахариду у больныхсаркоидозом и ревматизмом получены достоверные различия: 1,94+ 0,17 оптических 15единиц при ревматизме и 1,03+ 0,03 оптических единиц при саркоидозе (р0,001).Предлагаемый способ позволяет провести дифференциальный диагноз саркоидоэаи ревматизма с высокой степенью достоверности (95) без осложнений для больного,помогает правильно назначить лечение осФормула изобретения Способ дифференциальной диагностики саркоидоза и ревматизма путем иммунологического исследования сыворотки крови, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности способа и ранней диагностики, в сыворотке крови с помощью иммуноферментного анализа определяют наличие А-полисахарида стрептококка и титры антител к А-полисахариду и при наличии А-полисахарида стрептококка и при титре антител к нему выше 1,4 оптических единиц диагностируют ревматизм, а при сохранении показателей нормы диагностируют саркоидоэ.