Мутаген

10 15 55 Для изучения мутагенной активности указанных химических соединений использован классический тест Эймса, основан+ный на учете числа Нз ревертантов на чашке Петри в зависимости от дозы внесенного соединения.а, а -бис-М-азиридиноалканы устойчивые, высококипящие жидкости с Ткал, 190- 220 С, Они были впервые получены реакцией а, со-диаминоалкана и 1,2-дигалогенэтана в среде 1,2-дихлорэтана или в бензоле в присутствии 50 фщелочи при 60-70 С.П р и м е р 1. а,ш-бис-ч-азиридинобутан. Мутагенная активность на бактериальной клетке Яатопеа турЫаогца ТА 1535 0,1 мл раствора а,со-бис-й-азиридинобутана заданной концентрации в воде добавляют к 2 мл О,бф -ного водного агара, содержащего 0,5 МаС, биотин и гистидин (по 10 мл 0,5 мМ раствора на 80 мл такого водного агара), 0,1 мл свежей ночной культуры бактерий Я. 1 урЬпцгаа ТА 1535 с титром 1 - 5 10 кл(мл и 0,5 мл фосфатного буфера Серенсена рН 7,4. Пробирку с этим "верхним" агаром встряхивают, перемешивая содержимое, и быстро выливают в чашку Петри на поверхность "нижнего" минимального агара, содержащего 2;4 агар с М 9 ЯОа, глюкозой и концентратом солей, После надежного застывания верхнего слоя чашки Петри переворачивают и инкубируют в термостате при 37 С 48 ч, после чего учитывают число Нз ревертантов. Для учета спонтанного фона частоты спонтанных мутаций вместо раствора мутагена в пробирку с 0,6 -ным агаром вносят 0,1 мл воды.Мутагенную активность других опытных соединений изучают в соответствии с данной методикой. Результаты исследований представлены в табл, 1,Анализ данных табл, 1 свидетельствует о том, что все изученные соединения обладают выраженным мутагенным действием, при их использовании частота индуцированных Нз ревертантов превышает спонтанные показатели в десятки и сотни раз. Наибольшую активность при этом проявляют азиридиноалканы с числом групп СН 2, равным 4 - 7. П р и м е р 2. а,ю-бис-ч-азиридинобутан. Мутагенная активность на бактериальных клетках Яагпопеа турЫацгат ТА 100 рКМ 101,Испытание мутагенной аткивности проводят аналогично методу, описанному в примере 1, но в качестве тест-объекта ис 20 25 30 35 40 45 50 пользуют штамм 5, турЬацгва ТА 100, содержащий плазмиду рКМ 101,В табл. 2 приведены результаты изучения мутагенной активности а, в-бис-М-азиридинобутана и других азиридиноалканов в отношении штамма Я. турЮтогцв ТА 100 рКМ 101.Как следует из табл, 2 и 1, зарегистрирован выдающийся мутагенный эффект соединения ряда а, в-бис-И-азиридиноалканов с и = 3 - 8; для отдельных соединений превышение спонтанного фона достигает 250 раз. Мутагенный эффект соединения с и = 12 выражен слабее,П р и м е р 3, Сравнительная мутагенная активность 1 мМ растворов а, ю-бис-М-азиридиноалканов на Я, турЬацгцт ТА 100 рКМ 101,Эксперименты проводят в соответствии с методом в примере 2, однако все соединения испытывают в эквимолярных дозах - 0,7 мМ на чашку. Результаты экспериментов приведены в табл, 3. Для сравнения изучен также 0,7 мМ азиридин.Из данных табл, 3 следует, что так и в предыдущих опытах, наибольшую активность проявили а, со-бис-М-азиридиноалканы с числом п = 4 - 8, как в абсолютных значениях количества колоний-ревертантов на чашку, так при расчете числа Нз ревертантов на 1 мМ препарата.Меньшую активность показывают соединения с числом и = 3 и 12, Однако и они являются мутагенами, так как в соответствии со стандартным тестом Эймса мутагенными считаются соединения, вызвавшие превышение спонтанного фона не менее чем в 2 раза,Таким образом, и,а-бис-й-азиридиноалканы обладают выраженным - а некоторые из них - выдающимися мутагенным эффектом на бактериальной клетке, Мутагенная эффективность соединений с и = = 4 - 8 значительно превышает эффективность известного супермутагена азиридина (этиленимина), при испытании в одной и той же генетической системе, а большая устойчивость и высокая температура их кипения в сравнении с азиридином делает практическое использования а,(дбис-М-азиридиноалканов значительно менее опасным,Формула изобретения Применение а, щ-бис-М-азиридиноалканов общей формулы М(СН 2)Щ, где и = =3 или 4, или 5, или 6, или 7, или 8, или 12, в качестве мутагена,1723125 Продолжение табл. 2 Таблица 3 Число Нз ревертантов, индуцированных а,ю-бис-йазиридиноалканами в Яатопеа турЫпагцв ТА 100рКМ 101 в расчете на 1 мМ,а - среднее из т б - за вычетом с Н.Го Реда Тираж Подписноественного комитета по изобретениям и открытиям 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 и ГКНТ СС зводственно-издательский комбинат "Патент", г, Уж ул,Гагарина, 101 аказ 1042 ВНИИПИ Госуд независимых эксперименттанного фона Составитель С.ВасильеваТехред М.Моргентал Корректор Э,Лончакова