Способ получения твердофазного носителя с тритильными группами

СОЮЗ СОВЕТСКИХсоцидлистич ескиРЕСПУБЛИК М 11 0 ОБРЕТЕНИЯ САНИ АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ(71) Московский химико-технологическийинститут им. Д.И.Менделеева и Научно-исследовательский институт медицинской знзимологии АМН СССР(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТВЕРДОФАЗНОГО НОСИТЕЛЯ С ТРИТИЛЬНЫМИ ГРУППАМИ(57) Изобретение относится к получениютвердофазных носителей, которые могут быть использованы для иммобилизации биологически активных веществ, в частности иммобилизации рестриктаз, Способ получения твердофазного носителя включает обработку твердой фазы трифенилхлорметаном в среде диметилформамида. Согласно изобретению в качестве твердой фазы используют сополимеры общей формулы гдеп,е38,2-58,силохро-СН Ф ую активтриктаз (с стабильльную ус- нические ысить сумма носителем р о позволяет п сть связанны еля. 5 таб свойства ОСУДАРСТ 8 ЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР Ж 1 б 8594 ц 5 С 07 Е 7/08, С 08 Е 212/36/ Е 212/36, 212:08, 212;14) С М составляют соответств 2 - 25,5; 64,5-17,0 мол., ил к составляют соответственно З7,4-29,5; 44,4-12,5 мол., илиформулы 750 до 3521 ед/г), повысить и ность, а также повысить бактери тойчивость и улучшить мехИзобретение относится к получению твердофазных носителей, которые могут быть использованы для иммобилизации биологически активных веществ, в частности иммобилизации рестриктаз.Цель изобретения - увеличение суммарной активности связанных рестриктаз, повышение их стабильности, а также повышение бактериальной устойчивости и улучшение механических свойств носителя.П р и м е р 1, В реакционную колбу загружают 5 г аминопропилового силохрома, содержащего 150 мМlг аминогрупп, вводят 50 мл диметилформамида, 2 г трифенилхлорметана, смесь перемешивают и выдерживают при 20 С в течение 48 ч. По окончании процесса на фильтре отделяют твердую фазу, промывают абсолютным этанолом (до отсутствия желтого окрашивания после смешивания равных объемов элюата и 70;ь ЙС 104), после че о твердую фазу сушат. Содержание тритильных групп 300 мМ г.П р и м е р 2. 8 реакционную колбу загружают 5 г силохрома, содержащего 150 мМ/г эпоксидных групп, вводят 50 мл диметилформамида, 2 г трифенилхлорметана, Реакционную смесь перемешивают и нагревают до 40 С, выдерживая при этой температуре 48 ч, далее проводя обработку, как описано в примере 1. Содержание тритильных групп 140 мМ,г,Остальные примеры приведены в табл.1. Сравнительные данные для сополимеров различного состава приведены в табл. 2,На синтезированных по предлагаемому способу носителях с тритильными групггами проведена иммобилизация рестриктаэы Есс Й 1. Результаты иммобилизации приведены в табл, 3 в сравнении с иэвестнь,м способом и опробована иммобилиэация новых видов рестриктаз Рае 1, а также ЦЛ табл. 4). Иммобилизованные 1.р 11 и Рае 1 опробованы в многократном "1 икле работы, потери активности не наблюдается, Данные о суммарной активности рестриктазы приведены в табл. 5,Как видно из табл, 1-5, наиболее эффективно иммобилизация рес риктаэ проходитна носителях, полученных по предлагаемому способу.Таким образом, предлагаемый способпозволяет повысить суммарную активность 5 связанных носителем рестриктаз до 3521ед, акт. на 1 ч. носителя), повысить их стабильность, а также повысить бактериальную устойчивость и улучшить механические свойства носителя.10 Формула изобретенияСпособ получения твердофазного носителя с тритильными группами, включающий обработку твердой фазы трифенилхлорметаном в среде диметилформамида, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью увеличениясуммарной активности связанных им рестриктаз, повышения их стабильности, а также повышения бактериальной устойчивости и улучшения механических свойств 20 носителя, в качестве твердой фазы используют сополимеры стирола и дивинилбензола общей формулы Н;СН Ф1685942 Таблица 1 вость к микзмам минопропиловый сидором, 20 С,.48 ч, ДМФФХМ стойчин не изеняет своих физнкоиэческих свойств 00 30 поксипропиловый снлором, 40 С, 48 ч, ДМФФЖ 14 80 х Аминопропиловый силохром, 10 С, 48 ч, ДМФ,ТФ:И 20 0 30 Эпоксипропиловый снлохром, 20 С, 72 ч, ДМФ,ТФИ Устойчив, не изменяет своих ФизикоЭО химических свойств 01 Аминопропиловьб силохром25 фс, 1 О ч, ДМФ, ТрО 1и"Оксифеннльный носитель20 С 48 ч, ДМФ, ТФЯМАнионит АСД-20 т,20 С 48 ч, ДМФ, ТФЗМАгароза, сафарова28-30 С, 4 6 сут, этанолпиридин, ТФХМ триэтип- -амин О То хег 0 26 Подверхе ствнв ми воздейоорганизмов 80-00 40 П р и м е ч а н н е. ДМФ - диметнлФормамид; Ф 1 П - триФенилхлорметан,б л и ц а 0,273 моль аминостирольныхзвеньев, 0,082 моль дивинилбензольных 0,645 моль стифных 0,575 моль аминостироль звеньев, 0,255 моль див бензольных О 170 моль 0,260 моль аминостироль ев, 0,025 моль дининнлб ных, 0,715 моль стироль 0,615 моль аминостироль звеньев, 0,325 моль ди бейэолъных зненъев, О, стирольных инил- стирольных ных звеньензоль 164 ныхинин60 мол 2 0,382 моль звеньев, 0 бензольных рольных оксистирольнь 174 моль диан 0444 моль а сти 0,580 моль звеньев, 0 бенэолъньпс стирольных ных ксистиро 95 мольО, 125 мо винил мино 2 . 98 0,220 моль окснстиролъныхзвеньев, 0,045 моль дивинилбенэолънык, 0735 моль аминостирол ных0735 мзвеньев0,40 мол010 мо остиролъныхолъ оксистиролнилбензольныхстирольных ь амин 050 м ми1685942 Таблица 3 Носн 1 призна Иикобнлиэована Еса Р 1 относительная активность твердой фазе63-707; потери активности в твердой фазе не наблюдается в течениемесяца; высокаа механическаа прочность 80-937; высокая устойчивостьк сжатию до 50 атм; уст йчивостьк воздействию микроорганизмовИммобилнзована Есо Р 1 относительнаяактивность по твердой Ьаэе 802;в течение нескольких часов активность заметно падает; нцэкалмеханическая прочность; низкаяустойчивость к сжатию (около2 атм); чрезвычайно подверженывоздействию 1 акроорганизмов 200-30 аминопропилэцоксиднровв едлвта Силохрвый нлиный и-Окснфеноснтел нионнт АД 3 20 т 0-100 Сефаро в 1 фвроэа блица 4 оситель эовано рестриктаэ 637 отн. акт Предлаемый Амин хром ропиповый сил 32 откт. Эпо Н отн. ак опнльный сипо 707. отакт,ро нионит АСД-20 Н отн, акт 50 Н о фенильный носии-Ок тель Таблица ел Пнлохром (исходныйаминопропиловый с лохром) 30 343 охрам (исходи кснпропнловый охром) 3504 Полимерный (исход п-оксифенильный) 2714 5 418 Сфера (прототип оставитель И,Стоехред ММоргента Корреор О,Кравцов едактор Н.Яцол аказ 3574 Тираж Подг)исное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям г)ри ГКНТ ССС 113035, Москве, Ж, Раушская наб., 4/5 изводственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул, Гагарина. 1 О 1