Питательная среда для выращивания микробактерий

(я)5 С 12 й 1/20 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ-иссле льной ательский теринарии гин, В,И. Косен и, Г.П. Головки иологическим(56) Справочник по микровирусологическим методаМ., 1982, с. 80,Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии, в частности к получению питательных сред.Целью изобретения является повышение выхода бактериальной массы и сокращение сроков культивирования.П р и м е р 1. Питательную среду для культивирования микобактерий готовят следующим образом (иэ расчета в г на 1 л). Берут навески, г/л; аммония лимоннокислого двузамещенного 1,0-6,0; калия фосфорнокислого двузамещенного 3,0-10,0; лимонной кислоты 4,0-10,0; магния серно- кислого 0,3-1,0; железа сернокислого 0,02- 0,15; цинка сернокислого 0,1-0,5, растворяют в 200-300 см дистиллированной воды, добавляют 31,8-106,2 г глицерина. Далее берут навеску ферментолизата 5,0-25,0 г, заливают дистиллированной водой (200 смэ), подогревают на водяной бане при постоянном помешивании до полного его растворения.Ы 1659472 А 1(54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ МИКОБАКТЕРИЙ(57) Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для культивирования возбудителя туберкулеза. Целью изобретения является повышение выхода бактериальной массы. Для этого в качестве основы среды используют ферментолизат дрожжей рода СапбЫа и в состав среды дополнительно вводят стимулятор роста - лизат галобактерий. Выращивание культур проводят при 37 ОС в течение 52 - 60 дней. Выход бактериальной массы при этом составил 32,4 - 42,4 г/л. 3 табл. Лиэат галобактерий готовят следующим образом. Берут 1-5 ч.биомассы галобактерий, 15 - 25 ч.физиологического раствора и гомогенизируют 15 - 20 мин, слой пены удаляют,Растворы ингредиентов и ферментолизатов смешивают, доводят дистиллированной водой до 1000 см, подщелачиаают 10-ным раствором аммиака до рН 7,0-7,4, фильтруют через бумажный фильтр, добавляют 1 - 10 см глиэата галобактерий, разливают и стерилизуют текучим паром в течение 20-30 мин.П р и м е р 2. Питательную среду готовят согласно примеру 1.Для приготовления 1 л питательной среды берут, г: ферментолиэат 5,0; аммоний лимоннокислый двузамещенный 1,0; калий фосфорнокислый двузамещенный 3,0; лимонную кислоту 4,0; магний сернокислый 0,3; железо сернокислое 0,02; цинк серно- кислый 0,1; глицерин 31,8; лизат галобакте 1659472рий 0,003, дистиллированную воду - до 1 л,Растворяют, доводят рН до 7,2, разливаютпо колбам и стерилиэуют текучим паром втечение 30 мин. Посев микобактерий проводят по общепринятой методике. Выращивают культуры в термостате при 37 С втечение 60 дней.Выход бактериальной массы для разных видов микробактерий представлен втабл. 1-3.Выход бактериальных клеток микобвктерий возбудителя туберкулеза бычьего(штамм "8"), человеческого (штамм "192") иптичьего (штамм "780") видов с 1 л питатель ной среды составил соответственно 32,4;31,7 и 36,5 г (см. табл. 1).Выход бактериальных клеток кислотоустойчивых микобактерий (штамм "18023")и атипичных микобактерий (штамм1 огсосоуп) представлен соответственно втабл. 2 и 3 и составляет 35,3 и 34,8 г с 1 лпитательной среды. При осуществлении выращивания по прототипу выход биомассысоставляет 13 г/л АСВ.П р и м е р 3, Культуру микобактерийвозбудителя туберкулеза выращивают втермостате при 37 С на питательной средеследующего состава, г/л: ферментолиэат20,0; аммоний лимоннбкислый двузамещенный 4,0; калий фосфорнокислый, двузамещенный 6,0; лимонная кислота 6,0; магнийсернокислый 0,6; железо сернокислое 0,08;цинк сернокислый 0,3; глицерин 53,1; лизатгалобактерий 0,015; дистиллированная вода - до 1 л, рН 7,4,Выоащивают культуры в термостатепри 37 С в течение 55 дней,Выход биомассы микобактерий возбудителя туберкулеза бычьего, человеческогои птичьего видов представлен в таблице 1 исоставляет соответственно 41,2, 40,9 и 41,6г/л АСВ. Выход бактериальных клеток кислотоустойчивых и атипичных микобактерийпредставлен соответственно в таблицах 2 и3 и составляет 40,4 и 39,5 г/л АСВ.При осуществлении выращивания попрототипу выход биомассы составляет 13г/л АСВ.П р и м е р 4. Возбудитель туберкулезабычьего вида выращивают в колбах на питательной среде следующего состава, г/л:ферментолиэат 25,0; аммоний лимоннокислый двузамещенный 6,0; калий фосфорнокислый двузамещенный 10,0; лимоннаякислота 10,0; магний сернокислый 1,0; железо сернокислое 0,15; цинк сернокислый 0,5; глицерин 106,2; лизат галобактерий 0,03; дистиллированная вода - до 1 л, рН 7,0.5 Выращивание культуры в термостатепри 37 С в течение 55 дней.Выход бакмассы микобактерий возбудителя туберкулеза бычьего, человеческого и птичьего видов по данным табл. 1 состав ляет соответственно 42,4; 41,8 и 43,2 г/лАСВ.Выход бактериальных клеток кислотоустойчивых и атипичных микобактерий составляет соответственно 44,1 (см, табл, 2) и 15 42,6 г/л АСВ (см. табл. 3).Таким образом, на предложенной средевыход микобактерий выше в 3 - 3,5 раза по сравнению с контролем. Согласно предложенному способу можно культивировать 20 микобактерии с приростом бактериальныхклеток на ЗО - ЗОО и заменить аспарагин на ферментолизат дрожжей рода Сапбба.Формула изобретения Питательная среда для выращивания 25 микобактерий, содержащая источник органического азота, магний сернокислый, соли цинка, железа и лимонной кислоты, калий фосфорнокислый двузамещенный, лимонную кислоту, глицерин, дистиллированную ЗО воду, о т л и ч а ю щ а я с я тем, что, с цельюповышения выхода бактериальной массы и сокращения сроков культивирования, в качестве источника азота используют ферментолизат дрожжей рода СапоЫа и лиэат 35 галобактерий, в качестве солей цинка, железа и лимонной кислоты - цинк сернокислый, железо сернокислое и аммоний лимонно- кислый двузамещенный при следующем количественном соотношении компонентов, 40 г/л:Ферментолизат дрожжейрода СапоЫа 5,0 - 25,0 Ризат галобактерий О,ООЗ - 0,03 Аммоний лимоннокислый45 двуэамещенный 1,0-6,0Калий фосфорнокислыйдвузамещенныйЛимонная кислотаМагний сернокислый50 Железо сернокислоеЦинк сернокислыйГлицеринДистиллированная водарН 7,0-7,4л- 1 нв н 1 сМ ОМОл л л л лОмолО сО ОООО л л л л Р Ю О ОО ЖЯ ИО ЧЕ О Э о1 щ 1 03 1 М РГ Щ О О с- О л а а л ФОО= РР,5 ф ФН Оа Ииь ОР ф 3я 1в ц 1фЯ Йф ;х 345О О Ж ХР О О О ЖО 3 ф С8 С Р Р ОО Э ЭОИЦООР,9 6 Э2 ж сс о иФ л Ж ф фМЕЙь 4 еВЛКЛ Ц Эф ф Р ф Э д 1 И О 1 с О 1 с Ф 1 3 Ф 1 Р 1 Э 1. Ц 1 щ О 1 ф1Таблица 2 Выход бактериальных клеток кислотоустойчивых микобактерий (штамм "18023") с 1 л питательной среды (г АСВ) 1 Образец питательной среды, г(л КонтИнгредиент роль ная, г/л 20 5,0 6,0 4,0 2,0 1,0 Т а е л и ц а 3 Выход бактериальньм клеток атипичных микобактерий (ГогсЫйоа) с 1 л питательной среды (в г АСВ) КонтОбразец питательной среды, г/л Ингредиенты рольная рг/л 1 11 111 25 20 5,0 4,0 6,0 1,0 Составитель Г.Соболева Редактор Л, Герасимова Техред М.Моргентал Корректор М.КучеряваяЗаказ 1820 Тираж 384 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул, Гагарина, 101 АспарагинФерментолизатАммоний лимоннокислый двузамещенныйКалий фосфорнокислый двузамещенныйЛимонная кислота, Магний сернокислыйЖелезо сернокислоеЦинк сернокислыйГлицеринЛизат галобактерийрНВыход бакмассы с 1 л (г) АспарагинферментолизатАммоний лимоннокислый двуэамещенныйКалий фосфорнокислый двузамещенныйЛимойная кислотаМагний сернокислыйЖелезо сернокислоеЦинк сернокислыйГлицеринПизат галобактерийрНВыход бакмассы с 1 л (г) 5,0 4,0 0,5 0,05 0,1 53,1 7,2 13,0 5,0 4,0 0,5 0,05 О,1 53,1 7,2 13,0