Способ определения степени биозараженности виноматериалов

/14 51)5 0 ГОСУДАРСТВЕННЬПО ИЗОБРЕТЕНИПРИ ГКНТ СССР КОМИТЕТИ ОТКРЫТИ НИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ У. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТЕПЕНИ БИОЗАРАЖЕННОСТИ ВИНОМАТЕРИА- ЛОВ Изобретение относится к пищевой промышленности, в частности к винодельческой, и касается идентификации происхождения пороков и повышения достоверности определения поражения молочнокислыми бактериями родаэстоЬасШцз соков и вино- материалов по готовому продукту.Целью изобретения является повышение точности определения биозараженности виноматериалов молочнокислыми бактериями рода астоЬасИ цз.Из средней пробы сока, виноматериала и вива с мышиным тоном выделяют с последующим определением качественного и количественного состава свободные аминокислоты и по концентрации орнитина судят о пути возникновения мышиного тона в результате жизнедеятельности молочнокислых бактерий рода астоЬас Ицз. Среднюю пробу образца в количестве 5 см наносят на колонну с смолой КУв Н -форме. Орнитин элюируют градиентным раствором(57) Изобретение относится к пищевой промышленности, в частности к винодельческой, и касается идентификации происхождения пороков и повышения достоверности определения поражения молочнокислыми бактериями соков и виноматериалов по готовому продукту. Цель изобретения - повышение точности определения биозарэженности виноматериала молочнокислыми бактериями родаэс 1 оЬэсИцз. Это достигается тем, что оценку проводят по концентрации орнитинэ при ее превышении 12 + 2 мг/дм в исследуемом продукте. 1 табл,аммиака: 2 М 100 см и 4 н. 200 см . Объединенный элюат упаривают досуха, перерастворяют в бидистиллированной воде и вновь д упаривают досуха,По концентрации орнитина судят о у причине возникновения порока: до 12 +з + 2 мг/дм - окислительно-восстанови- ф тельный, выше 12 + 2 мг/дм - микробиальз ный путь образования пороков. ФП р и м е р 1. Виноград белых сортов (Э перерабатывают на дробилке-гребнеотделителе, полученную мезгу прессуют. Отбирают сусло-самотек и первое давление. Сусло осветляют отстаиванием, охлаждают и после снятия с осадка спиртуют для получения спиртованного сока крепостью 16 об.0 ь спирта. Спиртованный сок хранят при 4 - 8 С в течение года. В соке при хранении образуется мышиный тон. Отбирают среднюю пробу, которую разделяют на две части. Одну часть пастеризуют и фильтруютчерез обеспложивающий фильтр, получают стерильную пробуобраэца. По 10 см исходной и стерильной пробы спиртованного сусла центрифугируют 15 мин при 3 тыс, об./мин. Центрифугат удаляют, а осадок микроскопируют, В исходном образце по.сле центрифугирования определяют в поле зрения скопление молочнокислых бактерий рода астоЬасПцв в виде тонких палочек, расположенных отдельно и в виде цепочек. В стерильной пробе не обнаруживают болезнетворные бактерии. Для провоцирования роста бактерий проводят посев образца на питательную среду с последующим термостатированием при 30 С в течение 4 - б сут, После микроскопирования стерильной пробы молочнокислые бактерии не обнаружены.По 5 см исходной и стерильной средней пробы спиртованного сока наносят на колонки со смолой КУв Н+-форме совместно с внутренним станздартом - норлейцином в количестве 0,5 см при концентрации 0,25 М и промывают дистиллированной водой объемом 300 см для удаления редуцирующих веществ Орнитин в составе свободных аминокислот элюируют градиентным раствором аммиака в концентрации 2 н. 100 см и 4 н. 200 смз. Объединенный аммиачный элюат упаривают до сухого остатка, перерастворяют в 300 см бидистилзлированной воды и вновь упаривают до сухого остатка, Операцию перерастворения сухого остатка свободных аминокислот и упаривания в воде повторяют дважды, а затем его разводят в 5 см цитратно-литиевого буферного раствора с рН 2,2.Трехкратное упаривание образца требуется для максимального удаления аммиака, который мешает определению орнитина, В порядке разделения в режиме свободных аминокислот на аминокислотном анализаторе орнитин элюируют сразу же за аммиаком. Анализ свободных аминокислот проводят на аминокислотном анализаторе. Разделение свободных аминокислот осуществляют на ионите Озтоп ЫРА. Злюирование орнитина проводят буферным раствором рН 5,0 при скорости буферного потока 14 смз/ч и нингидринового реактива 12 см /ч при температуре колонки 58 С. Определяют орнитин на 152-й минуте анализа. Количественное определение орнитина проводят по величине оптической плотности при 520 нм, которую переводят в соответствующую концентрацию (мг/дмз) по калибровочному графику.Качественный и количественный состав свободных аминокислот исходного и стерильного спиртованного сока приведен втаблице.Пастеризация образца не влияет на качественный и количественный состав сво 5 бодных аминокислот. Концентрация орнитина в обоих вариантах опытов в пределах40 мг/дм, что выше нормального содержания его в здоровом соке (1. + 2 мг/дм). Вэтом соке были обнаружены молочнокислые10 бактерии родаастоЬасИцз, В результатеих жизнедеятельности произо. чло увеличение орнитина и образовался мышиный тон.Стерильный образец не дал роста микроорганизмов,15 П р и м е р 2. Виноград сорта Траминерперерабатывают на дробилке-гребнеотделителе, полученную мезгу прессуют и отбирают сусло-самотек и первое давление,Сусло осветляют отстаиванием при охлаж 20 дении с добавлением 2 г/дал бентонитовойсуспенэии. Осветление проводят в течение18 - 20 ч и снимают с осадка, Осветленныйсок крепят до концентрации 16 об.фэтиловым спиртом и хранят в течение года, В соке25 образовался мышиный ток. Из образца отбирают среднюю пробу, которую делят надве части. Одну часть пробы пастеризуют ифильтруют через обеспл оживающийфильтр, получают стерильную пробу образ 30 ца. Исходную и стерильную пробы образцаготовят для микроскопирования и микроскопируют. Болеэнетворные микроорганизмы в обеих пробах образца не обнаружены.Для провоцирования роста бактерий прово 35 дят посев проб на питательный раствор.Пробы выдерживают в термостате при 30 Св течение 4 - б сут. По истечении этого времени в пробах образца при микроскопировании молочнокислые бактерии рода40 ас 1 оЬасШцз не обнаружены. Они не размножились, т.е, образец здоровый.Определение орнитина в исходном и пастеризованном спиртованном соке Траминер проводят следующим образом, По 5 см345 каждой пробы образца совместно с внутренним стандартом - 0,25 М раствором норлейцина в количестве 0,5 см наносят на3колонки со смолой КУв Н -форме и про+мывают 300 см бидистиллированной воды50 для удаления редуцирующих веществ. Элюирование орнитина в составе свободныхаминокислот осуществляют градиентнымраствором;100 см 2 н. и 200 см 4 н. аммизка. Аммиачный элюат упаривают до сухого55 остатка, который перерастворяют в бидистиллированной воде и вновь упаривают.Операцию перерастворения сухого остаткав бидистиллированной воде и упариванияповторяют дважды. Сухой остаток разводятв 5 см цитратно-литиевого буферного рас1654740окисл Цистеиновкислота 0,4 Аспараги 3,519,18,4 4 ки Треонин 18,лютаминова 25,8Следы 3,331,0111,292,73 кислот Глютам Пролин 9,Гли 14,00 1,74 анинтруллин 15 10 а След сти твора при рН 2,2. Для максимального удаления аммиака проводят трехкратное упаривание элюата, Аммиак мешает определению о 11 нитина. Уменьшение содержания аммиака увеличивает степень его разделе-. 5 ния с орнитином. Количественное определение орнитина проводят на аминокислотном анализаторе. Разделение свободных аминокислот осуществляют на ионите Озт 1 оп ЯЗВА, Элюирование орнитина прохо дит цитратно-литиевым буфером рН 5,0 при скорости буферного потока 14 см /ч и нингидринового реактива 12 см /ч при температуре колонки 58 С. Элюируется орнитин на 152-й минуте анализа. Концентрацию ор нитина определяют по величине оптической плотности при 520 нм, которую переводят соответствующую концентрацию тамг/дмз) по калибровочному графику.По данным качественного и количест венного состава свободных аминокислот исходной и стерильной пробы образца спиртованного сока сорта Траминер приведена концентрация орнитина в исходном и стерильном спиртованном соке практиче ски одинаковая и не превышает 10 мг/дм .з Это позволяет сделать вывод: мышиный тон образовался в этом случае, только в результате окислительно-восстановительных реакций. Концентрация орнитина в этом образце не превышает его критического содержания для виноградной ягоды.Предлагаемый способ позволяет установить наличие молочнокислых бактерий,образующих мышиный тон в резульгате своей жизнедеятельности, и обладает специфичностью определения, объективностью в оценке больших партий виноматериалов и виноградного сока. возможностью контролирования сока и виноматериалов на наличие продуктов жизнедеятельности болезнетворных молочнокислых бактерий. Благодаря высокой достоверности способа его можно использовать в качестве арбитражного метода в случае необходимости четкой идентификации причин возникновения мышиного тона.Формула изобретения Способ определения степени биозараженности виноматериалов по наличию аминокислоты.отличающийся тем,что,с целью повышения точности определения биозараженности виноматериала молочно- кислыми бактериями рода 1 астоЬас 111 цз, определение наличия аминокислоты осуществляют по концентрации орнитина в исследуемом продукте, превышающей 10 - 14 мг/дм .8 1654740 ФПродолжение таблицы МетионинЦистатионин 9,6 9,2 9,4 9,5 1,02 1,02 1,01 Изолейцин-Аминомасляннаякислота 69,4 9,42 0,86 3,8 8,86 51,04 Составитель Г,БогачеваТехред М,Моргентал Корректор М,Шароши Редактор И.Дербак Заказ 1948 Тираж 416 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-З 5, Раушская наб 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101 ЭтаноламинОрнитинЛизинГистидинАргинин 67,2 9,123,3 0,7540,4 8,56СледыСледы180,8 58,13 41,8Следы Следы 158,8