Способ культивирования грибов рода fusаriuм

СОЮЗ СО 8 ЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 650695 2 Й 1/1 ГОСУДАР СТ 8 Е ННЫ Й КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИПРИ ГКНТ СССР ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ льский институт еверо-Востока ы итоп огии,зяи- споным гри(Я С эо АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(54) СПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ГРИБОВ РОДА ЕОЯАВОМ(57) Изобретение относится к сельскохо ственной микробиологии, в частности к собу культивирования поверхност методом на жидких питательных средах бов рода Ецэагцщ. Целью изобретения является повышение выхода биомассы и Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии, в частности к способу культивирования поверхностным . методом на жидких питательных средах грибов рода Ецзапцп.Целью изобретения является повышение выхода биомассы и токсинов гриба. пособ осуществляют следующим обра На стерильный агар Чапека вносят звесь конидий грибов Ецзагцв сцаогцгп ли Ецзагцт инае, смытую стерильной воой с культуры грибов в пробирках на скотоксинов гриба, Способ культивирования грибов рода Ецзагцгп осуществляется следующим образом. На стерильный агар Чапека вносят взвесь конидий гриба Е.сцГпогцв и Е,пнае, затем на поверхности инокулированного агара размещают простерилиэованный нетонущий сухой материал в качестве которого могут быть использованы кусочки пенопласта размером 1 х 1 см, соломка длиной 3 - 5 см, просушенное зерно, пробка, дерево в количестве 5 - 8 шт. на чашку Петри. Культивируют гриб при 25 С в течение 5 - 7 дней, Полученный заспоренный не- тонущий материал вносят в жидкую питательную среду, содержащую, г/л: сахароза 30; КН 2 Р 04 1; М 9304 7 Н 20 0,5;КС 0,5; Ее 504 7 Н 20 0,01; чН 4 МОз 2; отвар ф злаковых растений - до 1 л, культивируют при 25 С в течение 15 - 20 дней. Способ позволяет получить 125-150 г влажной грибницы и увеличить фитотоксичность фильтрата культуральной жидкости. 4 табл. шенном агаре Чапека. Сразу же вслед за этим на поверхности инокулированного таким образом агара размещают простерилизоввнный сухой нетонущий материал кусочки пенопласта размером 1 х 1, соломка длиной 3 - 5 см или просушенное зерно, пробка, дерево), в количестве 5-8 шт. на чашку Петри. Культивирование грибов осуществляют в термостате при 25 С в течение 5-7 дней, Готовят стерильную жидкую питательную среду, содержащую, г/л; сахароза 30; КН 2 Р 04 1; М 95047 Н 20 0,5; КС 05; Ее 304 7 Н 20 0,01; ИН 4 МОз 2; отвар злаковых расТений - до 1 л, инокулируют ее при 1650695готовленным посевным материалом на не- тонущем материале,Культивирование грибов осуществляют, поверхностным методом в литровых колбах, содержащих 200 мл укаэанной питательной среды при 25 С в течение 15-20 дней в термостате.Максимальный выход биомассы и токсинов наблюдается к 15 - 20 дню культивирования.П р и м е р 1, В чашки Петри на стерильный агар Чапека, предварительно инокулированный спорами гриба Г.сц 1 вогцв и Г.п ча 1 е, размещают кусочки пенопласта по 5 шт. на 1 чашку Петри. Одновременно в стерильные чашки Петри вносят простерилизованное увлажненное зерно ячменя и инокулируют его взвесью конидий гриба в 1 мл физраствора,Чашки Петри с подготовленным субстратом в обоих случаях помещают в термостат при 25 С на 7 дней для культивирования грибов. За зто время на увлажненном зерне образовался налет мицелия, а нетонущий материал также оброс мицелием,Увлажненное зерно с образовавшимся на нем мицелием и заспоренный грибом нетонущий материал вносят в колбы с 200 мл жидкой питательной среды следующего состава, г/л: сахароза 30: КН 2 РО 4 1; МцЯ 04 7 Н 20 0,5; КО 0,5; ГеЗОа 7 Н 20 0,01; КМОз 2; дистиллированная вода - до 1 л, и культивируют в термостате при 25 С в течение 15 дней (по 5 колб на вариант). В случае инокуляции жидкой питательной среды культурой гриба на увлажненном зерне наблюдается погружение инокулюма на дно колбы. Наблюдения в течение всего срока культивирования показали, что гриб ни на поверхности, ни в глубине питательной среды не развивается, а культуральный фильтрат(КФ) не обладает выраженной фитотоксичностью,В колбах, инокулированных заспоренным грибом нетонущим материалом, развитие гриба на поверхности среды отмечено на третий день, а к седьмому дню культивирования мицелий гриба активно развивался и достигал своего максимума к пятнадцатому дню так же, как и уровень токсичности кулътурального фильтрата. Данные по развитию гриба и уровнютоксичности культурального фильтрата приведены в табл. 1,П р и м е р 2. Инокуляцию и культиви 5 рование гриба проводят в условиях, аналогичных примеру 1, но в жидкую питательную. среду вместо КЙОз вводят ЙН 4 МОз в количестве 2 г/л.Результаты приведены в табл. 2,10 П р и м е р 3. Инокуляцию и культивирование гриба проводят аналогично примеру 1, но в качестве основы среды используютотвар ячменя,Результаты приведены в табл. 3.15 П р и м е р 4. Инокуляцию и культивирование гриба проводят в условиях, аналогичных примеру 1, но вместо КМОз в жидкуюпитательную среду вводят йН 4 ИОз, а в качестве основы среды используют отвар яч 20 меня.Результаты представлены в табл, 4.Таким образом, использование длякультивирования грибов рода Гцзаг 1 вп нетонущего заспоренного материала для25 удержания образуемой в процессекультивирования грибной биомассы наповерхности среды и применение модифицированных жидких питательных сред ускоряют процесс развития, накопления30 биомассы гриба и усиливают фитотоксические свойства культурального фильтрата.Ф о р мул а и э о бр ете н и я35 Способ культивирования грибов родаГцзагоа, предусматривающий приготовление посевного материала на твердой питательной среде, приготовление жидкой питательной среды, содержащей, г/л: саха роза 30; фосфорнокислый однозамещенныйкалий 1; магний 0,5; хлористый калий 0,5; Ге 504 7 Н 20 0,01; соль азотной кислоты и основу среды, засев жидкой среды посевным материалом и дальнейшее культивиро вание грибов, отличающийся тем,что,с целью повышения выхода биомассы и токсинов гриба, на поверхности твердой питательной среды размещают сухой нетонущий материал, иэ солей азотной кислоты исполь эуют азотнокислый аммоний, а в качествежидкой основы среды используют отвар злаковых растений.1650695 Таблица Процент ингибирования центральногоко няСредняя длинв центрального корня, см Масса влажной грибницы, г/л Разведение Кф в дистиллированнойводе Количество зерен в опыте, шт.50 Еозаг 1 ов совогов Культура на влажном зерне Еозаг 1 ов п 1 ча 1 е Культура на влажном зерне Еозаг 1 ов со 1 вогов Культура на заспоренном нетонущемматериале Еозаг 1 ов п 1 ча 1 е Культура на заспоренном нетонущеммате иале 2,9 2,8 1;4 1;1 50 50 2,9 2,31 1:4 1:1 50 50 125 13 0 24 2,55 3,13 50 50 1;4 1:1 150 23 3,18 50 1;4 Таблица 2 Показатели массы и фитотоксической активности грибов Еозаг 1 ов на 15-й день культивированияРазведение КФ в дистиллированнойводе Средняя длина центрального корня, смВид грибов Масса влажной грибницы, г/л Количество зерен в опыте, шт.Процент ингибирования центрального ко няП иинок ля иис е ык ль ойг иба,вьэ енной на влажненном зе не 1;11:4 Еозаг 1 ов со 1 вогов 50 50 0 0 3,0 3,1 7 4 П и инок ля ии с е ы эаспо енным г ибом нетон им мате иалом Еозаг 1 ов п 1 ча 1 е 1;1 1:4 50 50 1300 2,3 2,5 29 25 Таблица 3 Показатели массы и фитотоксической активности грибов Еозаг 1 ов на 15-й день культивированияВид гриба Степень разведения КФ в дистиллированной во- е Количество зерен в опыте, шт.Масса влажной грибницы, г/л Средняя длина центрального корня, смПроцент ин- гибированияцентрального ко ня П и инок ля ии с е ы к ль й г иба, вы а енной на влажненном зе не Еозаг 1 ов со 1 вогов 1:1 1:450 50 2,6 2,9 14 4 П и инок ля ии с е ы заспо енным к ль ой г иба нетон им мате иалом Еозаг 1 ов со 1 вогов 1:1 1:450 50 2,1 3,0 48 25 Показатели массы и фитотоксической активности грибов Еозаг 1 ов на 15-й день культивирования1650695 Таблица 4 Показатели массы и фитотоксической активности грибов Ецзагйв на 15-й день культивированияВид гриба Инок ля ия к ль ой г иба, вы а анной н й питательно йс е ы азе не,жи ко г ибами нетон его мате Показатели и осле внесения заспо енного иала 160 160 Составитель Н.МцхветаридзеТехред М.Моргентал Корректор М.Демчик Редактор Н,Рогулич Заказ 1583 Тираж 379 Подписное 8 НИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 Гцзагцв сц вогцв ЕцзагЬв и ча 1 еРцзаг 1 цв сц вогцв Рцвагцв п 1 чае50 50 50 50 50 50 50 50 Масса влаж- Средняя ной грибни- длина центцы г/л рдльногокорня, см 2,6 2,5 2.5 2,7 1,793,12,73,0 Процент ингибирования центрального ко ня