Устройство для клонирования клеток животных

(5 АНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ЬСТВ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИПРИ ГКНТ СССР К АВТОРСКОМУ СВИД(56) Адамс Р. Методы культур клеток длябиохимиков. - М.: Мир, 1983, с. 88-93.(54) УСТРОЙСТВО ДЛЯ КЛОНИРОВАНИЯКЛЕТОК ЖИВОТНЫХ(57) Изобретение относится к биотехнологии, к устройствам для клонирования животных клеток. Целью изобретения является сокращение времени клонирования и повышение чистоты клона клеток. Устройство содержит емкость 1, выполненную в виде сосуда Карреля, Сосуд снабжен ампулой 3 для клеток, размещенной на пластине 2, пластина установлена в трубке 4 с торцовыми фильтрами 5 и 6. Трубка 4 состоит из двух частей, соединенных отрезком силиконовой трубки 11, Трубка 4 служит для фиксации положения пластины 2 и подвода к клеткам питательных компонентов. Устройство обеспечивает сокращение времени. получения чистого клона и не требует повторных стадий реклонирования. 3 ил,10 15 Изобретение относится к микробиологии, к устройствам для получения клонов животных клеток.Целью изобретения является сокращение времени клонирования и повышение частоты клона клеток.На фиг. 1 иэображеноустройствоссосудом Карреля, продольный разрез; на фиг. 2 - разрез А - А на фиг. 1; на фиг, 3 - узел на фиг. 2.Устройство для клонирования клеток животных содержит светопрозрачную емкость 1, выполненную в аиде сосуда Карреля, и пластину 2 для клона клеток. Сосуд Карреля снабжен ампулой 3 для клонируемой клетки, расположенной на пластине 2, светопрозрачной трубкой 4 с фильтрами 5 и 6 на торцах, Трубка 4 служит для размещения в ней пластины 2 с ампулой 3 и подвода к клеткам культуральной жидкости из внутреннего пространства сосуда Карреля через фильтр 5 и газа через фильтр 6 от источника газа(не показан). Емкость 1 снабжена также патрубками 7 и 8 с фильтрами 9 и 10 соответственно для подвода и отвода газообразных питательных компонентов. Трубка 4 состоит из двух частей, соединенных отрезком силиконовой трубки 11.Клонирование клеток а устройстве осуществляют следующим образом.Клонируемую клетку животного при помощи микроманипулятора помещают в ампулу 3, предварительно заполненную жидкой питательной средой, Ампулу 3 с клеткой размещают на пластине 2 и пинцетом помещают их, соблюдая условия асептики, в трубку 4, также предварительно заполненную питательной средой, После этого трубку 4 вставляют в емкость 1- сосуд Карреля.Клонирование с помощью данногоустройства производят следующим образом: за 24 ч до введения в ампулу 3 клонируемой клети в сосуд Карреля высевают клетки для получения фидерного слоя. Клетку для клонирования с помощью микроманипулятора помещают в ампулу 3, заполненную ростовой средой, Далее устройство собирают, как описано выше, Когда трубку 4 с ампулой 3 вставляют в сосуд Карреля, в котором к этому времени фидерные клетки находятся в логарифмической фазе роста, клонируемая клетка эа счет сообщения ростовой среды через фильтр 5 в каждый момент времени получает ростовые факторы фидерных клеток, рН среды в случае необходимости можно регулировать путем прокачивания через 20 25 30 35 40 45 50 55 фильтры 6, 9 и 10 в патрубках 4, 1, 8 СОэ или02. При достижении фидерными клетками стационарной фазы роста сосуд Карреля меняют на новый, содержащий фидерные клетки в логарифмической фазе роста. После образования. из клонируемой клетки колонии в 500-1000 клеток пластину 2переносят в малый сосуд Карреля с рабочей поверхностью 3 см, где клетки трипсинизируют и рассеивают по этому же сосуду Карреля.Использование предлагаемого устройства для получения клонов клеток животных позволяет полностью предотвратить воэможность контаминирования клона фидерными клетками или клетками из клонируемой суспензии, следовательно, отпадает необходимость реклонирования, чтосокращает время как минимум в 2 - 3 раза и обеспечивает получение чистого клона, 1,роме того, данное устройство позволяет получать клон любой наперед заданной клетки, если данная клетка обладает способностью делиться, Использование неповрежденных фидерных клеток в логарифмической фазе роста, поддержание рН на оптимальном уровне путем продува при необходимости С 02 или 02 создают оптимальные условия для роста и деления клонируемой клетки, за счет этого существенно сокращается латентный период клонируемой клетки, хотя данная характеристика и зависит от генетических особенностей самой клетки, большинство клеток при клонировании в данном устройстве начинают делиться практически сразу. Использование данного устройства позволяет легко соблюдать правила асептики, не требует специального дополнительного оборудования, например С 02 инкубатора.Ф ор мул а изобретен и я Устройство для клонирования клеток животных, содержащее светопроэрачную емкость и пластину для клона клеток, о тл и ч а ю щ е е с я тем, что, с целью сокращения времени клонирования и повышения чистоты клона клеток. емкость выполнена в виде сосуда Карреля, при этом она снабжена ампулой для клонируемой клетки, расположенной на пластине, светопрозрачной трубкой с фильтрами на торцах, служащей для размещения в ней пластины с ампулой, подвода к клеткам культуральной жидкости из внутреннего пространства сосуда и газа от источника газа, и патрубками с фильтрами для подвода и отвода газообразных питательных компонентов,1650694 Редактор Н.Рогули Корректор А.Осауленко изводственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 Заказ 1583 ВНИИПИ Го тавитель Н.Осип ред М.Моргентал Тираж 365 Подписноедарственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ ССС113035, Москва, Ж. Раушская наб., 4/5