Способ определения фагоцитарной активности нейтрофилов

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИН 14 А 1 19) 0 0 ОБРЕТЕНИЯ САН СВИДЕТЕЛЬСТ Н АТ 0 РС(53) 611.018.5,616.15 (088,8) (56) Гарибджанян Б.Г. Влияние ТИОТЗФ на фагоцитарную активность лейкоцитов крови. - Вопросы онкологии, 1964, т. Х, Р 12, с. 49-,52.Белокриницкий Д.В. Фагоцитарная активность нейтрофилов периферической крови, Лабораторные методы исследования в клинике,/Под ред,В.В.Меньшикова. - М,: Медицина, 1987, с,310- 311. ГО ИТАР 300 тыс./млдень в реакдля исслед льзуют в тот жеоцитоза. Кровьерут из пальца илистеклянную пробирксчета 20 ЕД наИзобретение и может быть и деления фагоци рофилов по отн мам в клинике Целью изобри исп ии фа относится к медицине пользовано для опреарной активности ней шению к токсоплазэксперименте.тения является повыдиагностики.соба закпючается в ильвены в стерс гепарином1 мл крови)ции.Гепарин остановки реак в де ение точности Сущность сп периферичес 0,1 мл ломе пробирку и тизированную а нтиген иготовленнои нного антиге ции развод и воды по игена инк оплазм венному антдоводят 7 С в течениеериодическом ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯПРИ ГКНТ СССР следующем.Токсоплазменный сухойреакции иммунофлуоресценв 0,5 мл дистиллированносчитывают количество токкамере Горяева. К раствогену добавляют среду 199концентрацию токсоплазм д 1)5 С 01 11 33/48, А 6(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФА Ц НОЙ , АКТИВНОСТИ НЕЙТРОФИЛОВ(57) Изобретение относится к медицин и касается вопроса определения и оценки фагоцитарной активности нейтрофилов по отношению к токсоплазмам. Целью изобретения является повышение точности диагностики. Для этого в ка честве объекта фагоцитоза нейтрофилами применяют убитые эндозоиды токсоплазменного коммерческого антигена для реакции непрямой иммунофлуоресценции (РНИФ). Наряду с классическими методами оценки фагоцитарной активЪ ности определяют индекс специфической защищенности нейтрофилов (ИСЗН), который служит дополнительным диагностическим критерием для установления наличия токсоплазменной инвазии и обоснованием к назначению коррегирующей терапий. 2 табл. Кую кровь в количестдают в полиэтиленовуюже вносится О, 1 мл исуспензии токсоплазмна, Смесь крови и анют в термостате при160 мин (2,5 ч) прилегком встряхивании.Через 40 мин инкубации забирают каплю смеси, наносят на предметное стекло и делают мазок. Смесь инкуби - руют еще 120 мин. После окончания инкубации пробирку встряхивают и из5 оставшейся смеси крови с антигеном делают мазок, Иазки сушат на воздухе, затем фиксируют в смеси Никифорова 30 мин, окрашивают по Романовскому г10 имзе или по Нохту в течение 20- 0 мин. Проводят подсчет 100 нейтроилов в световом микроскопе нри увеичении 10 х 90При просмотре мазков могут встреаться нейтрофилы с адсорбцией токсо 1 лазмы на поверхности; с фагоцитиро - ванными токсоплазмами; с разрывом леточной оболочки, распадом ядра, го пикнозом, деформированные с микоскопическим обнаружением токсоплазм,асположенных внутри клеток, а также ез паразитов.Для учета реакции в каждый из сроков подсчитывают копичество нейтро оптов с фагоцитированными токсоплазмрми на 100 просмотренных нейтрофилв (фагоцитарный индекс - ФИ как в, классическом методе); количество фЬгоцитированных токсоплазм с посЗО лдующим вычислением фагоцитарного числа (ФЧ как в классическом способе); кОличество разрушенных нейтрофилов на 160 просмотренных нейтрофилов (индЕкс разрушения - ИР).35По предлагаемому способу, помимо вычисления ФИ и ФЧ в каждый из сроков (40, 160 мин), предлагается подсчитывать индекс специфической защпценности нейтрофилов, который выра живется отношением числа просмотренных нййтрофилов (100) к сумме нейтрофилОв с фагоцитированными токсоплазмдми и разрушенных нейтрофилов в соответствующие сроки наблюдения (ИСЗН 15Фо и ИСЗНь)100 ИСЗНФИ + ИРВ табл. 1 приводятся средние значения ФИ, ФЧ, определенные по классическому методу с использованием в качестве тест-микроба стафилококка ауреус шт. 209, и по предлагаемому меоду с использованием в качестве 55 теСт- системы токсоплазменного сухого антигена для РНИФ, а также средние значения ИСЗН,Указанные параметры изучают у 11 серонегативных (группа Т-) и 12 лиц с положительными серологическими или аллергическими реакциями на токсоплазмоз (группа Т+).В каждой группе пациенты со сходной клинической картиной, обратившиеся для обследования на токсоплазмоз по поводу акушерской патологии в анамнезе, вегетососудистой дистонии, лимфоаденопатии, заболевании глаз.Из представленных данных видно, что общепринятые фагоцитарные показатели, полученные при использовании в качестве тест-микроба стафилококка, не дают четкого представления относительно характера специфической перестройки организма, зараженного токсоплазмами, тогда как большинство показателей и особенноиндексы разрушения и специфической защищенности .нейтрофилов в отношении возбудителя токсоплазмоэа позволяют четко выявить токсоплазмоэ положительных и отрицательных лиц, что особенно важно при наличии низкого титра антител, определяющихся в серологических реакциях, Эта закономерность подтверждается и данными табл. 2, где приводятся индивидуальные колебания индексов завершенности фагоцитоэа в отношении обоих тест-микробов и специфической защиты от токсоплазм.Более высокий индекс специфической защищенности нейтрофилов у токсоплазмозположительных лиц объясняется особенностью иммунных реакций при токсоплазменной инвазии: способность токсоплаэм размножаться в фагоцитах и сегментоядерных лейкоцитах, формирование иммунитета, который носит нестерильный характер, и как следствие этого процесса - защитная реакция нейтрофилов, выражающаяся в снижении фагоцитарной реакции по отношению к токсоплазмам.П р и м е р 1. Больна.я П 36 лет, обратилась в токсоплазмозный центр по поводу лимфоаденопатии, Больная в течение 4 мес обследуется и лечится у специалистов районной поликлиники.При обследовании в токсоппазмозном центре: реакция связывания комплемента (РСК), реакция непрямой иммунофлеоресценции (РНИФ) с токсоплазменными антигенами положительные 1:160 и 1:ЯО соответственно, внутри- кожная проба (ВКП) положительная ;5 16156 Фегоцитарная активность нейтрофилов: через 40 мин инкубации ФИ 40 8%, ИР 1%, через 2,5 ч 14 и 10% соответственно. Таким образом, ИСЗН = 11,1;4 оИСЗН 6 О= 4,17.На основании клинических и ла, бораторных данных установлен диагноз: токсоплазмом, подострое течение,П р и м е р 2. Больную У., 23 лет, 10 направляют на консультацию по поводу первичного бесплодия. РСК с токсоплазменным антигеном отрицательная, РНИФ положительная в титре 1;10, фагоцитарная активность нейтрофилов: ФИ 414%, ИР 4 о 14%, ФИ 18%, ИР "6 О 73%.100 Таким образом, ИСЗН =3,57, ИСЗН 1,09. Лабораторными данными диагноз токсоплазмоза не подтверждают.П р и м е р 3. Больная С., 36 лет., О обследуется в связи с безуспешным лечением вегетососудистой дистонии, В анамнезе самопроизвольный аборт. РСК с токсоплазменным антигеном положительная в титре 1 ф 10, РНИФ отри цательная, внутрикожная проба с токсоплазмином слабо положительная, фагоцитарная активность нейтрофилов: ИЗФс 1,0, ИЗфт 0,81, ИСЗН 4= 4, 17, ИСЗН 2,32. Таким образом, при завершенном характере фагоцитоза стафилококка нейтрофилами фагоцитоз токсоплазм носит незавершенный характер, низкие титры комплементсвязывающих антител в сыворотке крови. ИСЗН , равныиг35 4,17, свидетельствует о возможности инфицирования токсоплазмами. Незавершенный характер фагоцитоза токсоплазмы, снижение ИСЗН через 160 мин до 2,32 отражают сравнительно низкую защищенность нейтрофилов, На основании данных клинического и лабораторного обследований устанавливают диагноз хронического токсоплазмоза с поражением нервной системы и необходимость назначения коррегирующей терапии. 14 6П р и м е р 4, У больной А., 35 лет, периодически отмечают субфебриальную температуру, в анамнезе самопроизвольный аборт, РСК с токсоплазмозным антигеном положительная в титре 1 ф 10, РНИФ в титре 1:80," ИЗФс 1,04, ИЗФт 1,14, ИСЗН 4 о= 9,09, ИСЗН "6 О= 6,7, На основании клинических и лабораторных данных устанавливается диагноз: токсоплазмоз, латентное течение. Функциональная активность нейтрофилов на достаточно высоком уровне по всем изученным показателям, в терапии не нуждается. П р и м е р 5, Больную Б 29 лет, обследуют по поводу хориоретинита. РСК положительная в титре 1:5, РНИФ 1;80, внутрикожная проба отрицательная, Фагоцитарная активность нейтрофилов: ИЗФс и ИЗФт меньше 1 (0,88 и 0,59 соответственно), ИСЗН 4 = 7, 14, ИСЗН = 5,68, На основании клини-боческих и лабораторных данных устанавливается диагноз: хронический токсоплазмозный хориоретинит. Назначено специфическое лечение. Формула и зоб ре т ения Способ определения фагоцитарной активности нейтрофилов, включающий инкубацию биологического объекта в пробе крови с последующей обработкой полученных результатов, о т л ич а ю щ и й с я тем, что, с цельюповышения точности,в качестве биологического объекта используют токсоплазму токсоплазменного антигена для реакции иммунофлуоресценции, а при обработке результата дополнительно вычисляют индексы разрушения и специфической защищенности нейтрофилов, выражающиеся отношением числа нейтрофилов к сумме фагоцитировавших токсоплазм и разрушенных нейтрофилов. Таблица 1 ФИ через, мин Г 1 Г 30 120 40 160 65,27110,28 83,64+5,31 Стафилококк Токсоплазмы Стафил ок окк Токсоплазмы 66, 72+3,92 70, 72+4,29 Т+ Группы Тест-микробобсле-.дованных 24, 00+4, 12 13 ф 30+3 э 01 7,45+1, 23 8,46+1, 21,490,1 оксоплазмы Продолжение табл,1 н т-.ми ИР чере Группы обсле дованных 160 16 40 58,8+6,9 12,72+2,35,0510,09 47 0, 04 1,53 5,85+1,06 5,75+2,43 б л и ИЭ ИСЗН Группы Тест-микрообследо- ванных 0 мин 40 ми Стафилококк Токсоплазмы 6-2,04 1,51-3,57 Стафилококк Токсоплазмы,35-16,67 2 у 32"142 Составитель С.ПыловаРедактор И, Шулла Техред Л,Олийнык Корректор Т. Мале Заказ 3983ВНИИПИ Государстве11 8 Тираж одписное ного комитета по изо 035, Москва, Ж, Р ГКНТ ССС етениям и открытиям ишская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент". г.ужгород, ул, Гагарина,1 Группы обсле- дованны Стафилококк Токсоплазмы Стафилококк Токсоппазмы 0,68-1,65 0,30-2,03 0,86-1,300,33-1,73 ИСЗН через, мин401