Способ получения сухого ацидофильного препарата

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК щ) С 12 И 1/20 ЕН А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ . АН БССР и Всеательский инСР 2,тся к техниименно к пос риальных препарам живых клеток,ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗ(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СУХОГО АЦФИЛЬНОГО ПРЕПАРАТА(57) Изобретение относической микробиологии, алучению сухих бактетов с высоким титро Изобретение относится к технической микробиологии, а именно к получению сухих бактериальных препаратовс высоким титром живых клеток,Цель изобретения - повышение биологической ценности препарата,Способ осуществляется следующимобразом.Питательную среду, содержащую клетки молочнокислых бактерий, стерилизуют при 112-114 С с. выдержкой 2025 мин, охлаждают и при достижениитемпературы питательной среды 38-39 Синокулируют культурой ацидоильныхпалочек, например 1.асСоЬасйегып ас). -йорМ 1 пш, и выращивают микроорганизмы,оподдерживая температуру среды 38-39 Св течение 12-14 ч. Выросшая культура,80, 1561740 А 1 Целью изобретения является повышениебиологической ценности препарата, Дляполучения сухого ацидойильного препарата сывороточную среду подвергаюттепловой обработке, охлаждают до температуры заквашивания, культивируютмолочнокислые бактерии, раскисляюткультуральную среду, выделяют из неебелково-микробную массу, включающуюпенный слой, и в выдеченный пенныйслой белково-микробной массы вносятводный раствор микроэлементов - марганец, цинк, железо, медь, кобальти йод, при следующем содержании, мгна 100 г: марганец 0,4-0,5; медь 0,090,1; цинк 0,4-0,5, железо 0,7-0,8кобальт 0,06-0,08, йод 0,06-0,08.1 табл. имеет активную кислотность 120-140 Т,о Выделение белково-микробной массы из культуральной жидкости ведут методом электрофлотации, Для этого инокулированную питательную среду культурой ацидоАильных палочек с выращенными микроорганизмами пропускают через электрофлотатор. В электроФлотаторе во время электродиалиэа из культуральной жиДкости через ионообменную мембрану выделяется молочная кислота, являющаяся продуктом жизнедеятельности молочнокислых бактерий, благодаря чему снижается кислотность среды до 30-40 Т и создаются оптимальные условия для сохранения жизнеспособности клеток молочнокислых бактерий при дальнейшей их концентрации и сушке, 1581740Белково-микробная масса, выделейНая из культуральной жидкости во вре-.мя электродиализа путем флотации,образует пенный слой в электрофлотаторе, содержащий клетки молочнокислыхбактерий и молочный белок.В полученный пенный слой послеэлектрофлотации вносят водный раст-,вор, содержащий микроэлементы, обраЗуощие координационные соединенияс белками молочной сыворотки и клетками микроорганизмов.Для этого готовят водный раствор,содержащий микроэлементы - марганец,цинк, железо, медь, кобальт и иод,При следующем содержании микроэлементовна 100 г сухого препарата, мг:Марганец ,0,4-0,5Цинк 0,4-0,5 20Железо 0,7-0,8Медь О) 09-0) 1Кобальт 0,06-0,08Йод 0)06-0)08В отделенный пенный слой, содержащий белки сыворотки и клетки молочнокислых .бактерий, вносят водный раст-,вор микроэлементов и интенсивно пеоремешивают в течение 1 ч при 35-40 Си рН 5,4-5,6. После перемешивания ивыдержки в течение 1 ч и образованиикоординационных соединений микроэлементов с белками молочной сывороткии живыми клетками молочнокислых бактерий препарат высушивают на распылительной сушке при температуре возодуха.на входе 135-140 С и на выходе65-70 С,Полученный таким образом сухойацидофильный препарат представляет 40собой однородный порошок кремовогоцвета, содержащий 94-957 сухих веществ. В 1 г продукта содержится 800900 млн. жизнеспособных клеток молоч"нокислых бактерий. Препарат содержит 4570-752 белков молочной сывороткии 8-1 ОХ углеводбелковых комплексовмикробного происхождения.П р и м е р. Получение сухого ацидофильного препарата из молочной сы- Оворотки.;100 л молочной сыворотки стерилизуют при 113 С, выдерживают при этойтемпературе 25 мин, охлаждают до температуры 38 С и инокулируют культурой55ацидофильйых палочек 1 асоЬасегошасЫорЬ.1 ца. Процесс выращивания микроорганизмов длится в течение 12 чпри температуре среды. 38 С. Выросшая культура имеет активную кислотность130 Т. После выращивания микроорганизмов из культуральной жидкости выделяют белково-микробную массу с одновременным раскислением среды до .знаочения кислотности 30 Т, Для этогокультуральную жидкость пропускают через электрофлотатор, в котором происходит раскисление среды до значениякислотности 30 Т во время электродиализа с одновременным выделением изсреды путем флотации белково-микробной массы. Белково-микробная масса,содержащая клетки молочнокислых бактерий и молочный белок флотируется изкультуральной жидкости в пенный слой.Пенный слой собирается в верхней части камеры электрофлотатора) откудазахватывается скребковым транспортером и направляется в емкость дляудаления пены,Готовят 10 л водного раствора, содержащего микроэлементы - марганец,цинк, железо, медь, кобальт и йод)при следующем содержании микроэлементов на 100 г сухого препарата, мг:Марганец 0,5Цинк 0,4Железо 0,8Медь 0,09Кобальт 0,07Йод 0,06В отделенный пенный слой вносятприготовленный водный раствор микроэлементов и интенсивно перемешиваютв течение 1 ч при 35 С и рН 5,4, После перемешивания и выдержки в течение1 ч и образовании координационныхсоединений микроэлементов с белкамисыворотки и живыми клетками молочнокислых бактерий, препарат высушиваютна распылительной сушке при темпераотуре воздуха на входе 135 С и на выходе,65 С,Готовый сухой ацидофильный препарат имеет вид однородного порошка :кремового цвета. Содержание влаги,53,В 1 г препарата содержится 850 млн.жизнеспособных клеток молочнокислыхбактерий, Препарат содержит 753 белков молочной сыворотки и 97. углеводбелковых комплексов микробного происхождения.Полученный сухой ацидофильный препарат исследовали спектрофотометрическим методом с целью определениякоординационно связанных соединениймикроэлементов с белками сыворотки5 158и клетками микроорганизмов в препарате. Результаты исследований показали,что увеличение количества микроэлементов, вносимых в жидкую культуральную среду перед сушкой, не влечет засобой изменений в образовании координационных (хелатных) соединений микроэлементов с белково-микробной массой. Не вступившая в биохимическиереакции часть микроэлементов при ультрафильтрации сыворотки остается врастворе,Данные о спектрофотометрическомопределении координационно связанныхсоединений микроэлементов с белкамисыворотки и клетками микроорганизмовв препарате представлены в таблице.Как видно из таблицы, количественное внесение микроэлементов в жидкуюкультуральную среду перед сушкой поварианту 1 является оптимальным. Привнесении увеличенных доэ микроэлементов (вариант 11) в жидкую культуральную среду перед сушкой в биохимические реакции вступает только частьмикроэлементов, практически равнаяколичеству вносимых микроэлементовв культуральную жидкость по варианту 1, а не вступившая часть остаетсяв растворе, что обнаружено при ультрафильтрации сыворотки и показанов таблице.Таким образом, оптимальное количество микроэлементов, вносимое в культуральиую жидкость, необходимое идостаточное для образования биологически активных координационных соединений находятся в следующих пределах.на 100 г сухого препарата, мг.:Марганец 0,4-0,5Цинк 0,4-0,5Железо О, 7-0,8Медь 0,09-0, 1Кобальт 0,06-0,08Йод 0,06-0,08 1740 6и при дальнейшем увеличении их количеств не наблюдается изменений в образовании координационных соединениймикроэлементов с белково-микробноймассой. уменьшение количества вносимых микроэлементов сцижает биологическую активность координационныхсоединений, а следовательно, и биологическую активность координационныхсоединений, а следовательно, и биологическую ценность получаемого .препарата.Введение микроэлементов перед сушкой в пенный слоИ белково-микробноймассы обеспечивает образование сложных биологических активных комплексных соединений - хелатов, тем самымрезко повышая биологическую ценностьпрепарата,Формула изобретения 0,4-0,5 0,09-0,10,4-0,5 0,7-0,8 0106-Оэ 08 0,06-0,08 Способ получения сухого ацидофиль ного препарата, предусматривающий тепловую обработку сывороточной среды,охлаждение до температуры заквашивания, культивирование молочнокислыхбактерий, раскисление культуральнойсреды, вьщеление из нее белково-микробной массы, включающей пенный слой,и сушку, о т л и ч а ю щ и й с я темчто, с целью повышения биологическойценности препарата, перед сушкой ввьщеленный пенный слой белково-мик- .робной массы вносят водный раствормикроэлементов - марганец, цинк, железо, медь, кобальт и йод, при следующем содержании их, мг на 100 г сухого препарата:МарганецМедьЦинкЖелезоКобальтЙод1581740 Спектрофотометрическоеопределение микроэлементов в ацидофилине Качественныйсостав микВарианты приготовления водного раствора,содержащегомикроэлементы роэлементовв водномрастворе в фильтрациич/з ультрафильтр на100 мл среды,мг в сухомпрепарате Следы н Следы 11 11 0,5 0,3 0,7 0,08 0,09 Следы Составитель Н.АбрамоваРедактор М.Недолуженко Техред М,Ходанич Корректор О,Кравцова Заказ 2067 Тираж 495 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета ло изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб д, 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г,ужгород, ул. Гагарина,101 МарганецЦинкЖелезоМедьКобальтЙодМарганецЦинкЖелезоМедьКобальт. Йод Количественный состав микроэлементов в водном растворе, вносимый в жидкую среду (ацидофилин) перед сушкой из расчета на 100 г сухого препарата,мг 0,5 0,4 0,8 0,09 0,07 0,06 1 0,8 1,6 О, 16 О, 14 0,12 0,42 0,47 0,8 О;08 0,06 0,05 0,42 0,45 0,8 0,08 0,05 О, 10