Способ получения гриппозного диагностикума

)5 А 61 К 39/14 И НОМИТЕТИ ОТНРЫТИЯМ ГОСУДАРСТВЕН ПО ИЗЛБРЕТЕНИ ПРИ ГННТ СССР ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯА ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Р 2 о-ис и Го едователь дарственици- приумов. ение кии институт медицинскихим. Л.А.Таел,А.Сомик гафонова а ЕСЬег чего в апС 1 1 пЬ Ь 1 аЬ Н Маа в 1 пГ 1 цс са 1 пепла паг 1 о М 1 сго 4-57,о 1 ое об менн и иоже но-сыв нов. Морфол огическ мов елью изоб щих преи длиной 2 120 нм с ретения является повьппе сти целевого продукта. учения днагностикума за ом, что вируссодержащую жидкость (ВАБ) инактиви тои, а затем обрабатыдо значений рН среды специфичнСпособ пол инина и ючаетс ческитациисиз.генная характеа его антигеннируса гриппа Вгенной структурпа В/ЗннАрбор/ад/90/86 харак физи седимен 1,21 г/Анти оисн ал тиоля лотой руют м вают к 5,8-6,Дляектра.град/90-8обен вируШтамм В/ го с Лени о курин зараже зуют шт град/ 9 в Леп ъ гии гриамм вируО/86 Гквнградеппа ВНИИ тамм споль Ленин е под/86.ериз по ан лабораториигриппа Минздрари нг выделе этиоло тся ши(21) 4405751/30-13(71) Всесоюзный научский институт гриппаный научно-исследовастандартизации и конбиологических препаррасевича(56) Мопсо А.БСгеайтепг. оГ суре Вреп Гог СЬе Ьешацдгуоп севг. - С 11 п 11981, ч. 13, У 1, р. етение относится к медицине, к медицинской вирусологии, быть использовано в вакционоточном деле, в частности в производстве гриппозных диагностику 54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГРИППОЗНОГО ДИГНОСТИКУМА(57) Изобретение относится к медне и может быть использовано дляготовления гриппозных диагностикЦелью изобретения является повышспецифичности диагностического препарата. Способ заключается в том,что куриные эмбрионы заражают штаммомвируса гриппа В (Ленинград) 90/86,после инактивации вируссодержащейаллантоисной жидкости ее обрабатываюткислотой до рН 5,8-6,0. Полуфабрикат,осветляют центрифугированием и консервируют, 3 табл. ва СССР в январе 1986 года от больн го ребенка 8 лет и пассирован 6 раэ аллантоисной полости куриных эибрио ия. Характеризуется морфооднородностью частиц, имеюественно бобовидную форму 250 нм, диаметром 100 ружныии шипами гемагглюйраминидазы.е свойства. Коэффициент 7508 плавучая плотностьроким антигенным спектром по отношению к антителам к современным вирусам гриппа В, Ингенсивность взаимодействия с антителами еще более повышается после модификации гемагглютинина кислотой,Репродукционная активность. Инфекционные титры вируса составляют 6-9К ИЛ 60 о,ю мп, титры гемагглютининовот 1:64 до 1:512 Ь 0,2 мл с 17.-нымикуриными эритроцитами,П р и м е р 1, Куриные эмбрионызаражают 1 О ЭИД оод мп вируса гриппа В/Ленинград/90/86. Зараженные куриные эмбрионы инкубируют в течение72 ч при 31,5 ф 0,5 С. Затем эмбрионыохлаждают в течение 16 ч при 4 С ив стерильных условиях собирают ВАЖ.Титр ГА полученной ВАЖ составляет1:128. К объединенному сбору ВАЖ добавляют раствор мертиолята (20 г/л)до конечной концентрации 0,2 г/л, Инактивацию вируса проводят в течение72 ч при 612 фС. Затем стерильный раствор органической кислоты добавляютпо каплям к постоянно перемешиваемойВАЖ до рН среды 5,8-5,9 (иэ расчета291 1 мл О,1 моль/л органической кислоты на 500 мл ВАЖ).Через 30 мин инкубации ВАЖ повторно контролируют рНсреды с доведением ее до значений5,8-5,9. Материал осветляют центрифугированием прн 700 я в течение30 мин,Влияние рН среды аллантоисной жидкости на стабильность гемагглютининаи частоту диагностирования гриппа В.П р и м е р 2. Полученный жидкий.полуфабрикат диагностикума контроли 40руют на полноту инактивации инфекционности вирус а, титр ГА, специфичность,антигенные свойства. После этого материал лиофилизируют в присутствии наполнитепя. В качестве наполнителя используют подогретую до 56 ОС смесь желагина (36 г/л) и сахароэы (500 г/л) которую добавляют к полуфабрикату в соотношении 1:9. Лиофилизированный препарат диагностикума сохраняет свою гемагглютинирующую активность (титр ГА 1:128) и является специфичным в отличие от диагностикума, полученного по способу прототипу,Активность диагностикума иэ вируса В/Ленинград/90/86 в РТГА проверена при обследовании сывороток переболевших ОРЗ людей в эпидемический и межэпидемический периоды 1986-87 гг. Частота диагностирования гриппа В при использовании диагностикума иэ вируса В/Ленинград/90/86 выше, чем со штаммом В/Ленинград/369/75(прототип) в среднем на 5,6 Х.Использование предлагаемого диагностикума, обладающего более высокой специфической активностью, способствует своевременному проведению противоэпидемических мероприятий.Формула и зобр етенияСпособ получения гриппозного диагностикума, включающий заражение куриных эмбрионов штаммом вируса гриппа, их инкубацию, получение вируссодержащего материала с последующей его обработкой, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения специфичности целевого продукта, используют штамм вируса гриппа ГКВ 2125, а обработку проводят путем добавления кислоты до рН 5,8-6,0.1535543 Таблица 1 Титры ГА при обработкеВАЖ раствором кислоты астота диагностированиягриппа В при обработкеВАЖ раствором органическойкислоты рН ВАЖ неорганичес- органическойкой Опыт У 1 Опыт Ф 2В скобках приведены данные по сохранению гемагглютинирующей активности вируса гриппа В/Ленинград/90/86 поотношению к исходной ВАЖ (в Х)," Числитель - число сероконверсий к вирусу гриппа В/Ленинград/90/86, знаменатель - число исследованных парных сывороток. Тблида 2 Результаты контрола вируса гриппа В/Ленинград/90/86 н днагностикунов, попученнык нз него до аредлагаенону способу и способу-прототипу, на спеднбагчность и чувстиительность к интибнгоран а нтнт елгни ар ииьгунниик сыворогкак к вируспа В Препарат вируса гриппа ЬЛенинград/90/86 нгр антителгиперииауииыкиоспенчфнчаскик сывороткак к вир аи гриппа 4 Лаюи- Ленин- Ленин- Овииьк РР Лаба- Лаюи- Нос град град град 1976/31 8/34 ровса град 2/Ь 369 /75 262/84 90/86 (320) (640) 74/77 549/80 (32 (160) (640) (60) (160) (320) одныд игамигностнкун, полученньа 1 прадлагааиоиу способу 80 160 0 2 О 64 О серик р 4)Ьаг нос тик ученныа по способсерна2 Рототип 0 640 6 80 20 40 скобкак приведены гоиологичныт титрыЧ,8,2 6,6 6,4 6,2 6,0 5,8 5,6 5,4 5,2 5,0 64 (100) 64(100) 64(100) 64(100) 64(100) 32(50) 32(50) 16 (25) 8 (12, 5) 8(12,5) 64 (100) 64(100) 64(100) 64(100) 64(100) 64(100) 32(50) 32(50) 16(25) 8(12,5) 1/5 1/5 2/5 2/5 3/5 3/5 . 3/5 3/5 3/5 1/5 1/6 1/6 1/6 2/6 3/6 3/6 3/6 3/6 2/6 1/61535543 Таблица 3 Диагностические свойства антигенно актуального вируса гриппаВ/Ленинград/90/86 (модифицированного варианта) в сравнении сдиагностическим штаммом В/Ленинград/369/75 Период обследования Число сероконверсий кантигену ЧислоисслеОпыт Органиэация дован В/Ленин- В/Ленинград/град/369/ /90/86 М/75 ных парных сыворо ток 9 7 2 3 ЛДПЛДПЛДПЛДПЛен.Гор.СЭС 72Лен.Гор.СЭС 36Абс. число 160Х 100 12 10 18 12 Эпидемический Эпидемический Межэпидемический Межэпидемический Эпидемический 1 2 3 4 5 13 6 Эпидемический 10 46 28,7 93723,1 Всего В/Ленинград/90/86 М - вирус гриппа В/Ленинград/90/86(модифицированный варианг).ЛДП - лаборатория диагностических препаратов ВНИИ гриппа. Составитель О.ЖакетовРедакгор А,Лежнина Техред М,Дидык Корректор М.Максимилинец Тираж 531 Заказ 67 Подпис ное ВН 11101 И Государственного комитета но изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-З 5, Раушекая наб д. 4/5