Способ определения вольтарена в биологической жидкости

ЕТСНИХТИЧЕСНИХН СОЮЗ СОВСОЦИД ЛИСРЕСПУБ 146945(51)4 С 01 И 33/4 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ЬЩЕТЕЛ Н АВТОРСКОМ(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ В БИОЛОГИЧЕСКОЙ ШДКОСТ (57) Изобретение относи определения вольтарена ких жидкостях. Цель изо увеличение чувствительн У 12цинский институ тся к метоцав биологичесбретенияости способа ентюк,ределение вевольтаренащелочной что о е акци калия ий журнал, 198 ом содержа трируют пр ие прод 450-46 нмаации обавлення ть способ н послевительно л, коэффициент вар ГОСУДАРСТВЕННЫИ НОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР(56) фармацевтическВ 4, с, 46-49. Изобретение относится к медицине может быть использовано для опрееления вольтарена в биологических идкостях или лекарственных формах.Цель изобретения - повышение чувтвительности способа.Способ осуществляется следующим бразом.К пробе, содержащей вольтареи, нриавляют раствор гидроксида натрия до онечной концентрации 40-160 ммоль/л, аствор феррицианида калия до конечой концентрации 1,25- 2,5 ммоль/л, крашенный продукт фотометрируют в нтервале 30-60 мин при длине волны достигается т дут по цветно с феррицианид среде, при эт реакции регис через 30-60 ми агентов. Чувс 0,17 мкг в 1 м 1, 18 Х. 4 табл 2450-460 нм. При конечной концентрации гидроксида натрия 40-160 ммоль/л и феррицианида калия 1,25-2,5 ммоль/л, оптическая плотность окрашенного продукта существенно не изменяется в интервале 30-60 мин. При других соотношениях реактивов окрашенный продукт имеет более низкую оптическую плотность либо быстро обесцвечивается.Зависимость оптической плотности окрашенного продукта от концентрации гидроксида натрия и феррицианида калия в различные промежутки времени после прибавления реактивов приведена ,в табл. 1.1469459 Т а б л и ц а 1 Оптическая плотность после прибавления реактивов, мин Конечная концентрация, ммоль/л 60 75 феррицианид Гидроксидкалия натрия 45 30 120 1,25 1,25 О, 150 0,450 0,600 0,650 0,540 О, 180 0,600 0,655 0,630 0,510 0,400 0,550 0,610 0,610 0,480 0,540, 0,630 0,520 0,460 0,375 5,0 10,0 П р и м е ч а н и е. Конечный объем проб 3 мл, содержание вольтарена в пробе 20 мкг. Величина оптической плотности окрашенного продукта при различных длинах волн приведена в табл. 2. Максимальное поглощение окрашенного продукта вольтарена с феррицианидом калия в щелочной среде наблюдается при длине волны 450-460 нм. Таблица 2 Длина волны, Оптическая нм плотность Длина волны, Оптическая плот- ность П р и м е ч а н и е. Для исследования взята проба с содержанием вольтарена 20 мкг. 380 400 420 430 435 440 445 450 452 454 456 458 460 462 464 20 40 80 160 320 20 40 80 160 320 20 40 80 160 320 20 40 80160 320 0,020 0,220 0,450 0,590 0,620 0,060 0,410 0,650 0,660 0,590 0,280 0,500 0,630 0,630 0,550 0,480 Оьб 40 О, 540 О, 500 0,450 0,110 О, 160 0,175 О, 190 0,250 0,380 0,542 0,650 0,665 0,682 0,680 0,650 0,645 0,620 0,590 466 468 470 475 480 485 490 500 510 520 540 560 580 600 0,270 0,540 0,620 0,630 0,470 0,300 0,640 0,650 0,600 0,430 0,500 0,560 0,580 0,560 0,410 0,550 0,620 0,440 0,380 0,275 0,325 0,580 0,610 0,625 0,420 0,330 0,640 0,630 0,560 0,350 0,540 0,550 0,540 0,520 0,330 0,600 0,580 0,420 0,290 0,200 0,555 0,520 0,495 0,410 0,345 0,295 0,252 О, 178 0,135 О, 112 0,060 0,050 0,028 0,020 0,440 0,625 0,560 0,520 0,380 0,460 0,640 0,570 0,470 0,260 0,540 0,520 0,470 0,440 0,280 0,520 0,560 0,400 0,240 О, 150 0,500 0,630 0,530 0,510 0,280 0,470 0,635 0,525 0,440 0,210 0,540 0,515 0,430 0,400 0,250 0,500 0,540 01380 0,220 0,0901469459 Препарат Таблица 3 5Сравнение чувствительности предлагаемого способа определения вольта- рена с прототипом (калибровочная кривая для определения нольтарена) дано в табл. 3. Продолжение таблКоличество, мкгНайденозято0 0 0 20 20 20 ИндометацинЗуфиллинАспиринКоличество вольтаренав пробе,мкг плотности 1 О 0,5 1,0.2,55,0 10,0 15,0 20,0 30,0 40,0 50,0 0,040 0,070 О, 110 0,220 0,325 0,506 0,650 0,950 1,200 1,280 0 0 0 0 0,035 0,060 0,096 0,105 О, 124 Таблица 4 Количество, мкг Препарат Взято Найдено 0,65000 ВольтаренАнальгинАмидопирин 20 20 20 Величина оптической Прототип Предлагаемыйспособ Определение вольтарена по А.Ф,Фартушному (1983, 1984) вели следующим образом: к пробе вольтарена прибавляли 3 мп 5 Е-го раствора перйодата натрия в 75 Х растворе сернистой кислоты, Окрашенный продукт фотометрировали через 15 мин при 550 нм на спектрофотометре,Как видно из табл. 3, чувствительность предлагаемого способа выше по сравнению с прототипом более чем в 10 раз.Воспроизводимость предложенного способа определения вольтарена была изучена при параллельном определении 5 проб, содержащих по 16 мкг вольта- рена; коэффициент вариации 1,183.Специфичность способа определения вольтарена быпа проверена на лекарственных препаратах, применение которых совместно с вольтареном наиболее вероятно.Специфичность способа определения вольтарена приведена в табл. 4. 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Как следует из табл, 4, индометацин, амидопирин, эуфиллин, аспирин,анальгин не дают окрашенного продуктав условиях определения,П р и м е р 1. Определение вольтарена в инъекционном препарате.Инъекционный препарат вольтарена(фирмы Плива, Югославия, в сотрудничестве с фирмой Сиба-Гейги) разводилидиет.ллированной водой в 100 раз;О, 1 мл разведенного раствора вольтарена переносили в другую пробирку,куда прибавляли 2,5 мл О, 1 М растворагидроксида натрия и 0,5 мл 15 мМраствора феррицианида калия, Пробыперемешивали и через 30 мин фотометрировали 455 нм в кювете ка 1 см,против контроля, содержащего всереактивы, за исключением вольтарена.П р и м е р 2. Определение вольтарена в биологических жидкостях.К 1 мл плазмы крови или мочи прибавляли 4 мл 2,5 н.раствора фосфорнойкислоты и 5 мл хлороформа (1:4:5).Пробы перемешивали путем переворачивания (не допуская вспенивания) втечение 15 мин. После расслоения фазхлороформный слой переносили в другуюпробирку. К остатку прибавляли такоеже количество хлороформа и повторялиэкстракцию. Объединенные хлорофоркныеэкстракты упаривали досуха при 4060 С. К сухому экстракту вольтаренаприбавляли 2,5 мл 0,1 М растворагидроксида натрия и 0,5 мл 15 мМраствора феррицианида калия и размешивали, Через 30 мин пробы фотометрировали в кювете с длиной световогопути 1 см на спектрофотометре при455 нм, против контроля, которыйготовили сливанием 2,5 мл 0,1 Мраствора гидроксида натрия и 0,5 мл15 мМ раствора феррицианида калия.Расчет вели по калибровочной кривои.При концентрации вольтарена вплазме крови менее 1 мкг/мл можноиспользовать микрокюветы, пропорционально, уменьшив количество прибав1469459 ляемых реактивов или увеличив объемыплазмы или мочи, взятые для экстракции. Составитель В. Иитюшин Редактор И. Рыбченко Техред Й,Дидык Корректор Л. ПилипенкоЗаказ 1355/52 Тираж 788 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР,113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5,эПроизводственно-издательский, комбинат патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101 Формула изобретенияСпособ определения вольтарена в биологической жидкости путем экстракции, добавления к экстракту реагентов с последующей фотометрической регистрацией содержания продукта цветной реакции, о т л и ч а ющ и Я с я тем,что, с целью повышения чувствительности способа, в 5качестве реагентов используют гидроокись натрия в концентрации 80160 ммоль, феррицианид калия 1,252,5 ммоль, а содержание продуктацветной реакции регистрируют через30-60 мин после добавления реагентовпри 450-460 нм.