Способ определения концентрации сердечных гликозидов в растворе

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИРЕСПУБЛИК 119) 11 4 С 01 И 33/48 ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ ССО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН ОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ б ензии эритроцитов доый раствор дигитоксисп ба ют 4 на и в одну з руемый раствор. измеряют разнос об вводят анализиосле перемешивания о-исследовател укторский и те кии по тенциалэлектродо л ут источников иселектив(72) (53) ро ин м сравнения в каждои пробируют, измеряют конечнуюь потенциалов в пробах и 8) раз- ычис ПОСОБ ОПРЕДЕЛЕННЫХ ГЛИКОЗИДОВзобретение отноЦель изобретен ют прирост разности электродных потенциалов за время инкубации. Зате определяют концентрацию дигитоксина в анализируемой пробе. 1 ил., 1 таб ло гни(57) 4072848/28-1402.06.8615.1187. Бюл.Всесоюзный науч проектно-ко ический инст И.И.Сулейман 612015 (088 ИЯ КОНЦЕНТРАЦИИВ РАСТВОРЕсится к фармакоия - упрощение су рт иИзобретение относится к медицинской биологии и может быть использовано в фармацевтической промьппленности для контроля качества препаратов сер дечных гликозидов.Цель изобретения - упрощение способа за счет использования калийселективного электрода и эритроцитов кролика в качестве тест-объекта, 10П р и м е р 1. Определение концентрации уабаина в водных растворах.Определение начинают с отбора 10 мл крови из ушной вены кролика в гепаринизированную пробирку. Эритро г .циты осаждают центрифугированием при 3000 д/мин в течение 10 мин, трижДы промывают холодной инкубационной средой, содержащей, мИ: БаС. 160; КС 1 5; трис-НС 1 5, рН 7,4, удаляя супернатант и лейкоциты путем отсасывания. Затем из полученной эритроцитарной массы готовят суспензию в инкубационной среде вышеуказанного состава.Из стандартного препарата уабаина 25 готовят ряд водных растворов - от 5 х 10 до 5 х 10 И.Суспензию эритроцитов разливают по 0,49 мл в пластиковые флаконы,подходящего размера. В каждую пробу добав ляют по 0,01 мл соответствующего раствора уабаина, чтобы получить концентрационный ряд от 1 О ф до 10 " И гликозида в пробе. В одну из проб добавляют 0,01 мл анализируемого раствора. Пробы перемешивают и измеряют разность потенциалов между калийселективным электродом и электродом сравнения в каждой пробе, При этом необходимо соблюдать следующие усло вия: электрод сравнения должен быть снабжен солевым мостиком, заполненным инкубационной средой; перед каждым 1 опытом необходимо проверять крутизну электродной функции, чтобы убедиться 451 в работоспособности калийселективного электрода, для повьппения стабильности электродного потенциала измерения тре. буется проводить в термостатируемой ячейке; для контроля дрейфа потенциа лов электродной пары нужно предварять каждое йзмерение в пробе проверкой разности потенциалов в инкубационной среде.осле измерения исходной разности потенциалов в каждой пробе фпаконй с пробами помещают в термостат и инкубируют при 37 С в течение 3 ч, затем пробы вновь перемешивают и измеряют конечную разность потенциалов в пробах.Далее вычисляют прирост разностиэлектродных потенциалов за время инкубации с учетом дрейфа потенциаловдля каждой пробы. Зависимость прироста разности потенциалов от концентрации уабаина в пробе изображаютграфически в виде кривой линии. Поней определяют концентрацию уабаинав анализируемом растворе следующимобразом: находят на кривой точку, ордината которой соответствует приросту разности электродных потенциаловв анализируемой пробе (к примеру,этозначение равно 5,5 мВ ). Абсцисса этойточки, равная 2,5 х 10- М, соответствует концентрации уабаина в анализируемой пробе, а поскольку в ней анализируемый раствор разбавлен в 50 раз,то, умножая величину концентрацииуабаина в определяемой пробе на коэффициент разбавления, получают значение концентрации уабаина в анализируемом растворе, равное 1,255 х 10 И( 1 = 0,235 х 10- И, что соответствуетпогрешности способа-прототипа).П р и м е р 2. Определение концентрации дигитоксина в спиртовыхрастворах.Из стандартного препарата дигитоксина (вследствие его нерастворимостив воде , готовят спиртовые растворыс концентрацией от 1,25 х 10до 5 хх 10 8 И. Суспензию эритроцитов кролика получают таким же способом, какпри определении уабаина, затем ееразливают до 0,49 мл в пластиковыефлаконы и добавляют по 0,01 мл соответствующего спиртового раствора дигитоксина, чтобы получить концентрационный ряд от 0,25 х 10 ф до 10 п И.В одну из проб добавляют 0,01 мл анализируемого раствора. Незначительноесодержание спирта ( 2 Х по объему) втюпробах не влияет на определение дигитоксина.Дальнейшие операции (измерениеразности электродных потенциалов, инкубация проб и графическое изображение результатов проводят так же, какдля определения уабаина,Кривая, отражающая зависимостьприроста разности потенциалов электродной пары от концентрации дигитоксина в пробах, изображена на чертеже.При помощи данной кривой определяют концентрацию дигитоксина в аналиСреднеквадратическое отклонеЧисло Полученное зна опре- чение концентделе- рации (в средний нем), М Гликозид Концентрациягликозида вконтрольномрастворе, М 0,234 х 100,19 х 100,21 х 10 5 1,33 х 10 5 1,95 х 10 5 1,09 х 10Уабаин 1,25 х 10" 2,00 х 1000 х 0-4 Дигиток 2,5 1 О 1,40 х 102,80 х 10 1 0,78 х 10 5 2,71 х 105 1,38 х 10 5 2,88 х 10 0,14 х 10 0,24 х 10 ф з 1 зируемом растворе способом, указанным выше для определения уабаина..Таким же образом определяют концентрацию любого другого гликозида.Результаты контрольного определения уабаина и дигитоксина приведены в таблице. Формула изобретения Способ определения концентрации сердечных гликозидов в растворе путем измерения активности препарата 3523684К-Иаф-АТ фазы, индикаторным электродом в инкубационной среде с последующим расчетом калибровочной кривой,о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, сцелью упрощения способа эа счет сокращения числа стадий, в качестве ин"дикаторного электрода используют Кселективный электрод, а в качествепрепарата. используют эритроциты кролика, которые добавляют в инкубационную среду в количестве, обеспечиваю+ +щем насыщающую концентрацию К -Ба -АТфазы.1352368 Составитель Л.СабуроТехред М.Дидык Редактор И.Рыбченко орректо ма аказ 642 сное ВНИИП 11303 ектная,роизводственно-полиграфическое предприятие,г, Ужгород, у Тираж Государст делам изоб Москва, Ж