Способ определения гликозаминогликанов в сыворотке крови

(50 4 С 01 Н 33/4 ОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ ССС О ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫ ОПИСАН ЗОБРЕТЕНИ ЕЛЬСТВУ 284 ый дарствеИ.Исае скии гоститутвский и088.8) Ла 591. на Е.В., Косягин Д.В дело, 1982, Кф 10, с.) Каря аторно СПО НОВ ОЗАИИНО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЛИСЫВОРОТКЕ КРОВИ(57) Изобретение относится к биохимии. Цель изобретения - сокращениевремени определения при сохраненииточности способа. Сыворотку крови сдистиллированной водой центрифугируют. В надосадочную жидкость прибавляют фосфорно-вольФрамовую кислоту ссоляной кислотой и центрифугируют.Осадок растворяют, прибавляют этаноли центрифугируют. После растворенияосадка добавляют серную кислоту стетраборнокислым натрием, помещают нводяную баню и измеряют экстинкцию.Изобретение относится к медицинской химии, а именно к определениюгликозаминогликанов в сыворотке крови, и может быть использовано в диагностических целях в клинике, а такжев других областях народного хозяйства, где исследуются гликозаминогликаны (ГАГ) биологических жидкостей.Целью изобретения является сокращение времени бпределения при сохра Онекии точности способа,Способ осуществляется следующимобразом,К 1 мл сыворотки крови прибавляют3-4 мл дистиллированной воды, затемхлорную кислоту в конечной концентрации 0,53-0,62 М, через 10-15 мин центрифугируют при 3 тыс, об/мин в течение 10-15 мин. Осадок удаляют, а внадосадочную жидкость приливают фосфорно-вольфрамовую кислоту в конечнойконцентрации 1-1,27 , через 10-15 минцентрифугируют при 3 тыс, об/мин втечение 10-15 мин. Полученный осадокрастворяют в БаОН в конечной концент 25рации 0,002-0,0026 н. и дистиллированной воде до общего объема 1 мл.Далее к полученному раствору добавляют этанол до конечной концентрации66-70 . и оставляют на 40-60 мин при. 3-6 С. После выпадения осадка центрифугируют при 3 тыс. об/мин в течение 5-10 мин. Осадок растворяют в1 мл дистиллированной воды, прибавляют 5 мл коцентрированной серной кислоты (уд. вес 1,8 ХЧ), содержащей0,95 тетраборнокислого натрия крис таллического, перемешивают и помещают в водяную баню на 10 мин. Послеохлаждения в пробирку добавляют 400,2 мл 0,125%-ного раствора карбазола в 9 б -ном этаноле, далее нагревают в водяной бане в течение 10 мин ипосле охлаждения измеряют экстинкциюна КФКпри % = 540, чувствительности 1П р и м е р 1 Определение содержания ГАГ сыворотки крови донора М.К 1 мл сыворотки крови донора М. 50 добавляют 3,5 мл дистиллированной воды, затем хлорной кислоты в конечной концентрации 0,62 М, через 10 мин центрифугируют при 3 тыс. об/мин в течение 10 мин. Осадок удаляют, в надосадочную жидкость прибавляют фосфорно-вольфрамовую кислоту в конечной концентрации 1,25 . и в 2 н. НС 1, че- . рез 10 мин центрифугируют при 3 тыс. об/мин в течение 10 мин. Полученный осадок растворяют в БаОН в конечной концентрации 0,0025 н. и дистиллированной воде до общего объема 1 мл. Далее прибавляют этанол в конечной концентрации бб , перемешивают и осотавляют на 50 мин при 5 С. Осадок отделяют центрифугированием в течение 5 мин при 3 тыс. об/мин. Надосадочную жидкость сливают, а в пробирку приливают 1 мл дистиллированной воды,растворяют осадок ГАГ, прибавляют5 мл серной кислоты, содержащей0,95% тетраборнокислого натрия кристаллического, растворяют перемешивают и помешают в водяную баню 100 Сна 10 мин. Далее вынимают из бани,охлаждают до комнатной температурыи приливают 0,2 мл 0,125 -ный раствор карбазола в этаноле, повторнонагревают в водяной бане 10 мин,после охлаждения измеряют экстинкцию на КФК 2 при % = 540, чувствительности1; плотность равна 0,18, что соответствует по калибровочной кривой, построенной по глюкуроновой кислоте7,5 гамм/мл ГАГ сыворотки крови. П р и м е р 2. Определение содержания ГАГ сыворотки крови донора М. при минимальных значениях параметров. К 1 мл сыворотки крови прибавляют 3,5 мл дистиллированной воды, затем НС 10 в конечной концентрации 0,53 М, через 1 О мин центрифугируют при 3 тыс. об/мин 10 мин, осадок удаляют и в надосадочную жидкость прибавляют фосфорно-вольфрамовую кислоту в 2 н. НС 1 в конечной концентрации 1%, через 10 мин центрифугируют при 3 тыс. об/мин, полученный осадок растворяют в БаОН в конечной кон-. центрации 0,002 н. до общего объема 1 мл в дистиллированной воде. Далее к полученному раствору прибавляют этанол до конечной концентрации 66%,Ооставляют на 40 мин при 3 С, затем центрифугируют при 3 тыс. об/мин в течение 5 мин, Полученный осадок растворяют в 1 мл дистиллированной воды, приливают 5 мл конц. серной кислоты, содержащей 0,95 тетраборнокис" лого натрия кристаллического, перемешивают, помещают на водяную баню на10 мин, после охлаждения добавляют0,2 мл 0,125%-ного раствора карбаэо"ла в этаноле, помещают в водяную баню на 10 мин, охлаждают и измеряют экстинкцию на КФКпри= 540, чув1352367 Формула изобретения Составитель Е. КолмаковаТехред М.Моргентал Корректор МД 1 ароши Редактор И, Рыбченко Заказ 5559/42 Тираж 776 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР о делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж,Раушская наб д, 4/5Производственно-полиграфическое предприятие, г. ужгород, ул. Проектная, 4 ствительности 1; оптическая плотностьраствора 0,18, что соответствует7,5 гамм/мп в сыворотке крови. Способ определения гликозаминогликанов в сыворотке крови путем:обработки реактивами и этанолом с последующей фотометрией, о т л и ч а ю щ и й с я тем; что, с целью сокращения времени определения при сохранении точности способа, сыворотку крови депротеинизируют хлорной кислотой в конечной концентрации 0,53-0,62 М, а осаждение гликозаминогликанов проводят фосфорно-вольфрамовой кислотой 10 в конечной концентрации 1-1,273.