Способ оценки функционального состояния лимфоцитов

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 00 19) 80 (11 594 С 01 ХЗ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ(46) 30,07.87. Бюл, В 28 (7) Семипалатинский государственный медицинский институт(56) Малежик Л,П., Альфонсов В,В., Будажапов Д.У. Влияние тромбина на функциональную активность макрофагов и лимфоцитов. - Гематологияи трансфузиология, 1983, У 9, с. 22-27, (54) СПОСОБ ОЦЕНКИ ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ ЛИМФОЦИТОВ(57) Изобретение относится к медицине, точнее к иммунологии, Цель изобретения - упрощенце способа и определение активности выработки факторов, влияющих на свертываемость плазмы крови, Для этого из венозной гепаринизированной крови выделяют лимфооциты больного на градиенте плотности фиколл-верографина (й). Выделенные клетки двукратно отмывают от сывороточных белков средой 199, доводят до рабочей концентрации 2,0-2,5109 мл в среде 199. Проверяют жизнеспособность по трипановому синему, Предварительно берут пробу крови у трех- четырех доноров и получают безтромбоцитную плазму, записывают процесс ее свертывания на гемокоагулографе ГКГМ-02 и учитывают показатели ге-, мокоагулограммы (ГКГ); К-,К,С,МА, Е, Далее записывают ГКГ без тромбоцитной плазмы с добавлением лимфоцитов, Соотношение ингредиентов, мл: плазма 024; лимфоциты (в концентрации 2- 2,5 10/мл) 0,04; 1,297.-ный р-р хлористого кальция 0;1, общее кол-во не ф превышает 0,38 мл и обеспечивает адекватную запись процесса свертывания. Показатели процесса свертывания С, безтромбоцитной плазмы принимают за 1007, показатели записи ГКГ с лимфо- ф цитами вычисляются соответственно, 1 табл.Изобретение относится к медицине,в частности к иммунологии,Цель изобретения - упрощение способа и определение активности выработ 5ки факторов, влияющих на сЪертыэаемость плазмы кровы,Способ осуществляется следующимобразом.Иэ венозной гепариниэированнойкрови вьделяют лимфоциты больного наградиенте плотности фиколл-верографина (о). Вьделенные клетки двукратно отмывают от сывороточных белков средой 199, доводят до рабочейконцентрации 2,0-2,5 10 /мл в среде6199, Проверяют жизнеспособность потрипановому синему, Предварительнопроизводят забор крови у 3-4 донорови получают безтромбоцитную плазму по20методике Балуда. Производят запись процесса свертывания безтромбоцитнойплазмы на аппарате - гемокоагулографеГКГМ-02 - и учитывают следующие показатели гемокоагулограммы: К,К,С,МА, 25Е. Затем производят запись ГКГ безтромбоцитной плазмы с добавлением лимфоцитов. Соотношение ингредиентов следующие: 0,24 мл плазмы; 0,04 мл лимфоцитов в концентрации 2-25 10 /мл; 0,1 млЗ 01,29 -ного раствора хлористого кальция, т.е. общее количество не превышает 0,38 мл и обеспечивает адекватнуюзапись процесса свертывания.Показатели процесса свертывания35безтромбоцитной плазмы принимаются за1007., показатели записи ГКГ с лимфоцитами вычисляются соответственно.П р и м е р 1. Ребенок Г., 4 мес,Диагноз: острая левосторонняя очаговаяпневмония, токсикоз 1,ДН, течениесреднетяжелое. Диагноз подтвержденрентгенологически,Вьделяют лимфоциты из периферической крови в градиенте плотности фиколл-верографина, Отмывают от сывороточных белков дважды в среде 199 идоводят до рабочей концентрации 2,0 ".э 10 /мл. Подсчитывают жизнеспособность по трипановому синему - жизне 50способность 977. Производят записьдонорской безтромбоцитной плазмы нагемокоагулометре ГКТМ-04, для чегов кювету на 0,36 мл вливают силоконированной пипеткой 0 26 мл плазмы сохЭ55раняемой при температуре тающего льда(3-4 С) в силиконированной пробирке.Прогревают плазму в течение 1 мин идобавляют 0,1 мл 1,297.-ного раствора хлористого кальция, Запись производятс масштабом для более четкой регистрации всех параметров, Получены следующие результаты; К 61 мм; К 18 мм;С 143 мм; МА 49 мм; Е 96,07. Затемпроизводят вторую запись безтромбоцитной донорской плазмы с добавлениемлимфоцитов больного. Для этого вкювету последовательно вводят 0,24 млплазмы, 0,04 мл 2 10 /мл лимфоцитов6больного, ирогревают в течение 1 мини добавляют 0,1 мл 1,297.-ного раствора хлористого кальция и производятзапись гемокоагулограммы. Полученыследующие результаты: К 51 мм; К16 мм; С 162 мм; МЛ 50 мм; Е 100,0.Таким образом, результаты ГКГ с лимфоцитами по отношению к результатамГКГ беэтромбоцитной плазмы, принятойза 1007 следующие: К 83,6; К 88,88;С 113,26; МА 102,04; Е 104,09.Следовательно, у больного с остройпневмонией, со среднетяжелым течением в острый период болезни отмечается ускорение 1 и 11 Фазы свертывания, увеличение концентрации тромбина. В то же время лимфоциты не оказали влияние на показатель С, харак-теризующий образование фибриногена ифибринового сгустка. Этот факт подтверждается показателями МА и Е, отражающими плотность и эластичность сгустка, зависимыми в приведенных условиях только от концентрации фибриногена (плаэма баэтромбоцитная),В периоде реконвалесценции у этогоже больного Функциональное состояниелимфоцитов следующее: К 102,56 (впроцентах по отношению к донорскойплазме, принятой эа 1002), К 110,0;С 93,25; МА 109,61," Е 122,35. Т,е,показатели приближались к норме, чтосвидетельствует об изменении функциилимфоцитов в зависимости от стадииболезни.Весь процесс исследования (выделение клеток, запись ГКГ) занимает 45 ч, что значительно меньше реакциирозеткообразования (срок инкубациипри 4 С до 18 ч, реакции бласттрансоформации 48-72 ч). П р и м е р 2, Ребенок М., 1 год 3 мес. Диагноз: острая двусторонняя бронхопневмония (слева - очаговая, справа - полисегментарная), токсикоз 11, ДН; СН затяжное течение, сопутствующий диагноз - гипохромная1327002 амемия 1 ст остаточные явления рахита. Диагноз также подтвержден рентгенологически в динамике заболевания.Последовательность выделения лимфоцитов, записи ГКГ аналогична примеру 1,Полученные результаты отражены в таблице. Формула изобретения 20 Влияние лимфоцитов больного в разные стадии болезни на ГКГ донорской плазмы Стадии болезни 7 Донорс онорская каяонорсонорс- ая онорсая онорс ая я плазма++лимфоцит плазма плазма пла лазма плазлимлимфоцитыить стрый период заолевания 48 45,06,5 0 55 183 153 134 151 68,42 11 ериод улучшения 38аслоение ОРЗ и ухудшение процесса в легких 46,23 19 3,68 1 Из таблицы видно, что у больного с тяжелой пневмонией; распространенным процессом в легких в острый период заболевания лимфоциты, выделяя высокоактивные тромбопластические вещества, оказывают максимальное воздействие на 1 и 11 фазы свертывания, причем более выраженное, чем в примере 1. При данной форме пневмонии лимфоциты оказывают влияние и на генерацию фибриногена, показатели МА и свидетельствуют о недостаточной плотности и эластичности сгустка, что может быть связано с выделением лимфоцитами и фибринолитических веществ. Т.е. способ помогает раскрыть многие грани влияния лимфоцитов на процессы гемостаза.Таким образом, предлагаемый спо-. соб проще в исполнении и позволяет оценить способность вырабатывать иммунокомпетентными клетками вещества, активирующие свертывающую систему, наглядно демонстрируют зависимость их функционального состояния от фазыи тяжести заболевания. Этот фактпозволяет сопоставить клиническиеданные с функцией лимфоцитов и по их 5состоянию судить об особенностях процесса,Помимо этого запись гемокоагуло-граммы позволяет наглядно проследитьвлияние лимфоцитов на фазы свертывания, генерацию фибрина, плотность,эластичность сгустков. Предлагаемыйспособ помогает в тактике ведениябольных пневмонией, в частности определения длительности и эффективностиназначения гепарина, иммуномодуляторов, которые влияют на функциональныйстатус иммунокомпетентных клеток. Способ оценки функционального состояния лимфоцитов, включающий выделение лимфоцитов из венозной крови,о т - л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью 25 упрощения способа и определения активности выработки факторов, влияющих на свертываемость плазмы крови, лимфоциты вводят в цитратную плазму крови донора, осуществляют запись З 0 гемокоагулограммы и оценивают функциональное состояние лимфоцитов по изменению продолжительности периодов генерации тромбопластина (К) и образования тромбина Ь) на гемокоагулограмме.327002 Продолжение таблицы Стадииболезни Донорская Донорская Донорская плазма, Острый период заболевания . 83,6 65 45 69,23 185,1 41,81 44,05 43 91 е 48 88 э 67 75 ф 43 85 ф 063 Период улучшения 112,68 47 55 105,7 108,33 122,2 112,8 Составитель В, Фролова Редактор М. Петрова . Техред И.Попович Корректор Н, КорольЗаказ 3382/40 Тираж 776 ПодписноеВНИЙПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно"полиграфическое предприятие, г, Ужгород, ул. Проектная, 4 Донорскаяплазма Наслоение ОРЗ иухудшение йроцесса в легких - 121,58 52 плазма+