Способ размножения чая

СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИН 9) Л аи 4 А 0 Н 30 ПИСАНИЕ ИЗОБРЕ ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ЕНИ вательскии мса и Все- объединекультурам . Мезенцев ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ(54) СПОСОБ РАЗМНОЖЕНИЯ ЧАЯ 1 Я ИТКО(57) Изобретение относится к сельскому хозяйству. Цельк) изобретения является оздоровление исходного материала лля размножения при сохранении его жизнеспособности. Вычленяют эксплантанты и помещают их в водный раствор, содержащий 1,5 - .,0 перекиси водорода и 50 - 60% этанола на 10 - 15 с. Затем эксплантанты помецают в 0,05 - 0,20 о-ный водный раствор диоцида на 5 - 10 мин. Зксплантанты культивируют при люминесцентном освещении 3000 лк, 16-часовом фотопериоле и 241 С. 4 табл.1311673 Стерилизующий Концентрация Экспозиция, Инфициро- Жизнесповодный раствор стерилента, мин ванность, собность,7 по объему 7. 7 Перекись водорода 85,4 97,1 Перекись водорода 2,0 96,4 73,2 6,0 71 э 7 15 51,6 12,0 48,1 54,8 15 50 79,2 81,3 Этанол 60 68,4 76,8 52,7 70 63,6 58,3 57,5 96,4 72,5 Дионид 69,6 95,1 10 0,1 0,2 67,2 96,3 0,2 44,1 90,7 Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано в селекции и семеноводстве, в исследованиях по фитопатологии и морфогенезу растений. Цель изобретения - оздоровление исходного материала для размножения при сохранении его жизнеспособности.Пример, Проводится размножение и оздоровление чая сорта Грузинский6, Неодревесневшие побеги стерилизуют 12 с в растворе, содержащем по объему 1,5% перекиси водорода и 50% этанола (остальное вода), а затем 6 мин в 0,1 %-ном водном растворе диоцида. При этом от 1000 фрагментов с почками получают 937 эксплантаПоложительный эффект достигается только при последовательном применении двух стерилизующихся растворов: перекиси водорода с этанолом и диоцида, При этом оптимальные концентрации составляют для перекиси водорода 1,5 - 2,0%, этанола 50 - 60%, диоцида 0,05 - 0,2%, а экспозиция для первого стерилизующего раствора составляет 10 - 15 с, для второго 5 - 10 мин или 300 - 600 с (табл. 2). При уменьшении концентрации стерилентов выход асептического материала значительно снижается, а жизнетов, свободных от фитопатогенной инфекции, т. е, инфицированность составляет всего 6,3%. Жизнеспособность неинфицированных эксплантатов, которая определяется по от сутствию повреждений, вызванных стерилентами, и способности к пролиферации, составляет 92,7% (из 937 эксплантатов 869 жизнеспособны). При стерилизации черенков отдельными стерилентами (перекисью 10 водорода, этанолом и диоцидом) в рекомендуемых дозах и экспозициях получить достаточное количество неинфицированного жизнеспособного материала не удается,Данные о влиянии отдельных стерилентов на инфицированность и жиэнеспособ ность эксплантатов чая приведена в табл. 1.Таблица 1 способность эксплантатов практически не увеличивается. Повышение концентрации 50 стерилентов или увеличение времени выдерживания черенков в стерилиэующих растворах приводит к резкому снижению жизнеспособности эксплантатов без существенного увеличения выхода асептического материала.Данные о влиянии концентрации и экспозиции двух стерилизующих растворов на инфицированность и жизнеспособност эксплантатов чая приведены в табл. 2.Концентрациястерилента,Х по объему 1 О 2,0 1. Перекись водорода + + этанол 90,2 3,5 60,0 300 0,2 Диоцид 12 1,75 2. Перекись водорода + + этанол 91,0 4,2 55,0 450 0,12 Диоцид 15 1,5 3. Перекись водорода + + этанол 91,3 50,0 600 0,1 Диоцид 12 1,5 4, Перекись водорода + + этанол 95,3 9,1 50,0 360 0,05 Диоцид 1,0 12 5, Перкись водорода + + этанол 98,4 53,2 40,0 360 0,03 Диоцид Таблица 3 Концентрация ВАП, мг/л Показатели 0,1 0,3 0,5 1,0 1,5 2,0 Не об- разуются 9 1 44 35 37 45 Срок образованиярозеток почек, сут Среднее количествопочек в розетке 18 5 фЗ 5 ф 8 5 ф 44 вЗ Срок образования розеток из почек, сут 22 20 15 24 30 Среднее количество побегов на 1 эксп 1,6 5,1 5,7 5,2 4,1 лантат Стерильные эксплантаты культивируют в пробирках с агаризованными средами МЬ, В 5, ЯХ, в которых концентрацию сахарозы доводят до ЗО г/л, а рН до 5,5, В среды В 5 и БН, не содержащие нитрата аммония, добавляют его в количестве 0,25 г/л. В качестве фитогормона используют БАП в концентрации 1 мг/л. При снижении его концентрации увеличиваются сроки образования адвентивных почек и уменьшается их количество (табл. 3). Увеличение концентЗ 5 рации БАП приводит к ингибированию развития побегов из почек.Данные о влиянии различных концент.раций БАП на морфогенез в культуре чая приведена в табл, 3.1311673 таблн ца 4 Показатели зффективнос:ти известный предлагаемый Расход исходных черенков на получение 1000 саженцов Коэффициент размноженгггг за 4 месяца 333 0,9 Потрсбггость в тел:гичнойлгощади, м 1,2 12,0 Стоикгостг ггодготовки почвы, руб 9,0 Сгоггмость дитэтеггьныхсред, руб 6,3 Расход зггектрозггергии,кит ч 240 1062 Затраты труда, человекодней 12 Фор,чула изобретения Составитель С. Куваева Редактор О. Ьугир Техред И. Верес Корректор М. Шароши Заказ 1833 а 2 Гираж 530 Подписное Г 311 ИИПИ Государственного комитета СГСР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, 2 К -35, Рвунская наб., д. 45 Госгизводственно.полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. 11 роектная, 4Зксплантать 1 культивируют при люминесцентном освещении 3000 лк. При освещении ниже 2000 лк почкованис замедляется на 23 недели, а при освещенности выше 4000 лк развитие побегов из почек ингибируется. Эксплантаты культивируют при 16- часовом фотопериоде (8 ч темнота), При 1214 ч/сут. фотопериоде образование почек и развитие из них побегов замедляется на 15 - 20 дней, а при фотопериоде более 18 ч/сут различий в почковании и развитии побегов по сравнениго с 16 - 18 ч/сут фото- периодом не отмечается, однако расход электФрагменты с почками помещают для дальнейшего размножения на питательные среды того же состава. Во втором цикле выращивания (50 сут) каждый эксплантат также образует по 5 - -6 побегов. Всего за 100 дней культивирования от каждого исходного эксплантата получают в среднем по 162 побега. Не выявляются существенные различия в почковании и развитии побегов при использовании питательных сред различного состава (Вв, М 5, 5 Н).Для получения растений побеги пересаживают на питательные среды без БАП, где они в течение 3 недель укореняются и образуют по 4 - 5 листьев. Затем полученные растения высаживают в почву, укрывают на 2 недели полиэтиленовой пленкой и после этого выращивают в обычных условиях. роэнергии сугцественно повышается. Зксплантаты инкубируют при 24-1 С. При температуре ниже 22"С развитие почек и побегов замедляется на 10 - 14 дней, а при температуре ниже 16 С полностью прекращается. Температура выше 28 С ингибирует развитие почек и побегов, а при 32 - 34 С эксплантаты погибают. Сравнительная характеристика эффективности размножения чая традиционным и предлагаемым способом (в расчете на 1000 саженцев) приведена в табл. 4. Растения нормально растут и развиваются, свободны от фитопатогенной инфекции и морфологически не отличаются от исходного клона. Способ размножения чая п У 11 го, включающий вычленение эксплантатов, их стери-.лизацию и культивирование на питательной среде, отлаиагощийся тем, что, с целью оздоровления исходного материала для размножения при сохранении его жизнеспособности стерилизацию эксплантатов осуществляют путем их помещения в водный раствор, со держащий 1,5 - 2,0% перекиси водородаи 50 - 60% этанола, на 10 - 15 с, а затем в 0,05 - 0,20%-ный раствор диоцида на 5 10 мин.