Способ замораживания спермы птиц

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 1368 ЯО д) А 61 Р 7/02 ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ А ВТОРСНОМ ИДЕТЕЛЬСТ атов и сследователетики сель твоССС1976,о СССР1980 ( тоОРАЖИ ВАНИ Я щий разбавлеГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРпо делАм изОБРетений и ОткРытий(71) Всесоюзный научнокий институт разведения и ге хозяйственных животных (53) 636.082.453.5 (088.8) (56) 1. Авторское свидетель656621, кл. А 61 Р 7/02,2. Авторское свидетельст912165, кл. А 61 Р 7/02 тип).(54) (57) СПОСОБ ЗАМ СПЕРМЫ ПТИЦ, включаю ние спермы, охлаждение, эквилибрацию с криопротектором, замораживание в емкостях и последующее хранение спермы в жидком хладоагенте, отличающийся тем, что, с целью повышения оплодотворящей способности спермы, замораживание . осуществляют в морозильной камере путем вращения емкости в горизонтальном положении вокруг продольной оси со скоростью 6 - 12 об/мин при температуре в морозильной камере (-60) в (-75)С в течение 165 в 1 с, с последующим введением в морозильную камеру паров азота в течение 45 - 65 с, причем сперму в емкость вносят в количестве, обеспечивающем толщину слоя спермы при вращении 0,1 - 1,0 мм. аЮ50 55 111Изобретение относится к разведению сельскохозяйственных птиц, а именно к способам замораживания спермы петухов при искусственном осеменении кур,Известен способ замораживания спермы птиц, заключающийся в том, что сперму разбавляют при комнатной температуре, эквилибрируют при 2 - 4 С в течение 60 мин, накапывают в виде гранул объемом 0,10 - 0,15 мл на предварительно охлажденную до -60 - 75 С фторпластовую пластину, выдерживают пластину с гранулами в парах испаряющегося азота 60 с и опускают в жидкий азот. Оттаивание гранул производят в пенициллиновых флаконах в водяной бане при 70 - 75 С в течение 7 - 10 с 1,Иедостатком данного способа является нестаоильная скорость охлаждения спер мы из-эа невозможности получения одинаковых но объему гранул, различий экспозиции нахождения гранул на фторопластовой пластине, соприкосновения гранул с окружающей воздушной средой. В результате этого биологическая полноценность спермиев после замораживания различна, что приводит к невысоким результатам по оплодотворенности яиц (61%) и по выводу молодняка (41,6%), при этом расход цельной спермы на одно осеменение в 8 - 10 раз больше обычного.Известен способ пристеночного намораживания препаратов крови, вакцин и сывороток, заключаюгцийся в том, что намораживание жидкости производят путем врагцения флаконов емкостью 0,5 - 1,0 л вокруг их горизонтальной оси в ванне с охлаждакнцим раствором до (- 20) (- 40) С. Данный способ применяется с целью увеличения поверхности биопрепаратов для сублимационной сушки.Применение этого способа для замораживания спермы сельскохозяйственных животных неприемлемо из-за несоответствия режимов охлаждения необходимых для разного вида биологических объектов, значительных различий замораживаемых жидкостей.Известен способ замораживания спермы птиц, преимущественно гусаков, заключаюгцийся в охлаждении и разбавлении спермы, эк вил и бр ации, внесении спермы в тонкостенные металлические кюветы в количестве 0,1 - 2,0 мм в каждую, замораживании со скоростью 40 - 60 град/мм до (-98) (-127)С, затем со скоростью 8 - 15 град/мин до - 1-96 С.Лктчвность оттаянной спермы 3,7 - 0,12балла, ь; в .;од молодняка 53,2% 23.Не к ста-:.:и данного способа - нестабильная скорое.: охлаждения (не оптимальная) из-за соприкосновения спермы в кюветах с воздухом, длительность времени замораживания (8 - 10 мин) и сложность 5 10 15 20 25 30 35 40 45 2регулирования указанной скорости охлаждения. В результате этого биологическая полноценность спермиев (вывод молодняка от осеменения замороженной по такому режиму спермы) невысока и составляет 53 2%.Цель изобретения - повышение оплодотворяющей способности спермы.Поставленная цель достигается тем, что согласно способу замораживания спермы птиц, включающему разбавление спермы, охлаждение, эквилибрацию с криопротектором, замораживание в емкостях и последующее хранение спермы в жидком хяадагенте, замораживание осуществляют в морозильной камере путем врашения емкости в горизонтальном положении вокруг продольной оси со скоростью 6 - 12 об/мин при температуре в морозильной камере (-60) - (-75) С в течение 165 - 195 с с последующим введением в морозильную камеру паров азота в течение 45 - 65 с, причем сперму в емкость вносят в количестве, обеспечиваюшем толщину слоя спермы при вращении 0,1 - 1,0 мм.Пример 1. Сперму петухов разбавляют средой для замораживания при комнатной температуре, разливают по 1 - 2 мл в стеклянные цилиндрические емкости, объемом 12 см, диаметром 0,2 м, что обеспечивает толщину слоя спермы при вращении 0,1 - 1,0 мм. Закрепляют в устройство для вращения и помещают в холодильник при 2 - 4 С на 45 мин. В сперму добавляют криопротектор, эквилибрируют и помещают в морозильную камеру с температурой -75 С, где вращают горизонтально со скоростью 8 об/мин в течение 180 с. Затем в камеру пускают пары азота на 60 с. Емкости с намороженной спермой толщиной 0,1 - 1,0 мм опускают в хладагент для дальнейшего хранения. Оттаивают сперму в водяной бане при 50 - 55 С. Кур осеменяют один раз в 3 - 5 дней, первые два осеменения через день дозой 0,2 - 0,23 мл. Оплодотворенность яиц кур, осемененных оттаянной спермой, составляет в среднем 83,0%с выводом цыплят 71,8%.В табл. 1 представлены результаты оплодотворенности яиц и вывода молодняка, полученные по предлагаемому способу замораживания и известному. Пример 2. Сперму петухов разбавляют 1:1 средами для замораживания (Лейка ЛКСВИРГЖили ЛКС) при комнатной температуре, разливают по 1 - 2 мл в стеклянные цилиндрические емкости объемом 12 см, диаметром 0,2 м, закрепляют в устройстве для вращения, помещают в холодильник при 2 - 4 С на 45 мин, добавляют криопротектор, эквилибрируют и помещают в морозильную камеру при -75 С, где вращают горизонтально со ско136806 Таблица 1 Проинкубированояиц, шт,Способ 83,0 71,8 1555 Предлагаемый Известный 1 60,9 41,6 320 13ростью 6 об/мин в течение 180 с, затем в камеру на 60 с пускают пары азота. После этого емкости с намороженной спермой опускают в хладагент для хранения. Оттаивают в водяной бане при 50 - 55 С. Оплодотворенность яиц кур, осемененных оттаянной спермой в дозе 0,2 - 0,23 мл в один раз в три дня, составляет соответственно 87,7; 82,7; 73,6;74 20/ОВ таблице 2 даны результаты искусственного осеменения кур спермой криоконсервированной с различными средами по предлагаемому способу,Пример 3, Сперму гусей разбавляют 1:3 средой для замораживания при комнатной температуре, разливают по 1 - 2 мл в флаконы из-под пенициллина (объемом 12 см и диаметром 0,2 м), закрепляют в устройство для вращения, помещают в холодильник при 2 - 4 С на 30 мин. Добавляют криопротектор (50/О этиленгликоля или 80/, диметилацетамида), эквилибрируют и помещают в морозильную камеру при -75 С, где вращают горизонтально 180 с со скоростью 8 об/мин. Потом в камеру на 60 с пускают пары азота, после чего флаконы со спермой, намороженной слоем толщиной 0,1 - ,0 мл, опускают в хладагент на хранение. Оттаивают в водяной бане при 60 - 65 С. Оплодотворенность яиц гусынь, осемененных оттаянной при 65 С спермой в дозе 0,2 мл один раз в пять дней, составляет 76,6 и 83,30/О с выводом молодняка 69, и 74,70/ОВ табл. 3 представлены результаты искусственного осеменения гусей спермой криоконсервированной по предлагаемому способу с различными криопротекторами.Пример 4. Сперму птиц разбавляютсредой для замораживания, . разливают во флаконы из-под пенициллйна (объемом 12 см ф и диаметром 0,2 м), закрепляют в устройство для вращения и помещают в холодильник при 2 - 4 С на 45 мин, добавляют криопротектор, эквилибрируют и помещают в морозильную камеру при 10 - 60 С, где вращают горизонтально соскоростью 12 об/мин, 180 с, после чего в камеру пускают пары азота в течение 60 с.Емкость хранят в хладагенте. Оттаивают при 50 - 55 С, осеменяют кур по 0,2 - 0,23 мл раз в три дня, Оплодотворенность яиц кур, осемененных такой спермой, 55,0/О (проинкубировано 400 яиц).Пример 5. Сперму птиц разбавляютсредой для замораживания, разливают во флаконы из-под пенициллина, закрепляют 20 в устройство для вращения и помещаютв холодильник с 2 - 4 С на 45 мин, добавляют криопротектор, эквилибрируют и помещают в морозильную камеру при -120 С, где и вращают горизонтально со скоростью 12 об/мин, в течение 180 с, затем в камеру на 60 с пускают пары азота. Хранят емкости в хладагенте. Оттаивают при 50 - 55 С, доза осеменения - 0,2 - 0,23 мл. Оплодотворенность яиц кур, осемененных такой спермой, 18,70/О.ЗО Предложенный способ замораживанияспермы птиц может быть применен в практических условиях для длительного хранения спермы и использования ее в селекционной работе. Оплодотворение, 7 Вывод молодняка, Е1136806 Т а блица 2 Проинкубировано яиц, шт. Среда Куры яичной породы 123 87,7 78,9 Лейка 75,4 82,7 73,6 74,2 70 Таблица 3 Криопротектор По предлагаемомуспособу:с 5% ЭТГ 69,1 76,6 94 74,7 83,3 90 с 87 ДМАА 126 По известному 121 53,2 73,0 ЛКС ВИРГЖ ЛКСОплодотворение, 7. Вывод молодняка, 7 110Куры мясных пород 63 Проинкубировано Оплодотворение, 7 Вывод молодяиц шт, няка, ЕСоставитель В. Романова Редактор И. Ковальчук Техред И. Верес Корректор В. Синицкая Заказ 10353/3 Тираж 722 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж - 35, Раушская наб., д. 4/5 филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4