Питательная среда для культивирования

)и, кальциевуюую, о т л ито, с цельюния Вас 11 дополнительфорнокислый или мар сернокисль одопроводн соль и водучающаяускорения сп1 из гЬдг 1 п 81 л. Ф 11на, В.Б,Фрейман, А,Павлова, М.А,Кузьва и З,П.Федосова с я тем, орообразов епз 1 з, она аммоний фо о содержит ли аммоний сернокислыи, в качевой соли - кальций хлоальций углекислый, а в стве кальци ристый или дов - гек древесим соотно 0,7-1,250,8-1,0 ство СССР1960во СССР1970е свидетел 01 М 63/00 свидетельс 12 1 Ч 1 у 0015-0,25 0,15,1 - 0,15 тальное ОСУДАРСТВЕННЫИ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(7 1) Всесоюзный научно-исследователский институт микробиологическихсредств защиты растений и бактериальных препаратов и Научно-производственное гидролизное объединениеГлавного управления микробиологической промышленности при СоветеМинистров СССР(54)(57) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯКУЛЬТИВИРОВАНИЯ Вас(11 пз г 1)цг 1 пв 1 епз 1 з, содержащая дрожжи, источник углеводов, магний сернокислый качестве источника углев созосодержащий гидролиза ны или торфа при следующ шенин компонентов, мас,7.Гексозосодержащийгидролизат древесиныили торфа, Е по сахаруДрожжи БВКАммоний фосфорнокислый или аммонийсернокислыйКальций углекислыйили кальций хлористыйМагний сернокислыйили марганец сернокислыйВода водопроводнаяИзобретение относится к микробиологической промышленнссти и может быть использовано при производстве энтомопатогенных бактериальных препаратов на основе Вас 11 оз гЬцг 1 п 81 епз 1 з. Известна кукурузно-глюкознаяпитательная среда для культивирования Вас 111 ыз сЬцг 1 п 81 епздз 11,Однако известная среда малопродуктивна.Известна также питательная среда для культивирования Вас 11 из гЬпг 1 пя 1 епзз , содержащая дрожжи кормовые, источник углеводов (кукурузную муку, крахмал, отруби или другие), хлористый натрий, хлористыйкальций, сернокислый магний или сер.нокислый марганец и воду водопровод.ную 2 .Однако известная среда не обеспе чивает спорообразование в короткиесроки.Целью изобретения является ускорение спорообразования Вас 111 из сЬлгьпд 1 епз 1 з.Указанная цель достигается тем, что питательная среда для культивир вания Вас 111 из гМгп 8 епзхз, со 30 держащая дрожжи, источник углеводов, магний сернокислый или марганец сернокислый, кальциевую соль и воду водопроводную, дополнительно содержит аммоний фосфорнокислый или аммоний сернокислый, в качестве кальциевой соли - кальций хлористый или кальций углекислый, а в качестве источника углеводов - гексозосодержащий гидролизат древесины или торфа при сле 7,40 дующем соотношении компонентов,мас:Гексозосодержащийгидролизат древесиныили торфа, 7 по сахару 0,7-1,25Дрожжи БВК 0,8- 1,0Аммоний фосфорнокислыйили аммоний сернокислый 0,15-0,25Кальций углекислыйили кальций хлористый О, 15-0,2Магний сернокислыич 50или марганец сернокислый 0,1-0,15Вода водопроводная ОстальноеСреду готовят следующим образом.17-ную водную суспензию дрожжей 55 БВК нагревают до 80 С, выдерживаютопри этой температуре в течение 30 о 60 мин, затем охлаждают до 50 С ивводят в нее остальные компоненты. Соль кальция вводят последней. Среду перемешивают, рН до стерилизации устанавливают в пределах 7,4-7,6, стерилизуют при 120-130 С в течениеО30-40 мин, рН после стерилизации 6,8-7,2.П р и м е р 1, Готовят среду следующего состава, мас.7:Гексозосодержащийгидролизат древесины или торфа, 7 посахару 0,7Дрожжи БВК 0,8Аммоний фосфорнокислый или сернокислыйКальций углекислый (мел)или хлористый 0,15Сернокислый магнийили марганец 0,1Вода водопроводная ОстальноеСреду после стерилизации и охлаждения засевают Вас 111 из гЬиг 1 п 0,15 0,2 0,18 П р и м е р 3, Готовят среду следующего состава, йас.7:Гексозосодержащийгидролизат древе 8 епз 1 з культивируют в течениео37 ч при 29+1 С, На среде с указанной минимальной концентрацией компонентов выход целевого продукта (концентрация спор и кристаллов) составляет 3,2 млд, в 1 мл культуральной жидкости с вирулентностью поП р и м е р 2. Готовят среду следующего состава, мас.7:Гексозосодержащийгидролизат древесины или торфа, 7 посахару 1,0Дрожжи БВК 0,9Аммоний фосфорнокислый или сернокислыйКалий фосфорнокислый 0,07Кальций углекислый(мел) или хлористыйСернокислый магнийили марганец 0,13Вода водопроводная ОстальноеНа среде с указанной оптимальной концентрацией компонентов выход целевого продукта (концентрация спор и кристаллов) составляет 3,7 млрд. в 1 мл культуральной жидкости с вирулентностью по ЛКО = 0,00171081207 50,250,1 0,21 О 15 20 Таблица 1Морфология био массы в культуральной жид- кости Концентрация спор в культуральной жидкостимлрд/мл Вирулентность по ЛК О,7 Штамм Среда С древесным гид- ролиэатом 0,001 Споры, кристаллы (1: 1), заспорованные кл. 57, вегетативные кл. 1 Х3,7 39 С торфянымгидролизатом 0,003 2,6 То же 49 сины или торфа, 7.по сахару 1,25Дрожжи БВК 1,0Аммоний фосфорнокислый или сернокислыйКалий фосфорнокислыйКальций углекислый(мел) или хлористыйСернокислый магнийили марганец 0,15Вода водопроводная ОстальноеНа среде с указанной максимальной концентрацией компонентов выход целевого продукта (концентрация спор и кристаллов) составляет 3,3 млд в 1 мл культуральной жидкости с вирулентностью 0,0023.П р и м е .р 4. Гексозосодержащий гидролизат древесины готовят из древесной стружки путем обработки ее 0,5 Х-ной серной кислотой .сначала при 140-160 вС, затем при 180-190 С. По окончании гидролиза избыток серДанные табл,1 показывают, что на среде с торфяным гидролизатом культура штамма 49 растет и развивается нормально с образованием спор и кристаллов. Культуральная жидкость обладает высокой инсектицидной способностью, Некоторое снижение продуктивной кислоты нейтрализуют известковым молоком . После фильтрации гидролиэат очищают от летучих и нелетучих примесей (формальдегид, фурфурол, гуминовые вещества и другие) и затем упаривают в вакуумной упаривательной установке при 70-80 С, После упаривания в гидролиэате должно содержаться не менее 20-253 редуцирующих веществ, которые представлены глюкозой (80-907) и незначительным количеством других сахаров: галактозой, маннозой, ксилозой, арабинозой, Кроме сехаров в гидролизате содержатся минеральные компоненты: соли калия, натрия, магния, железа, меди и другие в микро- количествах.Гидролизат торфа, получаемый с гидролизного завода, содержит 16,3 Х редуцирующих веществ.Данные по использованию гидролиэатов для выращивания Вас 11 цз гЬпгп 8 епздз представлены в табл.1 ности культуры на среде с торфянымгидролизатом связано с менее тщательной очисткой гидролизата. Сравнительные данные по времени ферментации и спорообразованию приведены в Фабл. 2,1081207 Т а б л и ц а 2 Содержаниекомпонентов Время фермента СпорообСреда разонанне, 7. ции, ч 90 3,4 Оптимальное 3,0 100 37 Минимальное 100 3,5 37 Оптимальное 100 3,2 Максимальное 37 Составитель Г. Смирнова РедактоР Н, РогУлич ТехРед М,Тепер Корректор В, СиницкаяЗаказ 1477/22 Тираж 522 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5Филиал ППП Патент", г. Ужгород, ул. Проек гнея,Дрожжеполисахаридная (известная) Полусинтетическая (предлагаемая) Данные табл. 2 показывают, что предлагаемая среда позволяет за более корот25 кое время достичь 1003-ного спорообразования культуры Вас 111 цз Ьиг 1 пд 1 епв 1 в. Концентрация спорв культуральнойжидкостимлрд/мл Использование питательной среды позволяет ускорить спорообразование Вас 111 ия 1 Ьцг 1 пр 1 епз 1 в, интенсифицировать производство, улучшить качество биомассы, удешевить производство,