Способ определения безвредности пищевых продуктов или техногенных веществ содержащихся в них

способам в частности, способ определения безИзобре тение относится к спосо авредности Я -алканов (техногенных приопределения бе р дзв е ности пищевых ий с одержащихс я в искусственнов еств в эксперименте месетехногенных вещп именение в гигиене создананаемых пищевых белках).ч может найти приме20 белых крыс в возрасте1 бействия продуктов Берутпитания на организм животно о или для у мес Раз иваютьно опустивших концен- группы. пытно гтановления предельно допусежедневно в.корм нормальные алканы вдозе 400 мг на кг массы тела в суткеенных веществв пищевых продуктах.без- в течение 5 мес, после чего отменя(0 ач Н -м опытных животныхвредности пищевых, техногенных ве (от дачу -алкановконтрольных содержат на виеарществ, который включает сл дующуе ю как иЛом рационе в течечение 1 мес. В поспоследовательность пРиемов и опера- ний день этого периода для Устаций; Опытных животных корм новления скорости обновления эпителиямыми веществам в чи 30 мес " тонкогоякишечника опытным Й контрольразных сроках и в конце опыта живот- нотным вводят внутрибрюшинно Нных(опытных и контрольных)забивают и тимидин в дозе 0,5 МкКИ на 1 г массыберут участки внутренних органов,тела. Через 24 ч после введения тимидиготовят гистологические препаратына крыс забивают под эфирным наркозоми при микроскопическом исследованиии вырезают участок тонкого кишечникапрепаратов вну ренних органов выяв азмером 1-2 см отступя на 2-3 смляют ту или иную паталгическук карти в надцатиперстной кишот окойчания двенлю- ки с помощью шприца в просвет выреких изменений в тканях делают заклю- ки, с10 чение и безвредности действия испы- занной кишкшки вводят 1 мл -ного .25 Раствора формалина для быстройа ии во ин и сохранения наНедостатком данного способа являет- иксад рсфикных них эпителиальных клеток, далееся невозможность определения вредных10-ном растизменений, которые не нарушают морф - руо- си ют отрезок кишки в -н4 проворе формалина в течение сут, рлогйческие структуры клеток и тканей,мывают в проточно воде,й проводят кишт е. способ обладает малой чувствику через батарею спиртФ ртов восходятельностью и является описательным, ащей концентрации и з аливают отрезокне количественным методсм, Кроме того,тбнкой кишки в пара ин,Ф( при этом плосРок ов с едования,ерпендикулярно длине кишки.Целью изобретения является повыше-З 5 Рерние чувствительности способа и сокраПри забое животных для выявлениящение сроков исследования,патогистологических изменений во внутПоставленная цель достигается тем, ренних органах берут участки следуючто дозы испытуемых веществ вводят щих органов: печени, почки, .надпочечживотным в течение 1,5-6 мес, после 40 ника, тимуса, легкого, селезенки.чего в течение 1-1,5 мес скармливают . Гисторадиоавтографы готовят изобычный рацион, из гистологическихпоперечных срезов тонкой кишки попрепаратов готовят Радиоавтографы , стандартной методике 21 . Для этогомикроскопическими и сследов ани ямисрезы заливают в темноте фотоэмульсиейустанавливают скорость обнонления тила Мр и о тавляют их в темноте и вэпителия тонкого кишечника, а патохолодильнике на 7 дн.После экспонирологические изменениЯ ныЯвлЯют при вания фотоэмульсии проявляют в метолсравнении этого показателя у подопыт- -,идрохиноновсм проявителе н закрепных животных и животных, не получив- л т в фиксаже, а после промывкиших испытуемое вещество.препарата, гисторадиоавтограф подСущность способа заключается в50крашивают гематоксилинсм рлинсм Майера.том,что скорость обновления эпителия На полученных гисторадйоавтографах кишки при микроскопическом исратимо с возрастом по экспоненциаль- следовании определяют скорость обнов"Величина скорости обнов- ления эпителия тонкогО кишечника для55чая, Для этогозависит также от интенсивности каждого отдельного случая. Длления заведшестМующего функционирования ор- на гисторадиоавтографах ре р рах гист и упредшестгана и последняя находится в обратной ют количество, клеток (меченых и еми немезависимости от интенсивности клеточ- ченых) в эпителиальном пласте ксмптного обновления, поэтому по данному лекса крипта- ворсина. Учет ведуткритерию можно количественно оценить 60 начиная от первой клетки (энтеростепень вредного воздействия или цита) дна крипты, которая делитоп елить безвредность действия последнюю на две симметричные полоиспытуеюых доз веществ. виины а подсчет ведут вдоль по крип 1. Определение без- те, переходя затем на ворсину иПримерй клетврепности пищевых,тех но-енних веществ,65 заканчивают последней мечено3 1061797кой на ворсине, ч тУчи ывают только про- эфирным наркозом и вырезают участоком 1-2 смдольно срезанные комплексы крйпта- тонкого кишечника размером 1- см,ворсина, Массив наблюдений, необхо- отступя на 2-3 см от окончания двед имый для получения достоверной сред- надцатиперстной кишки, с помощьюней величины скорости обновленияшприца в просвет вырезанной кишки киэпителия тонкого кишечника, у одного 5 вводят 1 мл 10-ного раствора формаживотйого составляет не менее 132 лина для быстрой фиксации ворсин икомплексов крипта"ворсина, сохранения на них эпителиальных клеДля выявления безвредности дей- ток, далее фиксируют отрезок кишки вствия й -алканов микроскопируют приве-ном растворе формалина в течениетовленные гистологические препараты 10 4 сут, затем промывают в проточнойвнутренних органов: печени, почки, воде, проводят кишку через батареюнадпочечника, легких, тимуса, селе- спиртов восходящей концентрации изенки на предмет обнаружения патоло- заливают ее в парафин, при этомгических изменений. В исследованных плоскость парафинового среза ориенорганах опытных и контрольных крыс 15 тируют перпендикулярно длине кишки.патологических изменений не было При забое животных для выявленияобнаружено. патогистологических изменений водалее сравнивают значения скорос- внутренних органах берут участкитей обновления эпителия тонкого кишеч следующих органов: печени, почки,ника опыта и контроля, которые со надпочечника, тимуса, легкого, селеответственно равны: 52 клетки/сут зенкии 65 клеток/сут,Статистически разница Гисторадиоавтографы готовят измежду ними доними достоверна при 13 37 иРпоперечных срезов тонкой кишки пос 0,01. установлено, что скорость стандартной методике, пример 1) .дляобновления эпителия тонкого кишечны этого сРезы заливают в темноте фотока у животных опытной группы. замедли- эмульсией типа МР и оставляют ихлась и соответствует скорости, харак- в темноте и в холодильнике на 7 дней.ры в возрасте 10 5 мес После экспонирования фотоэмульсиюФа в контрольной группе животных сред- проявляют в метол-гидрохиноновомняя величина скорости обновления эпи- проявителе и закрепляют в фиксаже,телия соответствует скорости паспорт . а после промывки препарата гистораного возраста, т.е, мес, ож диоавтограф подкрашивают гематоксили.сделать вывод, что под действием ном Майера. На полученных гисторадионормальных алканов, в дозе 400 мг . автографах кишки при микроскопичесна кг массы тела в сутки при вскармутки при в"карм- ком 1 сследовании определяют скоростьливании ими крыс в течение мес,5 ес З 5 обновлени эпителия тонкого кишечникакишка постарела на 150 по сравнению для каждого отдельного случая, дляэтого на гисторадиоавтографах регистс контролем. К -алканы в указаннойдозе оказали вредное действие на рируют количество клетдк (меченых Ийемеченых) в эпителиальном пластеФорганизм опытных Р4 п комплекса крипта-ворсина. Учет ведутпри исследова ри исследовании приемами и дризнаками известноги известного сПособа выявить вред- наниная от первой клетки (энтероцита)дна крипты, которая делит криптуна две симметричные половины, под"П р и м е Р 2. пред . счет -. вдоль по крипте, переходя зае 2. Оп еделение безвредности п щ ри пи евого ациона, содержа 45 тем на ворсину и заканчивают подсчетщего белково-Витаминный концентратпоследней меченой клеткой на ворсине.(БВК .Массив наблюдений, необходимый дляИспытуемый пищевой рацион пред" получения достоверной средней скоросставляет собой виварный рацион, вти обновления знлелия тонкого кишечкотором 25 белка сУточного рациона 50 ника, у одного животного составляетзаменено белком БВК, -ф . яе менее 132 комплексов крипта-ворсиБерут крыс одномесячного возраста 2 группы по 10 животных в каждой. Опытных крыс кормят испы- Для выявления безвредности дейст.туемой диетой в течение 6 мес, после вия испытуемого пищевого рациона мик-,.реводят сро роскопируют приготовленные гистологичего опытных животных переводят сроческие препараты внутрейних органов:почки надпочечника, легких,Контрольная группа животных находит- печени, почки, надпочечионе постоянно, тимуса, селезенки, на предмет обнаизменений.в последний день этого периода для ружения патологических изменени60 В исследованных органах опытных иустанов ления скорости обновленияонт ольных крыс патологических изэпитителия тонкого кишечника опытным контроменений не было обнаружено. Далееи контрольным животным вводят внутибрюшинно Н-тимидин в дозе , к иЪ 0 5 М К сравнивают значения скоростей обновРЧ 24 осле ления эпителия тонкого кишечника вна 1 г массы тела, Через ч послвведения тимидина крыс забивают под 65 опыте и контроле,1061797 Составитель М.БелоусоваРедактор О,Черниченко Техред А.БабинецФ Корректор Р., Повх Заказ 10093/5 Тираж 713 ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д.4/5Подписное филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 установлено, что величина средней скорости обновления эпителия тонкого кишечника в контрольной группе животФх составила 610,9 клеток/сут, в, опыте соответственно 63+1,4 клеток/сут, Разница между средними значениями-скоростей в опыте и контроле недостоверна при 11,2 и р р 0,05. Значения средних скоростей в опыте и контроле равны и соответствуют величине скси рости обновления эпителия тонкого ки шечника их паспортного возраста, те. 8 мес.Таким образом, испытуемый пищевой рацион, содержащий 25-ного белка БВК от.общего количества белка суточ ного рациона крыс, обладает безвредным действием.Экономический эффект достигается за счет сокращения в 2-3 раза сроков исследования.Положительный эффект, не создающий экономии, возникает всвязи,р изменением технолОгии, т.е. эа счет использования нового теста - скорости обновления эпителия тонкого кишечника для оценки безвредности и выражается в возможности дать количественнуЮ оценку и повысить чувствительность способа.