Способ определения канцерогенных для кишечника химических веществ

ОП ИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Свез СоветсиикСфциалистичесииаРеспубликц 969628(51) М. Кл. 6 01 й 33/48 с присоединением заявки М 3 Ьвударстюа 4 кеиктет СССР аф дацм амрове 1 н открытка(23) ПриоритетОпубликовано 23,09.82Бюллетень .,В 35 Дата опубликования описания 23. 09.82. Мели следовательский институт по аниям химических соединений чн и 71) Заявител 54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КАНЦЕРОГЕННЫХ ДЛЯ КИШЕЧНИКА ХИМИЧЕСКИХ ВЕЩЕСТВго в шечн цили в фи ние 3050 ло в ня э 5 ом расткратно анцерогена и егодят подкожно одн мышей - опытной ответственно. Сп влекают участок о Раствор воритель вв двум группа трольной, с 8-12 дней и и ко тем, чтоения канечИзобретение относится к медицине,а именно, к способам первичной оценки канцерогенной активности при массовых биологических испытаниях химических соединений.Известен способ определения канцерогенных для кишечника химических веществ путем введения испытуемого вещества опытной группе животных с последующим исследованием области кишечника 11.Однако при использовании известного способа для определения канцерогенной активности химических ве- ществ требуется от 1 до 3 лет и 300- 400 животных, а также большое количество испытуемого химического вещества, при этом способ трудоемок, дорог и не может применяться при массовых испытаниях химических веществ.Целью изобретения является ускорение способа.Эта цель достигаетсясогласно способу определ церогенных для кишечника химических веществ путем введения испытуемого вещества опытной группе животных и последующим исследованием области кишечника, после введения испытуемоещества исследуют участок киика, при этом надевают его на ндрический стержень и вращают зиологическом растворе в тече-61 с со скоростью 2950-об/мин, далее подсчитывают чисыделенных при вращении стержпителиальных клеток и по снижению их числа в опытной группе по сравнению с контролем определяют н нцерогенные для кишечника химические вещества,Способ осуществляют следующим обника, выворачивают его эпителием наружу, одевают на цилиндрический стержень диаметром 2,95-3,05 мм, стержень с тканью приводят во вращениев течение 59-61 с со скоростью 29503050 об/мин внутри кюветы с внутренним диаметром 659-6,6 1 мм и объемом 1,45-1,55 мм, наполненной 0,9,1,1 мл Физиологического раствора,так, что осуществляют выделение кле фток только из зоны слущивания, подсчитывают выделение при вращениистержня с тканью клетки и о канцерогенности вещества судят по снижению числа выделенных клеток в опытной группе мышей по сравнению с контрольной. увеличение скорости вращения, уменьшение диаметра кюветы иуменьшение ее объема приводит к отрыву клеток иэ тех зон, которые не характеризуют клеточные потери в эпителии кишечника, что приводит к ошибочным результатам о канцерогенной активности химического вещества, а увеличение указанных параметров снижаетчувствительность способа,П р и м е р. Выделение клеток придействии кишечного канцерогена 1,2-диметилгидраэина (ДМГ), его структурных неканцерогенных аналоговФенилгидразина .(ФГ) и гидразинсуль 30фата (ГС), и сильных канцерогенов,.не вызывающих опухолей в кишечнике -уретана, орто-аминоазотолуола ОААТ7,12-диметилбенз(а)антрацена (ДМБА).ДИГ выбирается по следующим признакам: ДМГ индуцирует опухоли при введении в малых дозах, не требует специальной схемы введения, вызывает опухоли у 100 животных, не требуетспециальных сенсибилизирующих воэдей- фВствий на экспериментальных животных.Из всех групп кишечных канцерогеновчеловек наиболее часто сталкиваетсяс этой группой канцерогеноЬ. Структурные неканцерогенные аналоги Ьерут ф 5в той же дозе, что и ДМГ, Другиесильные канцерогены, не вызывающиеопухолей в кишечнике, но индуцирующиеопухоли в других тканях: уретан (влегких), ОААТ (в печени), ДМБА (в Яместе введения - под кожей) в концентрациях, при которых они вызывают опухоли - 200 мг/кг веса телаи 50 мг/кг веса тела, соответственно. 55Мышей линии ВА В/с, самок в возрасте 15 недель делят на две группы.Опытной группе вводят подкожно ДМГ,35 3 960628 4растворенный в физиологическом растворе (рН доводят 1 н йаОН до 7,4),в дозе 16 мг/кг веса тела мыши. Второй группе, контрольной вводят Физиологический раствор с рН=/,4 иэ расчета О, 1 мл на 10 г веса тела мыши.Спустя 10 дней после введения ДИГ ифизиологического раствора, обе группы мышей забивают, извлекают кишечник и определяют число выделяющихсяклеток при принудительном отрыве.Принудительный отрыв клеток осуществляют в измерительной ячейке следующим образом.Промытый участок кишечника длиной0,9-1,1 см выварачивают эпителиемнаружу, одевают на стальной стерженьдиаметром 2,96-3,06 мм, закрепляютна нем двумя лигатурами сверху иснизу, отступя 1 мм от края отрезкак его середине, и приводят во вращение в течение 59-6 1 с со скоростью 2950-3050 об/мин внутри кюветыс внутренним диаметром 6,59-6 61 мми объемом 1,45-1,55 см, наполненной 0,9-1, 1 мл физиологического раствора. Вращение осуществляется в течение 59-61 с с указанным числом оборотов, время разгона и остановки двигателя не учитывается. Выделенные .клетки попадают в раствор, где подсчитываются с помощью камеры Горяева. Перечисленные операции повторяютдля всех указанных веществ, Результаты показывают, что только ДМГ вызывает длительное снижение выделенияклеток из прямой кишки. Длительноеустойчивое снижение выделения клетокнаблюдается только в отрезке прямой кишки, т.е. там, где отмечается наибольшая частота опухолей, возникающих под действием этого канцерогена. В нисходящем отделе толстой кишки и в тонкой кише выделениеклеток достоверно не отличимо от контроля и частота опухолей в толстойкишке резко снижена по сравнениюс прямой кишкой. Неканцерогенныеструктурные аналоги ДМГ, ФГ и ГСдостоверно не.влияют на выделениеклеток иэ отрезка прямой кишки и невызывают опухолей в кишечнике, Канцерогены, не вызывающие опухолей вкишечнике, не снижают выделение клеток из,отрезка прямой кишки, ТакимоЬразом, обнаруженочто ДИГ можетвызывать снижение клеточных потерьчто само по себе достаточно для роста новообразований в кишечнике. Дей960628 4ющим исследованием области кишечника, о т л и чающий с я тем,что, с целью ускорения;способа, пос"ле введения испытуемого веществаисследуют участок кишечника, при этомнадевают его на цилиндрический стержень и вращают в физиологическомрастворе в течение 59-61 с со скоростью 2950-3050 об/мин, далее под 0 считывают число выделенных при вращении стержня эпителиальных клетоки по снижению их числа в опытнойгруппе по сравнению с контролем определяют канцерогенные для кишечни 1 ка химические вещества. формула изобретения Способ определения канцерогенных для кишечника химических веществ 2 р путем введения испытуемого вещества опытной группе животных с последуСоставитель Ю.Алмазов Редактор Л.филиппова Техред З.Палий корректор.В,БутягаЗаказ 7253/50 Тираж 7 ПодписноецнИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, .Ж, Раушская наЬ., д, 1/5 Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул, Проектная,5ствие ДМГ специфично: оно проявляется только в том участке кишечника, где ДМГ индуцирует опухоли,Другие вещества, не являющиеся кишечными канцерогенами, таким эффектом не обладают.Предлагаемый способ позволяет ускорить определение канцерогенных для кишечника химических веществ до 8-12 дней, при этом для испытаний требуется около 15-20 животных,Предлагаемый способ повышает надежность получаемых результатов и более экономичен. Источники информации," принятые во внимание при экспертизе1. ШаЬад Л,М.Методы определения и изучения бластомогенности химических веществ. М., "Медицина", с, 3, 1970.