Способ определения активатора плазминогена

Оп ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(53) УДК 615.38/39 (088.8) Опубликовано 23,01.83. Бюллетень3Дата опубликования описания 28,01.83 по делам извбретеиий и етврмтий; ". атЦентральный ордена Ленина и ордена Трудоемок,=. асноЗнамени научно-исследовательский институт гематологи переливания крови(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВАТОРА ПЛАЗМИНОГЕНА Изобретение относится к медицине, а именно гематологии.Известен способ определения активатора плазминогена в плазме путем разведения плазмы водой, осаждения фибринолитически активной фракции (ФАФ) уксусной кислоты, растворения осадка ФАФ в обратном буфере, его инкубации на фибриновой пленке 1 .Однако известный способ не позволяет с точностью опредеЛить активность активатора плазминогена в плазме кролика в связи с использованием условий тестирования, не обеспечивающих выделение ФАФ.Целью изобретения является повышение точности определения активатора плазминогена.Поставленная цель достигается тем, что при осуществлении способа определения активатора плазминогена в плазме путем разведения плазмы водой, осаждения ФАФ уксусной кислотой, растворения осадка ФАФ в обратном буфере, его инкубации на фибриновой пленке, отличительной особенностью является то, что осаждение ФАФ осуществляют при рН 5,7 - 5,8, инкубацию осуществляют в течение 48 - 50 ч. Способ осуществляют следующим образом.Пример. Кровь. берут у ненаркотизированных животных из сердца, используя обычные медицинские шприц и иглы.5 Кровь смешивают с антикоагулянтом -3,8%-ным цитратом натрия в соотношении 9;1. Центрифугируют при 2000 оборотах 10 мин при комнатной температуре на центрифуге типа РУ - 180. Плазму сразу отсасы вают в чистую, сухую пробирку, ВыделениеФАФ проводят при использовании 0,5 мл плазмы (меньшие или большие объемы не позволяют выделить ФАФ) и разведении указанного объема дистиллированной водой в интервале 1:6 - 1:20 (разведения вы ше или ниже указанных не позволяют выделить ФАФ). Оптимальным разведением является 1:18( 9).К плазме, разведенной 1:18 (19), по 20каплям добавляют 1%-ную уксусную кислоту для получениия рН = 5,7 - 5,8, при котором и происходит осаждение ФАФ кролика (рН выше или ниже указанного интервала не обеспечивает выделение ФАФ).990227 Сравнительная таблица определения активатораплазминогена известным и предлагаемым способом Известный Предлагаемый Кролики (сердце)Разведение 1; 16 Кролики сердцеРазведение 1:18-1:19 рН выделения 5,7-5,8Площадь лизиса, мма Площадь лизиса, ммв 4. 375 0 0 0 0 0 1125 873 116 78 330 40 1283 770 Средние данные: Оптимальным является рН = 5,7, Раствор тщательно перемешивают до установления твердого значения рН.Пробу инкубируют в холодильнике при 4 С в течение 20 мин,Далее пробу центрифугируют при 3000 оборотах 7 минут.Супернатант тщательно и осторожно сливают. Остатки супернатанта удаляют установлением пробирки в вертикальное положение на фильтровальную бумагу в течение 1 мин,Осадок, содержащий фибринолитически активную фракцию, растворяют в 0,5 мл боратного буфера (0,25% Мф От 10 НО в 0,85% Ма. рН выделения5,1 5,3 5,5 5,5 5,9 6,0 Из таблицы видно, что предлагаемый способ повышает диагностическую точность определения активатора плазминогена.Способ необходим при моделировании патологий, при которых нарушен антитромбогенный потенциал крови, а также для анализа вновь создаваемых антитромботических препаратов на этапе доклинического Для определения активности активатора плазминогена, содержащегося в ФАФ, на ненагретую и гретую (30 мин при 86 С) фибри новую пленку микропипеткой наносят 0,05 мл раствора ФАФ. Пробы ставят в термостат при 37 С, Результаты учитывают через 48 ч (с целью преодоления толерантности бычьей фибриновой пленки к ФАФ кролика),Наличие активатора плазминогена устанавливают по разнице площади зон лизиса (в мм) нагретой и гретой фибриновой пленки.Предлагаемый способ позволяет точно определить активатор плазминогена. Венозная кровь Артерио-венознаякровь изучения с целью повышения точности оценки специфического действия препарата.Формула изобретения55 Способ определения активатора плазминогена в плазме путем разведения плазмы водой, осаждения фибринолитически активной фракции (ФАФ) уксусной кислотой, растворения осадка ФАФ в боратном буфере,990227 Составитель С, Малютина Редактор А. Шандор Техред И. Верес Корректор А. Дзятко Заказ 035/7 Тираж 711 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий13035, Москва, Ж - 35, Раушская наб., д. 4/5 Филиал ППП Патент, г, Ужгород, ул. Проектная, 4его инкубации на фибриновой пленке, отличающийся тем, что, с целью повышения точности определения активатора плазминогена, осаждение ФАВ осуществляют при рН = = 5,7 - 5,8, инкубацию осуществляют в течение 48 - 50 ч.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе 1. Андреенко Г. В., Суворов А. В., Серебрякова Т. Н. Зависимос 1 ь фибринолитической активности и степени осаждения эуглобулиновой фракции плазмы крови некоторых животных от значения рН. Физио логия и биохимия животных. Научные доклады высшей школы. 1973, 11, с. 45 - 48 (прототип).