Способ диагностики инфаркта миокарда

ОП ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН ИЯ Союз СоветскихСоциалистическихРеспублик982659 ВИДЕТЕЛЬСТВУ АВТ ОРСК 61) Дополнит 22) Заявлено ву -льное к авт 51 03.81 (21) 3261482/28-13 1 В 10/00 присоединением заявк23) Приоритет -Гееудерстеелиый кемитет СССР(7) Заявите СОБ ДИАГНОСТИКИ ИНФАРКТА МИОКАРДА 2/О-ным раствором нинт, смачивают 20%-ным и калия, далее опредеобразовавшегося пятфлюоресценции в опытнию с нормой диагноокарда. ды обработанной 1 гидрина, подсушиваю раствором гидроокис ляют флюоресценцию на и при увеличении5 ной пробе по сравне стируют инфаркт ми м обр ния являетсние количе Изобретение относится к медицине, а именно к биохимическим способам диагностики.Известен способ диагностики инфаркта миокарда путем определения активности креатинфосфокиназы в цельной крови измерением флюоресценции креатина в комплексе с нингидрином 11.Однако этот способ является довольно трудоемким, Количество крови, необходимой для анализа, довольно велико, При массовых обследованиях больных значительно увеличиваются затраты времени на производство анализа.Целью изобрете я ускорение анализа и уменьше ства используемой крови.Поставленная цель достигается тем, что согласно способу диагностики инфаркта миокарда путем определения активности креатинфосфокиназы в цельной крови измерением флюоресценции креатина в комплексе с нингидрином, каплю исследуемой крОви инкубируют с каплей изотонического раствора креатинфосфата при 20 - 23 С, затем аликвоту образовавшегося креатина наносят на полоску фильтровальной бумаги, дважСпособ осуществ яют следуюом. Каплю крови инкубируют с каплей изотонического раствора креатининфосфата при 20 - 23 С. При этом происходит одновременное оседание эритроцитов и накоплению в смеси продукта креатинофосфокиназной реакции - креатина.Аликвоту креатина насасывают из верхней части мениска и наносят на полоску фильтровальной бумаги, дважды обработанную %-ным раствором нингидрина, подсушивают, смачивают 20%-ным раствором гидроокиси калия. Определяют флюоресценцию образовавшегося пятна при облучении, например, ртутной лампой с фильтром УФС - 3. При увеличении флюорес- ценции в опытной пробе по сравнению с нормой диагностируют инфаркт миокарда.982659 Совпадение склиническим АктивностьКФК по Результаты анализа КфК-микротест Количество исследований диагнозом известному способу Группаобследуемых Предполагаемый Соотношениефлюоресценциипятен опыт//контроль количество диагноз 1-2 2-3 3-16 Инфарктмиокарда О О 28 инфаркт 305-19 ч 6 28 1 ОО 28 сомни- тельных Другиезаболевания 38 29 9 О 21 21 О О случаев Здоровы Здоровые В качестве стандартного раствора формента используется кровь здорового человека. В качестве стандартов сравнения исполь. зуют шкалу флюоресцирующих красителей, соответствующих по спектру флюоресценции креатину с оценкой высушенных на бумаге светящихся пятен в баллах.Пример. В ряд углубленных гнезд пластины для гемаглютинации помещают по капле изотонической субстратной смеси, содержащей в 5 мл 0,06 М трисацетатного буфера рН 6,8:Креатинфосфат 2 чЦистеин 1 ч.Аденозиндифосфаттринатриевая соль 13 ч.Мд 807 Н 20 4 ч.1 х 1 аС 11 ч.В другой ряд гнезд помещают контрольную смесь (не содержащую АДФ). В опытную (субстратную) и контрольную смеси добавляют по капле исследуемой крови (с добавкой гепарина), а также в отдельные гнезда кровь здорового человека (в качестве стандарта). Пластинку с пробами выдерживают при 20 - 23 С -в течение 25 мин. Затем торцом полосы хроматографической бумаги (дважды обработанной спиртовым 1%-ным раствором нингидрина) касаются мениска смеси, насасывая пятно надосадка иссЛедуемой крови в виде полукруга диаметром около 1 см. Пятно надосадка исследуемой крови и стандарта на бумаге слегка подсушивают, смачивают раствором 20% КОН, затем вновь подсушивают, после чего наблюдают зеленое свечение при облучении ртутной лампой с фильтром УФЦ - 3 (350 ммк), например, на аппарате для определения витаминов. При этом на шкале флюоресценции определяют интенсивность свечения в баллах пятен опыта и контроля и их 5соотношение. Если соотношение опытКонтроль лежит в пределах 1 - 2 (что соответствует активности КФК здорового человека), диагноз инфаркта исключают, если это соотношение 2 - 3 - предполагают сомнительный случай. При соотношении выше 3-х ставят положительный диагноз.Сопоставление результатов диагностикиинфаркта миокарда представлено в таблице. Способ КФК-микротест позволяет про водить диагностику инфаркта миокарда,результаты которой совпадают с диагностикой по известному способу и клиническому обследованию.Способ пригоден для производства какодиночных, так и серийных определений.При этом на производство 1 О анализов требуется 35 мин., тогда как при аналогичном анализе по известному способу требуется 2,5 ч. Количество расходуемой крови по сравнению с известным способом снижено 25 более чем в три раза. Инкубацию смеси можно проводить как при комнатной, так и при 37 С (для ускорения).Таким образом, изобретение позволяетускорить анализ, уменьшить количество зокрови, забираемой у больного. Способ обладает малой трудоемкостью, не требует сложной аппаратуры, может быть использован вне лаборатории.982 б 59 формула изобретения Составитель М. Ковалевская Редактор Т. Кугрышева Техред И. Верес Корректор Г. Решетняк Заказ 9766/6 Тираж 714 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретении и открытий 113035, Москва, Ж - 35, Раушская наб., д. 4/5 Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4Способ диагностики инфаркта миокарда путем определения активности креатинфосфокиназы в цельной крови измерением флюоресценции креатина в комплексе с нингидрином, отличающийся тем, что, с целью ускорения анализа и уменьшения количества используемой крови, каплю исследуемой крови инкубируют с каплей изотонического раствора креатинфосфата при 20 - 23 С, затем аликвоту образовавшегося креатина наносят на полоску фильтровальной бумаги, дважды обработанной 1%-ным раствором нингидрина, подсушивают, смачивают 20%-ным раствором гидроокиси калия, далее определяют флюоресценцию образовавшегося пятна и при увеличении флюоресценции в опытной пробе по сравнению с нормой диагностируют инфаркт миокарда. Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Авторское свидетельство СССР531078, кл. 6 О 1 М 33(48, 1974,