Способ определения оптимального состава среды для культивирования подвижных микроводорослей

СОЮЗ СОВЕТСНИКСОЦИАЛИСТИЧЕСНИКРЕСПУБЛИН 19) 01) 01 С 33/00 114 С 12 ГОСУДАРСТВЕННЫПО ИЗОБРЕТЕНИЯМПРИ ГКНТ СССР ОМИТЕТТНРЫТИЯМ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ВТОРСН ЕЛЬСТВУ растений Захари 1. 74,7 о 1. 22) о 1; 102,(21) 4231060/30-13(56) Мз.сгоЬао 1., 1.Сеп. 7Иф 81, 1973, 77-91,РЬузхо 1 оа Р 1 апйагцвР 1, 1969, 126-139.М 1 сгоЬдо 1 оЕУ. Л. Сеп,В 1, 1977, 199-202. 54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОПТИМАПЬНОСТАВА СРЕДЫ ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯОДВИЖНЫХ МИКРОВОДОРОСЛЕЙ(57) Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано при выборе сред для культивирования подвижных микро- водорослей и бактерий. Целью изобретения является повьппение точности, упрощение и снижение трудоемкости оценки степени оптимальности сред по токсической реакции микроорганизмов. Способ заключается в создании контакта между исходной суспензией клеток и испытываемыми средами на микроповерхности в системе из соединенных между собой в нижней части стеклянных сосудов и учете количества переместившихся в разные среды йфклеток после нескольких часов экспо-; зиции, 3 табл, 1451162Изобретение относится к микроби" ологической промьппленности и может быть использовано при выборе сред для культивирования подвижных микро 5 водорослей.Цель изобретения - повьппение точности и упрощение способа оценки степени оптимальности состава сред по токсической реакции подвижных микроводорослей.Способ позволяет осуществлять прямой подсчет числа клеток и определить вес их сухой биомассы в единице объема исследуемой среды и контролировать физико-химический состав этой среды не только по окончании опыта, но и в динамике, т.е. неоднократно по ходу эксперимента. Способ возможно осуществить двумя вариантами.20При первом варианте осуществления способа подвижные микроводоросли выращивают до достаточной плотности (10-20 10 кл/мл) на исходной среде в культуральной камере емкостью 25 500 мл, продуваемой снизу смесью воздуха с СОг. После этого в суспен" зию водорослей через отверстие в крышке камеры вставляются стеклянные трубки типа пипеток с оттянутым кончиком (площадь отверстия кончика 0,15-0,90 мм, емкость трубки 2- 3 мл), целиком заполненные исследуемой средой и загерметизированные сверху короткой стеклянной палочкой, вставленной в отрезок резиновой трубки, надетой сверху на пипетку. Среды в трубках и в культуральной камерепри этом практически не смешиваются, если только удельный вес сред в труб ках не превьппает значительно удельного веса среды и культуральной камере. Подвижные микроводоросли из камеры переходят в,трубки с исследуемыми средами в количествах, пропор" циональных степени оптимальности данной среды для их жизнедеятельности. Через 1-2 сут стеклянные трубки вынимают из камеры с культурой и содержимое их анализируют обычными методами (плотность суспензия по числу клеток определяют подсчетом в камере Горяева, общая концентрация солей в среде высушиванием 1 мл и взвешиванием сухого остатка, содержание отдельных элементов в среде методом плазменной фотометрии и т.п,).При втором варианте осуществления способа .подвижные микроводоросли выращивают в любом культуральном сосуде до той же примерно плотности что и при первом варианте осуществления способа.После этого 50 мл суспензии микро- водорослей заливают в одно из колен закрепленной на штативе П-образной системы, состоящее из двух загнутых снизу под прямым углом трубок диаметром 20 мл, соединенных в нижней своей суженной части прозрачной эластичной трубкой пережатой посередине зажимом. Во второе колено системы заливают исследуемую среду любого состава и любого удельного. веса. Остатки вс здуха из горизонтального участка системы удаляют пальпированием эластичной трубки. После этого зажим в горизонтальной части системы осторожно удаляют и обе среды соединяются одна с другой таким образом, что между ними образуется поверхность раздела фаз достаточно большой площади (10-12 мм). Систему можно усложнить, составив ее из трех (Ш-образная система) и более сообщающихся сосудов (через стеклянные тройники в нижней части). Через поверхность. раздела фаз микроводоросли из исходной среды свободно переходят в . колена с исследуемыми средствами в соответствии со степенью оптимальности каждой исследуемой среды для их жизнедеятельности. В вертикальные части трубок системы можно вставлять сверху тонкие стеклянные капилляры илипластиковые трубочки, через которые культура продувается смесью воздуха с СОг . Через определенные промежутки времени (обычно раз в сутки) из трубок отбирают пробы для определения плотности культуры по числу клеток и по весу сухой биомассы клеток в единице объема суспензии и для одновременного контроля за тем, насколько сохраняется постоянство каждой из сред в трубках по ее физико-химическим показателям.П р и м е р 1. Штамм подвижных микроводорослей Эцпа 1 ге 11 а рггшо 1 есйа ВцсЬ. й" 63, полученный из коллекции Института Ботаники АН УССР выращивают в культуральной камере емкостью 500 мл, продуваемой снизу смесью воздуха с О,5 У СО до плотностиб20 10 кл/мл на среде следующего состава, г/л: ИаС 1 29 уОр КИОТ 5 у 0 КНгРО 0,5; КгНРО 4 ЗНгО 0,75; ИДС 16 НО62 Продолжение табл.1 держание ионов, г/л Характер исследуемой среда . ГОсновная среда,разбавленная в8 раз 98 0,698 е числ сут. емымир исслених основ" ТаблиЦа Т аблица Вариант среды Число клеток,10 кл/ 25 Основная разбавлен еда без ИаСя в 4 раза а 0,030 К среда без бавленная сновна аС 1,аэа реда бе ая в 1,Основна разбавл 30 НаС 1, ра в 4 раза 0,1 0,047 0,822 Основная среда беНаС 1, разбавленнав 1,5 раза,062 Таблица Осм начен ариант среды ержание иоов, г/л тическое авлеие,ат Основная среда безИаС 1, разбавленнаяв 4 раза 0)048 0,82 Основная средаИаС 1, раэбавлев 1,5 раза ная 048 1,665,88 з 14511 0,38; М 8801 7 НО 0,24; раствор микроэлементов А 1 мл, раствор РеБО 7 НО в смеси с ЭДТА (РеЯО 4 7 НО 3 мг/л и ЭДТА 37 мг/л) 1 мл. Содержание Иаф в этой среде равно 11,41 г/л, К )2,33 г/л, так как значение рН среды до 7,0 доводили при помощи КОН.После этого в суспензию водорос= лей через отверстия в крышке камеры 0 вставляют стеклянные трубки типа пипеток с оттянутым кончиком, заполненные исследуемыми средствами и загерметизированные сверху короткой стеклянной палочкой, вставленной в 15 надетый на пипетку отрезок резиновой трубки.В табл.1 показан характе цуемых сред и содержание вных ионов20 арактер иссле- Содержание иоуемой среды нов, г/л При этом исходные параметры исследуемых сред, в трубках, как это В табл.2 приведено сре клеток, обнаруженных чере в трубках"пипетках с иссл средами. Основная среда, разбавленная в 8 раз идно иэ табл,З, сохраняются праически без изменений.14511 62 5Таким образом, отсутствие ИаС 1 в среде является фактором, неблагоприятным для жизнедеятельности Пцпа 1 де 11 а рг 1 шо 1 ес 1 а. В случае от 5 сутствия ИаС 1 в среде водоросли отдают предпочтение менее разбавленной по сравнению с исходной срере, т.е. предпочитают среру с более высоким осмотическим давлением. 10П р и м е р 2, Штамм водорослей Рцпа 1 хе 11 а ва 11 па Теор. У 10, полученный из коллекции культур института Ботаники АН УССР, выращивают на среде того же состава, что и Вцпа 1 е 11 а ргыпо 1 есга ВцсЬ. штамм 63, но содержащей ИаС 1 в количестве не 29,0, а 87,0 г/л. В остальном водоросли выращивают в тех же условиях, что и Вцпа 1 ге 11 а рг 1 шо 1 есга до плотности 10 10 кл/мл.Монтируют на штативе Ш-образную систему, состоящую из трех вертикально расположенных трубок, соединенных снизу через стеклянный тройник 25 прозрачным шлангом из силиконовой резины, пережатым между трубками при помощи съемных зажимов, затем в среднюю трубку заливают 50 мл полученной суспензии водорослей, в левую трубку 30 такое же количество чистой осходной среды разбавленной в 2 раза, а в правую - ту же среду, но разбавленную в 4 раза (также 50:мл). После этого, не снимая зажимов пальпированием шлангов, удаляют оставшиеся в системе пузырьки воздуха, а затем осторожно снимают зажимы, Между исходной суспензией водорослей и исследуемыми средами в результате этого об разуются поверхности непосредственного соприкосновения (раздела фаз), обеспечивающие микроводорослям возможности свободно перемеп 1 аться изсредней трубки в боковые,Установлено, что через 48 ч культивирования микровороросли из средней трубки переместились в левуютрубку, тогда как среда в правойтрубке осталась совершенно прозрачной.Таким образом, исходная культураль.ная среда, разбавленная в 4 раза,становится неблагоприятной для жизнедеятельности Эцпа 1 е 11 а ва 1 дпа и онииз плотной Исходной суспенэии.в поисках более благоприятных по освещенности условий перемещаются тольков среду, содержащуюся в левой трубке,т.е. их осмотаксис положителен толькопо отношению к исходной среде, разбавленной не более чем в 2 раза. Формула изобретения Способ определения оптимального состава среды для культивирования подвижных микроворорослей, включающий выращивание микроводорослей в сосуде с контрольной средой с последующим контактированием полученной культуры водорослей с исследуемой средой и определением токсической реакции микроводорослей по отношению к исследуемой среде, о т л и ч а ю щ и й - с я тем, что, с целью повьппения точности и упрощения способа, контактирование культуры водорослей с исследуемой средой осуществляют путем создания поверхности раздела фаз с исследуемой средой, находящейся по крайней мере в орном сообщающемся сосуде с сосудом с контрольной средой, с последующей инкубацией культуры водорослей. Составитель Е.ЗолотухинаТехред А.Кравчук Корректор И.Эрдейи Редактор М.Недолуженко Заказ 7036/20 Подписное Тираж 500 Производственно-полиграфическое предприятие, г, Ужгород, ул. Проектная, 4 ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5