Способ получения пролактина

Союз Соввтс нихСоциалистичвскикРвспублик ОП ИСАКИИИЗОБРЕТЕН ИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ и 971342(51)М. Кл. с присоединением заявки М А 61 К 37/32 3 веудвретюнын комитет СССР ао двам изобретений н открыткЯ(72) Авторы изобретения Всесоюзный научно-исследовательский институт технологиикровезаменителей и гормональных препаратовц.,(7) Заявитель(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОЛАКТИНА 1Изобретение относится к химико- фармацевтической промышленности и касается получения лекарственных средств из сырья животного происхождения.Известен способ получения пролактина, включающий экстракцию гипофизов свиней или крупного рогатого скота, осаждение сырца гормона органическим растворителем, его растворение, последующее отделение из полученного рас- твора балластных веществ, очистку с помощью хроматографии на ДЭАЭ-целлюлозе, элюирование гормона и выделение целевого продукта 1.Однако известный способ трудоемок (250 ч) и не обеспечивает получение гормона достаточно высокой активности (30 ЕД/мг). Целью изобретения является упроще. ние технологического процесса и повышение активности целевого продукта.Поставленная, цель достигается тем, что в способе получения пролактина включающем экстракцию гипофизов свиней или крупного рогатого скота, осаждение сырца-гормона органическим растворителем, его растворение, последующее отделение из полученного раствора балластных веществ, очистку с помощью хроматографии на ДЭАЭ-целлюлозе,элюирование гормона и выделение целевого продукта, к раствору сырца гормона добавляют уксусную кислоту до рН5,0-55, образовавшийся осадок послеего отделения растворяют в воде, к полученному раствору добавляют водныйраствор аммиака до рН 7,0-8,0, очистку на ДЭАЭ-целлюлозе проводят из 0,253 ного раствора ацетата аммония, а элюирование осуществляют 0,5-ным раствором ацетата аммония, в полученномэлюате устанавливают рН 5,0-5,5 иполученный осадок промывают спиртом. П р и и е р 1. 100 г кислого .аце,тонированного порошка, полученного из 3,6 кг гипофизов свиней; растворяют в3 9713 10 л 0,6-ного раствора уксусной кис" лоты и к раствору добавляют около 100 мл 123-ного водного раствора амми. ака до рН 5,0 . Осадку дают сформироваться в течение 2 ч при комнатной температуре, затем надосадочную жидкость декантируют, осадок отделяют центрифугированием. Надосадочную жидкость используют для получения кортикотропина (АКТГ), а осадок растворя О ют в воде при рН 9,0-9,5 (добавляя раствор аммиака), затем устанавливают рН 7,0 (добавляя уксусную кислоту)и оставляют для формирования осадка на 10-12 ч. Осадок балластных белков от деляют центрифугированием, а в растворе устанавливают рН 5,0 (прибавлением уксусной кислоты) . Через 10- 12 ч осадок отделяют центрифугированием, промывают ацетоном и сушат в вакуум- сушильном шкафу, Выход сырца составляет 10 г.2 г сырца растворяют в О, 1 л воды при рН 9,5, затем устанавливают рН 7,7 (прибавлением уксусной кислоты) 2 з и отделяют осадок балластных белков. В растворе устанавливают рН 5,0 (уксусной кислотой), выпавший осадок отделяют, растворяют в 1,0 л 0,253-ного раствора ацетата аммония при рН 8,2. зо Раствор пропускают через колонку, на полненную 10 мл ДЭАЭ-целлюлозы. По окончании сорбции колонку промывают 20 мл 0,253-ного раствора ацетата аммония (рН 8,2), а затем 70 мл 0,5- ного раствора ацетана аммония с рН 8,3. Во фракции, элюирующейся 0,53- ным раствором, доводят рН до 5,0 (уксусной кислотой) и оставляют для формирования осадка на 10 ч при 5 С, По Оо лученный осадок промывают спиртом, ацетоном и сушат в вакуум-сушильном шкафу. Активность полученного пролактина ч 0 ЕД/мг.П р и м е р 2. 100 г кислого ацето 45нированного порошка, полученного из6,7 кг передних долей гипофизов крупного рогатого скота, растворяют в 10 л . 0,6-ного раствора уксусной киспоты ик раствору добавляют около 120 мл 121-фОного водного раствора аммиака до рН5,5. Осадку дают сформироваться в течение 2 ч при комнатной температуре,затем надосадочную жидкость декантируют,.осадок отделяют центрифугирова- ффнием. Надосадочную жидкость используют для получения кортикотропина, а оса. док растворяют в воде при рН 9,0-9,5,4затем устанавливают рН 7,5 и оставляют для формирования осадка на 10- 12 ч, Осадок балластных белков отделяют центрифугированием, а в растворе устанавливают рН 5,5 (прибавлением уксусной кислоты). Через 10-12 ч осадок отделяют центрифугированием, промывают ацетоном и сушат в вакуум-сушильном шкафу. Выход сырца составляет 10 г.2 г сырца растворяют в О, Г л воды при рН 9,5, затеи устанавливают рН 7,5 и отделяют осадок балластных белков. В растворе устанавливают рН 5,5, выпавший осадок отделяют, растворяют в 1,0 л 0,253-ного раствора ацетата аммония (рН 8,2), затем пропускают через колонку, наполненную 10 мл ДЗАЭ- целлюлозы, По окончании сорбции колонку промывают 20 ил 0,25-ного раствора ацетата аммония, а затем 70 мл 0,53- ного раствора ацетата аммония с рН 8,2. Во фракции, элюирующейся 0,53- ным раствором, доводят рН до 5,5 (уксусной кислотой) и оставляют для формирования осадка на 10 ч при 5 ОС, Полученный осадок промывают спиртом, ацетоном и сушат в вакуум-сушильном шкафу. Активность полученного пролактина составляет 37 ЕД/мг.Предлагаемый способ позволяет упростить технологический процесс за счет исключения таких операций как гельхроматография, диализ, лиофильная сушка и сократить продолжительность процесса с 250 ч до 80 ч, а также повысить в 1,5-2 раза активность препарата,Высокая степень чистоты препарата позволяет расширить спектр его применения в медицине.Формула изобретения. Способ получения пролактина, включающий экстракцию гипофиза свиней или крупного рогатого скота, осаждение сырца гормона органическим растворителем, его растворение, последующее отделение из полученного раствора балластных веществ, очистку с помощью хроматографии на ДЗАЭ-целлюлозе, элюирование гормона и,выделение целевого продукта, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью упрощения технологического процесса и повышения активности целевого продукта, к раствору сырца гормона добавляют уксусную кислоту до рН 5,0-5,5, образовавшийся осадок после его отделения растворяют в воде, к полученному раствору добавляют вод971342и полученный осадок промывают спиртом,Составитель В. БрусиловскаяТехред А, Ач Корректор Н, Король Редактор Г. Прусова Тираж 714 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Иосква, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Заказ 8770/1 филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 3ный раствор аммиака до рН 7,0-8,0,очистку на ДЭАЭ-целлюлозе проводят из0,25-ного раствора ацетата аммония,а элюирование осуществляют 0,53-нымраствором ацетата аммония, в получен-ном элюате устанавливают рН 5,0-5,5 Источникиинформации,принятые во внимание при экспертизе 1. Патент Англии У 1083855,кл. А 5 В, опублик, 1967 (прототип)