Штамм рнотовастеriuм маndарамеnsis м-58, 1651, используемый в качестве тестобъекта для определения амилосубтилина

ОП ИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз СоветсиикСфцивлистичесиикРеспублик 11960593(5 З) УДК 576.8,093. 1 (088, 8) с присоединением заявки М 3 ЬеуАеретюай кемктет СССР ав тувам зееретенк 1 и вткрытий(72) Авторы изобретения есоюзный нау нст чно-исследовательсприборостроения(5 Й) ШТАММ РНОТОВАСТЕН ОМ МАЙОАРАМЕМБ 1М, 1651, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ В КАЧЕСТТЕСТ-ОВЬЕКТА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯАМИЛОСУБТИЛИНА.,Кап 1Изобретение относится к микробиологии,Предлагаемый штамм новый, в научно-технической и патентной литературе не описан.Целью изобретения является получение штамма РЬосоЬасег 1 ца вапдаравем в М, 1651,.используемогов качестве тест-объекта для определения амилосубтилина.Штамм Р 1 тооЬастег 1 ца щапдараеепз 1 в М, 1651, выделен во Всесоюзном научно-исследовательском институте приборостроения Главного Управления микробиологической промышлен-.ности при Совете Министров СССР ихранится в коллекции культур микроорганизмов Всесоюзного научно-исследовательского института антибиотиков,Микроморфологические признаки.Бесспоровые палочки 1,0-2,5 МО,Ф 1,0 мкм, с закругленными концами,одийочные и соединенные в пару 2сул нет. Подвижны. При неблагоприятных условиях для роста наблюдают ся плеоморфные формы, Грамотрицате Макроморфологи ческие призна ки. Колонии на рыбо-пептонном агаре (РПА) круглые с ровным краем, беловатые,гладкие и блестящие, старые колонии слегка буреют. Полупрозрачные, слегка выпуклые, с приподнятым центром, мелкозернистые, вязкие Рост по штриху на РПА беловатый, гладкий, блестящий, на рыбо-пептон" ном бульоне (РПБ ) - однородная муть с небольшим рыхлым осадком на дне.физиологические признаки. Растет при концентрации хлористого натрия от 0,5 до 6,03,оптимальный рост при 3-54 хлористого натрияМетаболизм как аэробный, так и ферментативный. Сбраживает до кислот с образованием газа глюкозу, фруктозу, галактозу, без образования газа - глицерин Не сбраживает арабинозу, ксилозу,формула изобретения 3 9605сахарову, мальтозу, лактозу и маннит. Образует нитриты из нитратов.На пептонной среде образует аммиак.Индол не образует. Крахмал не гид"ролизует. Желатийу разжижает.Реак"ция фогес-Проскауэра положительна.факультативный анаэроб.Растет при 370, не растет при 5и 42 ф. Оптимум роста 25-32 С. Оптимум люминесценции около 30 С. Рост 1 рпри рН 6,0"9,0. Люминесцирует в фазеэкспоненциального роста и в течениестационарной фазы 1-3 дня.Штамм РЬойоЬасйегцв вапдаравепзз Ихорошо растет и лююиесци- . ирует на РПА (состав а г/л: камбала 50,0, пептон 5,0, МаС 30,0, во"да водопроводная 1,0 л, агар 20,0Способ приготовления; камбалу безкостей и кожи размельчают и замачивает в воде на 2 ч, затем кипятят втечение 1 ч и профильтровывают через .вату.В вытяжку добавляют пептон и хлористый натрий, доводят рН до 7 у 3 р 5разливают по колбам и добавляют агар.Стерилизуют при 1 ати 20 мин, мясопептонном агаре с 3 хлористого натрия, пептонно"глицериновом агаре(состав в г/л: пептон 5,0, глицерин20,ф, МаС 30,0, агар 23, вода водопроводная 1,0 л рН 7,2),Оптимальные температуры инкубации25-32 С. Время инкуЬации 18-24 ч,при высеве из-под вазелинового масла может увеличиваться до 36-48 ч..При использовании штамма в качестве тест-организма на амилосубтилин неоЬходимо получить его в интенсивно светящейся форме, для чеголиофи;пизированную в желатино-сахарозной среде (состав в г/л: сахароза100,0, желатин 15,0, вода дистиллированная .1,0 л, стерилизация 2 дняпо 0,5 атм, 30 мин), культуру высевают в жидкую рыбо-пептонную средуили мясо-пептонный бульон с 34 хлористого натрия и после 18-48 ч инкубации делают пересев на твердыеагаризованные среды того же составачили при хранении культуры под вазе флиновым маслом делают высев непосредственно на вышеуказанные твердыесреды.Инкубацию на твердых средах ведут при 30 С в течение 18 ч, после чего.штамм проверяют в темноте на интен 93 4сивность свечения, а затем культуру смывают с поверхности агара и ,тщательно суспендируют в минималь. ной среде (состав в г/л; МаС 1 30,0, ЙаН 2 РО,. 5,3 К,НРО, 2 у 1 т (МН,)НРО 4. О, 5, Иф О О, 1, глицерин 3 мл, вода дистиллированная 1,0,л, рН 7,2 Я.П р и и е р, В химически чистую посуду производят смыв пыли, содер" жащей амилосубтилин, с поверхности или фильтра минимальной средой.ПроЬу тщательно перемешивают до возможно полного растворения амилосубтилина и порциями по 4,мл переносят в химически чистые .пробирки. При большом загрязнении и значитель-ном количестве пыли следует сделатьразведения пробы. Все определения проводят в тройной повторности с соблюдейием стерильности.Параллельно методом разведения готовят ряд контрольных пробирок с минимальной средой, содержащей амилосубтилин в убывающих концентрациях от 0,2 до 0,0125 мг/мл для построения стандартной кривой.На чертеже показана калибровочная кривая зависимости интенсивности свечения тест-организма Иот концентрации амилосубтилина в пробе.Во все опытные и контрольные пробирки одновременно вносят по однойкапле суспензии клеток мутанта РЬойоЬассегцв вапдаравепзз И, тща. тельно перемешивают и ставят наинкубацию на 18 ч при 30 С. После окончания инкубации опытные и контрольные пробирки извлекают из термостата, тщательно перемешивают и регистрируют их свечение визуально или на приборе - люьинометре. Сопоставляя интенсивность свечения опытных проб с пробами ряда контрольных пробирокопределяют концентрацию амилосубтилина в опытных пробах. Штамм РЬогоЬасйег.цв вапдаравепзз И, 1651 (коллекция культур микроорганизмов ВНИИА), используемый в качестве тест-обьекта для определения амилосубтилина.960593 1 вврФ ааое щи оло ректор А аз 7251/ВНИИ пи сное г. Ужгород, ул, Проектна лиал ППП "П Составитель В актор Л.филиппова Техред З.ПалТираж 7 .Государственного комите елаи изобретений и откры , Москва, Ж, Раушская СССРйаб., д. Ы