Способ получения реагентов для определения наследственных антигенов групп крови животных

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИН А 1 0 О 1 И 33/5 504 А 01 К 67 ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ ТЕЛЬСТ А ВТОРСНОМУ сследователства каро зование группных. М.: КоАГЕНТОВ ДЛЯ Х АНТИГЕН тся к иммуноспользовано ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ(56) Тихонов В.Н. Исполкрови при селекции живолос, 1967, с. 392.(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РЕОПРЕДЕЛЕНИЯ НАСЛЕДСТВЕННЬГРУПП КРОВИ ЖИВОТНЫХ(57) Изобретение относибиологии и может быть и в биопромышленности при изготовлении реагентов, применяемых в скотоводстве для генетического маркирования и контроля происхождения племенных животных. Целью изобретения является увеличение выхода реагентов.Иммунную сыворотку, полученную от животных, содержащую антитела к нескольким ант генам в титре 1:1 или выше, абсорбируют раздельно по фракциям. соответственно их специфичности к антигенам используя эритроциты свежевзятой кро ви, затем каждую абсорбированную фра цию элюируют при 59-60 С в течение 3-4 мин. 1 .табл.Изобретение относится к иммунобиологии и может быть использовано вбиопромьппленности при изготовленииреагентов, применяемых в скотоводстве для генетического маркирования и5контроля происхождения племенныхживотных,Целью изобретения является увеличение выхода реагентов,Для этого иммунную сыворотку, содержащую антитела к нескольким антигенамв титре 1;8 или вьппе, абсорбируют раздельно по фракциям соответственно ихспецифичности к антигенам, используяэритроциты свежевзятой крови, затемкаждую абсорбированную фракцию элюиг.руют 3-4 мин при 59-60 С в центрифуж-.ных стаканах объемом 0,75-1,0 л и по. -лучают реагент. 0П р и м е р, Изоиммунная сыворотка,полученная от быка 2851 в объеме 3 л,содержит антитела к антигенам 1, Хи И в титрах 1:8, 1:8 и 1:16 соответственно. При обработке сыворотки нацентрифугах 8-60 и Киспользуютсвежую цитратную кровь забиваемых на ьмясокомбинатах быков с установленнымидо убоя антигенами групп крови.Антитело к антигену Х абсорбируют 30путем смешивания сыворотки с равнымобъемом отмытых эритроцитов животных,имеющим антиген Х при отсутствииантигенов 1 Ъ и Ч. Через 10 мин смесьцентрифугируют в течение 10-12 мин,сыворотку отсасывают, осадок эритроцитов 5-кратно промывают физиологи-ческим раствором.К осадку эритроцитов после промы-,вания добавляют равный объем подогреотого до 54-56 С физиологического раствора хлористого натра, Компонентысмешивают, стаканы с суспензией переносят в водяную баню с температурой,59-60 С. По достижении температурывнутри стаканов 59-60 С суспензиювыдерживают в бане 3-4 мин, помешивая мешалкой, затем без промедления.центрифугируют 5-6 мин при 30004000 об/мин. Надосадочную жидкость отсасывают и получают реагент к анти" гену Х в объеме 2,9 л.Затем сыворотку абсорбируют эритроцитами животных, имеющих антиген Ж при отсутствии антигенов 1 и Х. После центрифугирования смеси сыворотку отсасывают и получают из нее реагент к антигену 1 р (2,9 л). Фиксированные на эритроцитах антитела элюируют описанным приемом и попучают реагент к антигену И (2,9 л).В результате из сыворотки получают 3 реагента; 12 - абсорбцией, Хи У - элюцией. Реагент их элюата представляет собой светлую или слегка розоватую в толстом слое опалесцирую щую жидкость, содержащую специфические антитела к тому антигену, с помощьюкоторого они сорбированы. Реагенты из элюатов испытывают на специфичность и активность в параллельных гемолитических тестах с эталонами на образцах крови разных пород скота,Фрагмент гемолитического теста на образцах крови черно-пестрого скота представлен в таблице (гемолиз полный обозначен цифрой 4, частичный- цифрами 1-3, отсутствие гемолиза - точкой).Как видно из таблицы, по специфичности и активности реагенты, изготовленные из элюатов, соответствуют эталонным реагентам.Формула изобретенияСпособ получения реагентов для определения наследственных антигенов групп крови животных, включающий получение от животных изоиммунных сывороток с последующимвьщелением из них абсорбцией и элюцией реагентов, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения выхода деленого продукта, абсорбцию проводят раздельно по фракциям соответственно их специфичности к антигенам, а элюцию каждой фракции осуществляют при 59- 50 С в течение 3-4 мин.1405755 ВУи/и Образцы крови Реакция гемолиза Реагент Х Реагент У Наличиеантигена Элюат Элюат Эталон Эталон разведенный разведенный не не разверазве 1:4 1:8 1:2 1:4 1:8 1:2 денный денный 1 О 4 4 12 4 3 15 18 4 3 2 26 4 4 1 31 32 35 4 4 38 3 1 Составитель И,ТарееваТехред М.Дидык Корректор Г.Решетник Редактор М,Келемеш Заказ 3122/3 Тирам 519 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитетаСССРпо делам изобретений и.открытий113035, Москва, Ж, Раушская ваб., д. 4/5 Производственно-полиграфическое .предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 4 Х 2,М 4