Способ определения эстрона или этинилэстрадиола

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ Союз СоветскихСоциалистическихРеспублик К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(22) Заявлено 15. 07. 80 (21) 2959643/23-04с присоединением заявки Мо(5) М. Кл.з а 01 М 31/0 О Государственный комитет СССР по делам изобретений и открытий(088. 8) Опубликовано 2305.82. Бюллетень М 19с Дата опубликования описания 23. 05. 82Всесоюзный научно-исследоват фармации и Ордена Ленина инсфизики АН СССР ьскийтут хи Заявител(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭСТРОНА ИЛИ ЭТИНИЛЭСТРАДИОЛА лянокислого гидрохинона и и-нитрофенола с образованием окрашенного раствора, который анализируют колориметрическим методом 21.Недостатком известного способаявляется сложность определения засчет необходимости предварительногополучения окрашенного производного 10 гормона.Цель изобретения - упрощение способа.Поставленная цель достигается тем,что согласно способу определенияэстрона или этинилэстрадиола анализируемую пробу растворяют в кумоле,добавляют азобисизобутиронитрил,через полученную. смесь пропускаюткислород, термостатируют ее при 6065 С и измеряют скорость поглощениокислорода, при этой же температуре. Я На чертеже показан график зависимости поглощенного кислорода от времени в реакции инициированного окисления кумола в присутствии ингибитора.В основе способа количественного определения стероидных гормонов лежит кинетический метод огтредея ни я их концен трации, осушес:твл немал и, -зиИзобретение относится к аналити ческой химии, а именно к способу ко личественного определения стероидных гормонов эстрона и этинилэстрадйола, и может быть использовано при анализе эстрогенных препаратов, которые широко используются в медицинской практике.Известен способ определения эстрона или этинилэстрадиола, который состоит в том, что в бутыль с порошкообразным гидрофобным адсорбентом вводят эстрогенсодержащую жидкость, после адсорбции эстрогена из бутыли удаляют жидкость, проьывают адсорбейт, после чего вводят жидкость, растворяющую эстроген, полученный раствор удаляют из бутыли, добавляют к нему сложный или простой эфир гидрохинона и с помощью серной кислоты хроматографируют 1)Недостатком известного способа является относительно невысокая точность и большая продолжительность определения.Известен способ определения эстрогенов путем экстрагирования анали руемой пробы спиртом, получения при отгонке растворителя сухого остатка и взаимодействия его с раствором со-ф".гк,.гтем проведения реакции инициированного окисления кумола кислородом,Введение ингибитора в окислительную систему приводит к резкому снижению скорости реакции окисления, что обусловлено участием молекул ин гибитора в стадии обрыва цепи. После полного израсходования ингибитора скорость реакции окисления значительно возрастает и принимает характерное для нее значение. Время действия ин гибитора (период индикации) прапор"ционально его начальной концентрации.Стероидные гсэмоны (эчтрон и этинилэстрадиол) являются ингибиторами реакции инициированного окисления кумола кислородом.Способ осуществляется следующим образом.Готовят реакционную смесь, содержащую (1,0"1, 3)1 10 4 моль/л анализируемого препарата.и определенное количество инициатора азобисизобутиронитрила (для эстрона 18-25 мг, для зтиленэстрадиола 12-15 мг) в кумоле с таким расчетам, чтобы общий объем ее составлял 5 мл, Сосуд с реакционной смесью продувают кислородом, присоединяют к газометрической установке, термостатируют,:перемешивают и измеряют поглощение кислоро- ЗО ,да во времени. Газометрическая установка состоит из измерительной. бюретки, соединенной с помощью резиновой трубки через нижнее отверстие с уравнительной склянкой и через верх нее отверстие . - с реакционным сосу,дом. Бюретка заключена в стеклянную термостатируемую (250 С) рубашку.4На полученной,кинематической кри вой поглощения кислорода определяют периодом индикации по точке пересечения двух прямых, связанных соотношением Ьус( -- 21 дс. Первая прямая является прямой, на которую "выхо,дит" кинематическая кривая после израсходования ингибитора, а вторая .есть касательная к кривой в точке, для которой скорость реакции в два раза меньше скорости после израсходованин ингибитора. По найденному значению периода индикации рассчитывают содержание гормона в препарате по Формулед КЧ ЧЮм бЧл 551 ООЪ= (00 Чгде- период индикации за вычетомэффективного времени прогрева реакционного сосуда бО (2 мин), срЫ - скорость инициирования, соответствующая взятой в опыт навеске азобисизобутиронитрила,моль/л с (Ы =6,27 10 моль/л с 5 соответствует 5,05 мг инициатора при 60 С и 2,38 мг -при 650 С);коэффициент ингибирования,равный числу обрываемых цепей одной ингибирующей группой (для рассматриваемых гормонов Г равен 2);и - число ингибирующих групп вмолекуле ингибитора (для рассматриваежх эстрогенных гормонов п равно 1);М - молекулярная масса гормона;Ч - общий объем реакционной смеси,равный 5 мп;объем исходного раствора препарата, мл,объем раствора препарата,взятый на реакцию, мл,навеска препарата, мг.П р и м е р 1. Количественное определение э страна.В сухой реакционный сосуд черезстеклянную воронку помещают 17,4 мгазобисизобутиронитрила 0,1 мл предварительно приготовленного растворапрепарата (14,2 мг в 10 мл ацетонамарки "ОС 4") и 4,9 мл кумола, Сосудс реакционной смесью продувают кислородом, присоедин яют к газометрической установке, термостатируют при60 С и спустя 3-5 мин снимают кинетическую кривую поглощения кислоро.да при постоянном перемешивании. Покинетической кривой определяют сучетом эффективного времени прогревареакционной смеси период индукции,равный 16,0 мин. Содержание эстронарассчитывают по Формуле (С=993)П р и м е р 2Количественноеопределение этинилэстрадиола.В сухой реакционный сосуд помещают11,9 мг азобисизобутиронитрила,0,1 мл раствора препарата (19,3 мгв 10 мл ацетона) и 4,9 мл кумола.Дальнейшее определение ведут по методике, описанной в примере 1 при65 С. Период индикации 14,0 мин.Содержание этинилэстрадиола 101.Ошибка определения указанных гормональных препаратов составляет 1-2 ,Формула изобретенияСпособ определения эстрона илиэтинилэстрадиола, а т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью упрощения способа, анализируемую пробурастворяют в кумоле и добавляют азобисизобутиронитрил, через полученнуюсмесь пропускают кислород, термостати 0руют ее при 60-65 С и измеряют скорость поглощения кислорода при этойже температуре.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Патент Японии Р 54-35118,кл, 113 Еб, опублик. 1979.2.Патент ФРГР 2049526,кл. С 03 й 33/14,опублик. 1971 (прототип),930111 Подписи Тираж 883И Государственного комитетадепам изобретений и открыт5, Москва, Ж, Раушская н 56/55 ВНИ