Способ дифференциации культур васillus тнuringiеnsis

Оп ИСАНИЕИЗОБРЕТЕН ИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз СоветскикСоцналистнческнаРеслублкк(23) Приоритет(5)М. Кл. С 12 М 1/00 Веуаврстювй квкнтвт СССР аф далеи вэебрвтеннЯ и вткрытиЯ(53) УВК 578.6.. 078(088. 8) Опубликовано 15 05 82 Бюллетень М 18 Дата опубликования описания 15. 05. 82(72) Авторы изобретения Л.А.Чил-Акопян и С.З.Чарчян Институт микробиологии АН Армянскфй ССР;(5 Й) СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ КУЛЬТУР ВАС 11.05 ТНОй 1 М 61 ЕМ 515 Изобретение относится к микробио логии, а именно к изучению энтомопатогенных бактерий, используемых в про изводстве бактериальных инсектицидных препаратов. Оно может быть использовано как в научно-исследовательских целях при селекции высокопродуктивных штаммов Вас 111 цэ йЬцг 1 пд 1 епы з, так и в практической работе, при производстве инсектицидных препаратов из культур этого вида.Культуоальные признаки бактерий Вас 1.1.1 цэ спцг 1 пд 1 епз 1 э при выращивании их на различных питательных средах весьма ограничены и по характеру колоний нельзя отличить клоны, образующие и не образующие кристалловидные токсины.Имеются данные о дифференциации по морфологическим особенностям колоний 13.Однако связи характера колоний с наличием или отсутствием кристаллов в культуре не отмечается. 2Известно также выявление кристаллообразования разными способами микроскопического исследования в свето"вом и электронном микроскопах 123.Однако определение известнымиспособами в культурах Вас. спцгпд 1епв 1)э кристаллообразования, и тем.более, численного соотношения в,нейВкристаллообразующих и бескристальоных клонов затруднено трудоемкостьюмикроскопических исследований с большой затратой рабочего времени. Последнее ограничивает возможности проведения больших объемов исследований, требующих учета кристаллообраэованияу отдельных колоний, в частности,при массовых анализах на производст:ве.Цель изобретения - ускорение процесса дифференциации культур Вас 1 11 цз йЬцг 1 пд 1 епз 1 з.Цель достигается тем, что согласно способу дифференциации культур,Вас 11 цэ сЬцг 1 пд 1 епз 15 культивируНтаммы Исследовано колоний каждого штаммаИсследова. но штаммов Окраска колоний Ф ПигментПигмент + Кристалл Кристалл + Кристалл Кристалл + 837 839 841 844 876 880 889 893 896 12 917. 1096-3 853 1 Розовая 805 811 2831 873 875884 895 905914 915 918919871 1113879 891887888921924 Смеськолоний розовые ибез пиг 5 3 1 80 50 5 8 28 503 92785 ют на яичножелтковой агариэованной среде, а колонии отбирают по розовому окрашиванию.Способ заключается в использовании установленной прямой корреляции пигментообразования некоторых разновидностей Вас. т.пцг 1 п 9 1 епы э с образованием энтомоцидных кристаллов, Колонии, образующие кристаллы, дифференцируют от колоний, не обраэую щих кристаллы, визуально, по культу. ральному признаку, а именно: пигменту розового цвета на 103-ной эмуль,сии яичного желтка в физиологическом растворе с 33 агар-агара. Яичный 15 желток из асептически вскрытого яйца добавляют в растопленный и остуженный до 40-50 оС стерильный физиологический раствор с агаром. После тщательного перемешивания среду раз ливают в чашки Петри, на которые рассевают суспензию исследуемой культуры. Инкубация проводится при 28 30 С в течение 2 сут.Кристаллообразующие колонии диф- И ференцируются визуально по их розовому цвету, в отличие от беловатой пигментации колоний, не образующих кристаллов.ДифФеренциацию кристаллообразования пигментированных культур осуществляют с обязательной индивидуальной микроскопией каждой колонии. Установленная между кристаллообразованием и пигментообраэованием корреляция подтверждена при исследовании рассевов пигментообразующих культур Вас.сМг 1 пя 1 епэ 15 на вышеуказанной питательной среде. П р и м е р 1. Культуры разновидности сацса 51 сцэ состоят иэ штаммов, различных по составу пигментных и апигментных клонов. Одни культуры состоят. полностью иэ пигментных клонов, другие - из апигментных, третьи - из их смеси.Корреляция образования кристалловидных токсинов с пигметообразованием у культур Вас.йЬцг 1 пу 1 епэ 1 э ч сапсаэ 1 сцэ приведена в табл. 1.Таблица 15 927854 6Как видно из табл. 1 данные мик- антигену. Это устраняет предположероаналиэа выявляют связь образова- ние о воэможности наличия в культуре ния кристаллов с пигментообразованием. посторонних Вас.сегецэ.ФСерологические исследования показывают, что выделение из культур . 5 П р и м е р 2. Коррекляция обракристаллофоров разновидности сац- зования кристалловидных токсинов с саэ)сцэ штаммы апигментных некрис- пигментообраэованием у культур серо таллофоров (24 штамма) оказывают- пита "А" Вас.СЬцг 1 пд 1 епэ 15., привеся гомологичными сацса 51 сцэ по Н- дена в табл. 2. Таблица 2 Исследовано колоний каждого штаммаИсследовано штаммов Штаммы Окраска колоний ПигментПигмент + Кристалл Кристалл Кристалл КристаллРозовая 32,43 827,855,862 5 881,903,848,854 1 О Без пигмента 695 716 Приведенные в табл. 2 данные свизюдетельствуют о том, что среди куль.тур серотипа "А" имеются штаммы,полностью пигментированные или совершенно без пигмента. Смешанных пигментных и апигментных культур средиимеющихся не оказалось. Имеет местополная корреляция пигментации и образования кристаллов.П р и м е р 3. Исходная культураВас.йЬцг)пд 1 еп 515 ч, сацса 51 сцэ 924аохарактеризуется 10-ным кристаллооб.разованием. При рассеве она состоитиз 54 розовых и 951 апигментных клонов. После двух последовательных рассевов и выделений изолируют два кло 45на - апигментный и пигментный. Первый характеризуется отсутствием кристаллов, а второй - 504-ным образованием кристаллов,Определение кристаллообразования50по пигментации колоний, вместо микроскопии, значительно упрощает работы с пигментообразующими культурами Вас. СЬцг)пд)епы 5. Визуальнаяоце нка кристаллообраэования выполняется ориентировочно в 10-50 раз быст-.рее, чем микроскопически. формула изобретения Способ дифференциации культур Вас 111 цз йЬцг)пд 1 епэ)э, включающий культивирование последней на твердой питательной среде и отбор выросших колоний, а т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью ускорения процесса дифференциации, Вас)11 цэ йЬцг 1 пд 1 еп" в)э культивируют на яичножелтковой агаризованной среде, а колонии отбирают по розовому окрашиванию. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе1. Гукасян А.Б. и др. Биология и культивирование микроорганизмов. Красноярск, 1969, с.83.2. Норрис Дж. Микроорганизмы в борьбе с вредными насекомыми и клещами. М "Колос", 1976, с.100"142 (прототип). ВНИИПИ Заказ 3170/36 Тираж 505 Подписное Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул, Проектная,