Способ определения степени дегидратации стекловидного тела

Свез Советских Соцналнстнческня РеспубликОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВ ЕТЕЛЬСТВУ оо 894507(22) Заявлено 14,04.80 (21) 2927225/18-25с присоединением заявки Нов(53)М. К . 6 01 й 24/08 ГосударственныЯ вомнтет СССР по делам нзобретеннЯ н открытнЯ(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТЕПЕНИ ДЕГИДРАТАЦИИСТЕКЛОВИДНОГО ТЕЛА Изобретение относится к медицине и может быть использовано для оценкй дегидратирующего действия препаратов, используемых в офтальмологии, в частности для лечения глаукомы.Известен способ определения степени дегидратации стекловидного тела, заключающийся в том, что через отверстие в роговой оболочке на переднюю поверхность хрусталика помещают груз и по степени его смещения определяют уменьшение или увеличение объема стекловидного тела,на основании которого судят о степени его дегидратации 1. 5Однако этот способ неточен, поскольку отклонение груза может проис" ходит не только в результате дегидра. тации,но и за счет натяжения циновых связок и работы цилиарной мышцы. 20 Кроме того, в этом способе не учитывается влияние давления со стороны тканей, окружающих глазное яблоко, а также эластичность склеральной капсу 25При осуществлении этого способа на. носится обширная травма глаза (кератоэктомия и введение в переднюю камеру глаза крупного инородного тела), что вызывает ответную реакцию глаза, Ю а в стекловидном теле эта реакция может проявиться в виде изменения чис"ла гидратацни.Наиболее близким по техническойсущности к предлагаемому являетсяспособ определения степени дегидратации стекловидного тела, основанный на определении количества воды,поглощенной препаратом из стекловидного тела. В этом способе оцениваютстепень дегидратации при помощи вис"козиметра2 ,Однако этот метод нельзя признать точным и объективным, так какне существует полного параллелизмамежду вязкостью стекловидного тела исодержанием водя. Вязкость стекловидного тела определяется не только содержанием воды, но и содержанием мукополисахаридов, в частности гиалуроновой кислоты, а также рН стекловидного тела,Цель изобретения - повышение точности способа.Поставленная цель достигается тем,что в способе определения степени дегидрации стекловидного тела, основанном на определении количества воды,поглощенной препаратом из стекловидного тела, снимают спектр ядерногоагнитного резонанса (ЯМР 1 дегндратированного образца при 1-25 С, затемобразец охлаждают до (-10)-(-14) С,выдерживают при этой температуре 4560 мин, вторично снимают спектр ЯМРи вычисляют отношение площади подсигналом поглощения воды при (-10)(-14) С к площади при 1-25 С, далееаналогичным образом при тех же температурах снимают спектры ЯМР и вычисляют отношение площадей для интактного образца, после чего определяютстепень дегидратации исследуемогообразца,В основе способа лежит тот факт,что ниже ОфС в биологических объектах остается невымороженной вода, молекулы которой непосредственно связаны с гидрофильными. центрами биологических макромолекул и других веществ, входящих в состав биологичесжого материала.В спектре ядерного магнитногорезонанса (ЯИР) высокого разрешениятаких объектов при низких темнературах сигнал молекул воды регистрируется в виде сравнительно узкой полоса, интенсивность которой пропорциональна количеству невымороженной(т,е. связанной) воды.установлено, что при дегидратации,стекловидного тела глаза происходитпотеря свободной воды, а количествосзязаиной воды (в расчете на единицу сухого веса стекловидного тела) остается неизменным.Ори дегядратации стекловидноготела интенсивность линии ЯИР невыморожеииой воды в нем становитсябольше, чем в случае интактного образца такого же объема, поскольку врезультате потери свободной водывозрастаетконцентрация белковыхмакромолекул и других веществ в ис-.следуемом объекте,Из сравнения интенсивностей линийЯИР воды в замороженных интактныхи дегидратированных образцах можно найти степень дегидратации.Способ осуществляют следующим образом,Через 30-45 мин после виутривеиного введения дегидратаита энуклеируа)т глаза животного и извлекаютстекловидное тело, которое помещаютв пробирку спектрометра ЯИР вместе сэталонным веществом - тетраметилсиланоМ (ТИС), находящимся в. запаянномстеклянном капилляре. При 1-25 С они;мйот протонный спектр ЯИР, после чего образец охлаждают до(-10) -(-14 С/выдерживают при этой температуре45-60 мин и снова снимают спектр ЯИР,Для каждого иэ спектров находятотношение площадей под сигналами поглощения воды и ТМС. Первое из этихотношений Ь 4 (при 1-25 С) являетсямерой количества всей воды вобразце в относительных единицах, второе Ь,( при (-10) - (-14 ГС) - мерой количества невымерзшей или связаннойводы в тех же единицах. Разделиввторое отношение на первое, находятколичество связанной воды относительно все 1 воды в стекловидном теле:ЬаФиАналогичным образом проводят измерения н вычисления отношения площадей под сигналами воды и ТМС, Ь иЬ для интактного стекловидного телаколичество связанной воды Ье в кото".ром принимают за контроль. Степеньдегидратации стекловидного тела днаходят по формулеР , % = И-Ь Фэ) 4 ООЬ,П р и м е р. Кролику внутривенновводят дегидратант-полиэтиленоксид сЩ молекулярной массой 400ПЭОввиде 20 раствора, содержащего на1 кг масси кролика 1,5 г чистоговещества, Через 30 мин глаз энуклеир 9 ют и извлекают стекловидное тело.Объект помещают в ампулу спектромет-.ра ЯМР вместе с эталоном - ТИС в эа,паянном стеклянном капилляре. Ампулупомещают в датчик спектрометра ЯИРвысокого разрешения РНс рабочей частотой 60 ИГц для протонови снимают спектры ЯИР. На Фиг. 1представлен спектр ЯИР, полученныйпри 25 С. Отношение площадей подсигналами воды и ТИС, Ь для этогоспектра равно 17,96. После этогообъект охлаждают непосредственно идатчике спектрометра до -12 С, выдерживают при этой температуре 45 мнви снова снимают спектр ЯИР (Фиг. 2Из полученного спектра находят от 40 ношение площадей под сигналами поглощения воды и ТИСЬ 2 0,622.Иа основании полученных результатов вычисляют количество связанной4 воды (в безразмерных единицах относительно всей воды образца) в стекловидном теле глаза кролика после гвведения ПЭ 0-400,. 0,622) , =- 0 03463Аналогичным образом проводят ис:следования на интактных глазах, откуда находят количество связаннойводы (в тех же безразмерных единицахфф в интактном стекловидном телеЬ 0,02754Полученные величины Ь и Ь используют для расчета степени дегид"ратации стекловидного тела под дейЩ ствием ПЭО0 03463 1 .РО 27 4 )40 о -25,7 /о.894507 Формула изобретения Рие.8 Составитель В.ПокатТехред М. Гергельтвювтеттт евюЪиТираж 910ударственного комитем изобретений и откква, Ж, Раушская ов Корректор А. дзятко Редактор Н.Гришанов 472/68 ВНИИПИ Го по дел 113035, Мосное илиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул, Проектная,Предлагаемый способ обеспечиваетвысокую точность определения степенидегидратации стекловидного тела (погрешность способа +15), посколькупри его осуществлении исследуетсятолько стекловидное тело и на точность определения не могут влиять такие факторы, как давление со сторонытканей, окружающих глазное яблоко,эластичность склеральной капсулы,натяжение циновых связок и работа,цилиарной мышцы,Спсооб позволяет непосредственноопределять степень дегидратации стекловидного тела, а не судить об этомкосвенно, как в известном способесудят об этом по изменению объемастекловидного тела,Способ определения степени дегидЬатации стекловидного тела, основан- щЩ на определении количества воды, поглощенной препаратом из стекловидФ ного тела, о т л и ч а ю щ и й с ятем, что, с целью повышения точностиспособа, снимают спектр ЯИР дегидратированного образца при 1-25 С, затем образец охлаждают до (-10)- (-14),С, выдерживают при этой темпефратуре 45-60 мин, вторично снимаютспектр ЯИР и вычисляют отношение пло.- щади под сигналом поглощения водыпри (-10)-(-14)фС к площади при 125 С, далее аналогичным образом приотех же температурах снимают спектры ЯИР и вычисляют отношение площадей для интактного образца, послечего определяют степень дегидратации исследуемого образца. Я т Источники информации,принятые во внимание при экспертизе