Способ количественного определения 3-цимарозид, к строфантина-

(и)857859 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ Сеоз СфеетскикСоциалистическихРеслублкк К АВТОБУС МУ СВИДОИЛЬСТВУ 1) Дополнительное к авт, саид-а 1)М(22) Заявлено 27,11,79 (21)с присоединением заявки йо(23) Приоритет 677/23-04 И 31/08 осударствеииый комитет СССР во делам изобретеиий и открытийтень 89 2 3,0 8,8 1 Опубликовано 230881, 6 о Дата опубликования описан 53) УДК 543.54(72) Авторы изобретен Я.Давыдов, А,В.Киселев, Д.и Московский ордена Ленина и ордена государственный университет им, И.научно-исследовательский инс ни(54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕЕНИОГО ОПРЕДЕЛ К-СТРОФАНТИДИНА ИЯ ЗИД,эаклюмойнойра сполу киным иИзобретение относится к аналити ческой химии, а именно к способам . количественного определения 3-цимаро зид, К-строфантидина-(цимарина),Йзвестеи способ количественного определения цимарина, основанный иа обработке анализируемой пробы пикриновой кислотой в щелочной,среде с последукщим фотометрированием полученного раствора 1 .Недостаток этого способа низкая точность определения.Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достигаемому результату является способ количественного определения цимарина,чающийся в обработке анализируепробы раствором динитробензойкислоты в присутствии едкого натпоследующим фотометрнрованиемченного Ъри этом раствора 21. Недостатком известного способа является низкая точность определения, поскольку определение является суммар 25 ным так как все гликозиды с пятичленным лактонным кольцом дают аналогичные окрашивания с динитробензойнойслотой, что приводит к недостоверреэультатам анализа, ЗО Цель изобретения - повьвпение точ" ности определения.Поставленная цель достигается тем, что согласно способу количественного определения 3-цюиарозид, К-строфантидина, заключающемся в обработке анализируемой пробы ароматическим соединением, содержащим нитрогруппу, в качестве последнего используют нитробензол и обработку ведут при весовом соотношении З-цимарозид, К-строФантидина- нитробензол 0,25-14-1 в среде водного раствора этилового спир."а с последующим хроматографированием полученной при этом смеси.Смешивают равные объемы исследуемого раствора, содержащего цимарин, и раствора с известной концентрацией нитробензола (играющего роль внутрен" него стандарта) в водно-спиртовой смеси (308 этанола + 708 воды, проценты объемные). Смесь тщательно перемешивают, Затем проводят хроматографический анализ этой смеси, содержащей цимарин и нитробензол. Пробу вводят в колонну жидкостного хроматографа, наполненную адсорбентом, с поверхностнымн гндрофобными функциональньики группами. для детектиро 857859вания используется ультрафиолетовый детектор с переменной длиной волны, настроенной на волну в области210-225 нм. Для хроматографического определения цимарина используются водно-этанольный элюент. Температура хроматографической колонны поддерживается постоянной в интервале от 20 до 700 С. Из полученных хроматограмм определяется площадь пиковцимарина и нитробензола.Процентное содержание Цимарина Сцопределяется по формулеС ,о/о) =5 с (;(о 1Знб К15где 5 ц /5 5 - отношение площадей пиковцимарина и нитробензола на хроматограмме)С 5 - процентное содержаниенитробензола в исход- Щном растворе,К=1,08+-0,04 - константаь, котораянаходится из калибровочного графика.Отношение плсщадей пикон нв зависитот величины введенной пробы, скорости потока злюента и температуры колонны, Необходимо только, чтобы этиполосы не перекрывались.Лучшие результаты получают при использовании элюента, содержащего15-45 объемных процентов этиловогоспирта в воде, колонны из нержавеющейстали длиной 10-25 см и внутреннимдиаметром 3-5 мм, наполненной суспензионным способом силикагелем с размером частиц около 5-10 мкм (к поверхности которого привиты углеводородныерадикалы С -С ) ; ультрафиолетовогодетектора с переменной длиной волны,работающего при длине волны 210-225 нм.40.Выбранная в интервале от 20 до 70 Стемпература колонны поддерживаетсяс точностью +0,1 ОС.Предлагаемый способ позволяетпроводить определение пимарина в 45растворе в интервале концентраций0,001-0,08 с пределом определения 0,0001. Для определения калибровочной константы К берут 5 точных навесок порошка цимарина-стандарта(ФС 42-633-72), от 0,003 до 0,02 гв мерныЕ колбы емкостью 25 мл. Взвешивание проводят на аналитическихвесах "Метлер" с использованиемб значащих цифр. Затем в колбы заливают водно-спиртовую смесь (30 этаиола + 70 воды). После полного растворения цимарина объем раствора доводят до метки той же смесью и раствортщательно перемешивают.Внутренний стандарт готовят точным щвзвешиванием и мерной колбе емкостью25 мл 0,0100 г нитробензола. Затемрастворяют нитробвнзол в такой жеводно-спиртовой смеси (30 этанола+ 70 воды)После полного растворенйя объем раствора доводят той жесмесью до метки и тщательно перемешивают. Затем смешивают в маленькомбюксе с притертой пробкой 1 мл каждого раствора, содержащего цимарин,.с 1 мл раствора внутреннегостайдарта - нитробензола. После этогопроводят хроматографический анализкаждого раствора цимарина, содержащего внутренний стандарт.Строят график, откладывая 5 /5 бцпротив величин С /Сб ,где 5/55 - отношение площадей пиковцимарина и нитробензола на хроматограмме, Сц(.)/Сб- отношение процентного содержания цимарина и нитробензола в исходных растворах. Их этого графика определяют коэффициент К.Для разных серий растворов цимаринаи нитробензола величина К=1,08+0,04.Константа К не зависит от содержанияцимарина и нитробензола в анализируемой смеси.Предлагаемый хроматографическийспособ определения концентрации цимарина в растворах может быть использован для определения биологическойактивности препаратов и растворов,содержащих цимарин.Биологическая активность растворов цимарина в единицах ЛЕД/см можетбыть определена по формуле1 ЯКД/си- (2)Зб кгде 5 /55 - отношение площадей.йпиков цимарина и нитробензола на хроматограм"ме,Сб - концентрация исходногораствора нитробензоластандарта,К - калибровочная константа,равная 1,080,04,коэффициент, связыванхцийпроцентную концентрацию цимарина в растворе с биологическойактивностью, выраженнойв единицах ЛЕД/ем, равной 43 б + 21 ЛЕД/см .П р и м е р 1. Определяют количество цимарина в растворе для инъекций.1 мл раствора цимарина для инъекцийсмешивают с 1 мл раствора нитробензола (0,0383). Проводят хроматографический анализ, Для анализа используют жидкостный хроматограф фирмыСпектра-Физикс 3500 В(СШЛ) с детектором УУ-У 5 770 при длине волны 217 нм,хроматографическую колонну, наполнен ную адсорбентом СЬгоаогЬ ЙРс размером частиц около 7 мкм, дозироночный кран с петлей объемом 70 мкл, Температура колонны 50 С. Скорость потока злюента, состоящего из 30 этанола и 70 ноды, составляет 0,5 мл/мин.Площади пиков цимарина и нитробензола на хроматограмме определяют с по857859 Приготовлено Определенометодомжидкостнойхроматогра.фии, С,0,25 О, 0134 0,0597 О, 0131 0,0614 1,6 0 0455 Оу 0433 3,6 Формула изобретения 40 Составитель Л.Соломенцеваехред С. Мигунова Корректор С.Корние дактор О.Мал Заказ 7233 07ного комитета ий и открытий 5, Раушская на ПодписноСР Тираж НИИПИ Государстве по делам иэобрете 13035, Москва, Жб иал ППП "Патент", г, Ужгород, ул. Проектная мощью интегратора Автолаб ТЧ той же фирмы (США). В качестве внутреннего стандарта используют 0,038 раствор нитробензола в водно-этанольной смеси (30 этанола), Площади пиков цимарина 5 = 114382 мвс, а нитробензола 5= 115398 мвс.114382 О, 0383 С, - 0,035 115398 1,08 115398 1,08 П р и м е р 2. Определяют количество цимарина в растворе для инъекций, Условия анализа те же, что в примере 1. Плошади пиков цимарина 51,= 98430 мвс, а нитробензола 5= 115744 мвс с- 98430 Ос 0383 - 0,030115744 1,08 20ъ 98430 0 0383Ъ 1,ЛЕД/см =- --- - 436 = 13 ЛЕД/см115744 1,08Таким образом, предлагаемый способ определения цимарина в растворах дает воэможность определить только цимарин в растворе,в котором присутствуют еще и примеси других родственных веществ. Кроме того, этот способ экономичен.В таблице приведено определение 30процентной концентрации (С,) З-цимарозид, К-строфантидина-)ь(цимарина) в растворе методом жидкостной хроматографии при различных отношениях массы цимарина, вц, к мас-З 5 се нитробенэола, щ 6, в растворе по времени и затратам,СН Предлагаемый способ находит широкое применение как метод контроля стандартных образцов цимарина и препаратов, содержащих цимарин, их производстве и в процессе хранения. Способ количественного определения З-цимарозид, К-строфантидина-путем обработки анализируемой пробыароматическим соединением, содержащим нитрогруппу, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения точности определения, в качестве ароматическсго соединения, содержащегонитрогруппу, используют нитробенэоли обработку ведут при весовом соотношении З-цимарозид, К-строфантидина-р:нитробензол 0,25-1:4-1 в средеводного раствора этилового спиртас последукщим хроматографированиемполученной при этом смеси.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Сивицкая О.К. Колориметрическоеопределение цимарина в жидком концентрате горицвета 1;2 на 25 спироте. Сборник научных трудов ЦАНИИ.М., 1963, т. 4, с. 123-129.2. Фурсов А.Ф. Колориметрическоеопределение некоторых сердечныхгликозидов, " Аптечное дело. 1961,6 йт. 10, Р 2, с. 33-38 (прототип) .