Способ культивирования содержащих н-антиген

Ы.ТР "ОПИСАНИ Е ИЗОБРЕТЕНИЯ Союз Советских Социалистических Республик(511 М. К . с присоединением заявки МоС 12 К 1/04 Государствеииый комитет СССР по делам изобретений и открытий(54) СПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ЕЯСНЕВ 1 СНХА СОЫ, СОДЕРЖАЩИХ Н-АНТИГЕН Изобретение относится к областимедицины, а именно микробиологии.Известен способ культивированияЕвсЬег 1 с)11 а со 11, содержащих Н-антиген, путем их выращивания на питательной среде в присутствии стимулятора флагеллированности .13Однако Езсйег 1 с)11 а со 11, выращенные известным способом, характеризуются недостаточно высоким содержанием Н-антигена,Целью изобретения является повышение содержания Н-антигена в культуре Езспег 1 сП 1 а со 1 1,15Эга цель достигается тем, что вкачестве стимулятора флагеллированности используют глицерин в концентрации 1-5,Способ иллюстрируется следующимипримерами.П р и м е р 1. Плотную питательную среду, приготовленную на основеперевара Хоттингера и содержащую1,5 агар-агара, ра:тапливают на25водяной бане, добавляют сгерильно2 предварительно обработанногоавтоклавированием глицерина, разливают в бактериологические пробиркипо 5 мл и скашиваютНа поверхность скошенной среды засевают подвижныештаммы эшерихий, не подвергавшиесяпредварительному пассированию черезполужидкий агар в пробирках Крейджии выращивают при 37 о 18-20 ч, Выросшие культуры смывают дистиллированной водой и готовят контрастированные 1-ным раствором уранилацетата препараты для электрон,ной микроскопии. Препараты просматривают вэлектронном микроскопе и сосчитываютв различных участках количество клеток со жгутиками и без жгутиков.В каждом препарате просматривают100-200 бактериальных клеток. Для сравнения готовят и просматривают в электронном микроскопе препараты культуры Езспег 1 сп 1 а со 11, выращенной на хоттингеровском агаре, в которую добавляют 0,2 глюкозы или без добавок как глицерина, так и глюкозы, Для сравнения также готовят препараты культур ЕзсПег 1 с П 1 а со 11, пропассированных предварительно 5-7 раз через полужидкий агар в пробирках Крейджи и выращенных на хоттингеровском агаре без добавления глицерина или глюкозы.712440 1Количество обладающих жгутиками клетокШтамм, вк общему числу клеток, просмотренныхР в препарате культуры эшерихий,.не пассированных предварительно,через полужидкий агар выращенные на среде без добавок культуры эшерихий, предварительно многократно пропассированных через полужидкий агарвыр ащен -выр ашенные на ные на(0,2) среде без до бавки 89,1 82,0 4309 28, 5 73, 5 4389 16, 0 69, 3 4392 11,0 81, 5 45,0 68,9 91,3 48,6 Среднее 18,5 74,76 87,46 54,23 Формула изобретения Результаты приведены в таблице, П р и м е р 2. Используют два штамма, пропасеированные предварительно через полужидкий агар в пробирках Крейджи, Один из них011:К 10:Н 10 - характеризуется отно- сительно хорошей флагеллированностью при выращивании на плотных средах, а другой - 0151;Н 10 - слабой, Оба штамма обладают жгутиковым антигеном Н 10, но с несколько различным парциальным составом, Адсорбции этими штаммами подвергают Н-сыворотку к штамму 3-236 обладающему также антигеном Н 10, но отличающимся по парциальному составу от Н-антигенов двух вышеуказанных штаммов. Такой подбор штаммов сделан с.целью сравнить уровень остающихся в сыворотке Н-агглютининов, которые не имеют сродства с Н-антигену адсор" бента и которые необходимо сохранить в сыворотке.Готовят 3 варианта плотной среды, приготовленной на основе перевара Хоттингера и содержащей 1,5 агарагара; первый с добавлением 2 предварительно обработанного автоклавированием глицерина, второй с добавлением 0,2 глюкозы и третий без добавок глицерина или глюкозы. Среды до 20 мл разливают в чашки Петри и после застывания засеивают сплошным газоном бактерий (на чашку по 0,25 мп бульйонной культуры, которую растирают по поверхности среды шпателем). После выращивания при Способ культивирования ЕвсЬег 1- сп 1 а со 11, содержащих Н-антиген,37 в течение 20 ч бактерии смываютизотоническим раствором хлористогонатрия и убивают добавлением 0,5формалина. Адсорбцию ведут традиционным способом, В каждом опытеобъем адсорбируемой сыворотки (предварительно разведенной 1:25 в случаях адсорбции культурами штамма0151:Н 10 и 1:20 в случае адсорбциикультурами штамма 011:К 10:Н 10) составляет 5 мл. Для адсорбции используют количества адсорбента, соответствующие урожаю бактерий с двух,трех, четырех и шести чашек при использовании штамма 0,151:Ч 10 и с одной, полутора, двух, двух с половиной,трех, четырех и пяти чашек при использовании штамма 011:К 10:Н 10. Добавление глицерина значительноснижает расход питательной среды для пригбтовления адсорбента в количестве, достаточном для адсорбции. Титры агглютининов, не имеющих сродства к Н-антигену штамма-адсорбента и сохраняющихся в адсорбированных сыворот, ках, не зависят от способа выращивания адсорбента. Введение глицерина в среды с различной питательной основой увеличи вает урожай бактерий и выход Н-антигена,Использование изобретения позволяет улучшить бактериологическуюдиагностику заболеваний, вызываемых З 5 эшерихиями. путем их выращив ания на пит ательной среде в присутствии стимулятора Флагеллированности, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения712440 Составитель Е.ДубовицкаяТехред О,Легеза Корректор М.Шароши Редактор 3 .Ходакова Заказ 10023/8 Тираж 552 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Х, Раушская наб., д. 4/5филиал ППП Патент, г, Ужгород, ул. Проектная, 4 содержащая Н-антиген в культуреЕзсйег 1 сй 1 а со 11, в качестве стимулятора флагеллированности используютглицерин в концентрации 1-5. Источники информации,принятые во внимание пои экспертизе 1. Авторское свидетельство СССР 9578339, кл. С 12 К 1/04, 1977.