Штамм н5вт-121

3ОП ИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯ Союз СоветсинкСоциалнстнческнкРеспублнн 1201628 К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(2,1) Приоритет Опубликовано 05,12,79, Бюллетень,% 45Дата опубликования описания 10, 12,79 до делам изобретений и открытийВсесоюзный научно-исследовательский институт микробиоюгическихсредств зашиты растений и бактериальных препаратов(54) ШТАММ БосЖоь Онгюреойэ чог. таИег 1 ае Н 5 ВТ - 121 Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии и может быть использовано для производства энтобактерина, применяемого для борьбы с насекомыми вредителями,Известно, что одним из средств для уничтожения насекомых- вредцтелей явля- ется бактериальный препарат энтобактерин, производство которого осуществляется при помощи штаммов ВасЦ,ц .т 0 СЬогпревюв чаг раИег 1 аеВ настоящее время используют дикие интропуктивные штаммы ВассРкв ЬШ 19 теЯМ 5 5-го серотипа, получаемые из погибших гусениц насекомых - вредителей15Однако штаммы, выделяемые непосредственно из природных источников, как правило находятся в фагпродуцирующем состоянии, не адаптировангя к регламентным жидким и твердым питательным средам, используемым в производстве, в связи с чем пе выдерживают больших объемов производственпьлх ферментеров и 2бракуются из за лизиса при первых кмиссионных проверках.Известен штамм, ВасЯць 1 Ьог 1 пг 1 епЬ 1 ь чаг. ГаИег 1 ае,69/6, выделенный в1969 г. Исаковой Н, П. из погибших гусеницбсцтыцой пчелиной огневки. о 19 73 г, этотштамм был несколько улучшен и переведен из фагпродуцирующего в латентноесостояние сотрудниками ВНИИбакпрепарат 2,В настоящее время этот штамм является единственным производственнымштаммом, на котором осуществляетсянаработка энтобактерина,Однако в последние 2 3 года штамм69/6 дает продукцию низкого качества,часто подвержен спонтанному лизису ив скором времени подлежит снятию спроизводства, так как в процессе лизиса продуцирует весьма агрессивный палочковидный фаг Г д. содноцепочечнойДНК.Целью изобретения является штаммЬас 1 Им 1 Ъог 1 пдепмь чаг раЫег 1 ае701628 15 ВТотвечающий всем требов. -ниям, предьявляемыла к производствен.ным щтаммям-аародуцентам энтобактерипа, т,е. в услоаааанх гпубинноа о а.ула,.таа:"вирования он не продуцаарует вааруааентааьайафаг и позволяет получать продукцию высокого качества,Подученный аатямм ЭсасаИ.аале Иаааа ап -даеааьаь ласаг, цсаЮе,г 1 сае Н 5 ВТимеет следующие морфодогическую и физио- аологическуаса характеристики,Морфологические признаки,Величина клеток в экспоненциальцойфазе развития на агаре типа СПЛ равна3,8 - 2,5 х 1,7 - 2,0 мк, Преоблада- аБюшая форма палочковиднаяНа жаадкихпитательных средах в условиях глубинногокультивирования клетки подвижные, встре.чаются в виде коротких и длинных цепей.Пери трихи грамположите льны, В период с та, 20ционарной фазы развития образуктт споры вегцачатной в 1,5 - 1,8 мк и округлые энтомоцидные кристаллы по Н-антигенуштамм Н 5 ВТотносится к 5-му серотаааау,О Физиологические признаки.Органическая среда дпя поддерживаю1шей седекции и размножения клоповыхпопупеций сухой питательный агар ти=па СПА, Колонии в В-.форме плоские30с неровными краями, Диаметр колонии5-ти суточной куц,турьа 0,4 - 0,6 с:Пигмент не образуетПитательный бульон. Всюду помутнег,ние значительное, осадок на 3 - 5 сутки-Молоко лакмусовое. К 2-1 ч пептони=зация и подшедачпвание, затем подкисление и редукция молока, Коагуляция ца3-4 сутки, переваривание сильцое, коягулированная сыворотка розовая,Картофель ломтиками, Культура сухаябело-кремовая.Агар с желатиной, Зона гидроацаза68 мм,4:Агар - казеин, Г 1 росветдение полное,Агар - крахмал, Зона гидропизя 2,53 мм.Дрожжеполисахаридная регламентнаяпитательная среда, используемая дляпроизводства энтомопатогенных бактери =альных препаратов, Интенсивный ростнаблюдается к 9 - 11 ч культивированияпри 28 - 30 ССпорообразование и вы=сыпание завершается к 36 ч роста. Титржизнеспособных спор в культуральнойжидкости к концу культивирования на обед-.ненной ДПС (2% БВК + 1 % мукаа)достигает 2,5 - 3,5 млрд/мд. 4Отношение к угдеводам.Усваивает без выделеааиа гязаа глюкозу, цеппобиозу, мальтозу, трегалозу, глицерин и оксадаты. Не усваивает манпозу,сахарозу, лактозу, ярабиааозу, иагупин,сорбит, дупьааит ацетат,Отношение к фагам. Собственные фагине продуцирует, Устойчив к фягам типаГ 2-2; рЗ - Ъ; Р а -1 Ъ, РО - 12Антагонизм проявляет к ЬОсаЫО 51 Ьа.аажфеааМ 5 1, 3, 4-серотипов.Для получения штамма Н 5 ВТ использовали приапаип рекомбинации генов,те перераспределение детермиаааант гепома клеток к ряду клеточных покоденийродительской популяции. В качестве фактора, индуцируюшего это перераспределение, использовали разацщу температурравную -10 и +90 С, В качестве исходной культуры, из которой был полученштамм Н 5 ВТ.21, служил штамм 4-госеротипа Н 4 ВТ, находящийся на храненииво ВНИИ-бакпрепарат, Штамм Н 5 ВТ 121 отличается от родителя принадлежностью ксеротипу и в связи с этим является продуцентом другого энтомопатогенного препарата. Кроме того, штамм Н 5 ВТ2 1в сравнении со штаммом-прототипом продуцирует на обедненной ДГ 1 С вдвое боль-ше спорокристадлического комплекса, чтопозволяет значительно слзить расходсырья на производство энтобактерина, ав св.азаа с этим и его себестоимость.1 Итамм Н 5 ВТявляется фагнепродупирующей культурой и превосходит штаммпрототип по своей вирулентности болеечем в пять раз. Форлаупа изобретения Штамм БОс 1 ИО 5 а.ааОаааадаеааэ 1 ч ласаа.ЯсаИ.еаасае Н 5 ВТиспользуемый для изготовления энтомопатогенного бактериального препарата энтобактерина, применяемого против насекомых-вредителей сельскохозяйственных культур и леса, хранится в коллекции ВНИИбакпрепарат,Морфологические признаки.Величина клеток и экспоненциальной фазе развития на обьачном агаре типа СПЛ равна 3,8 - 4,8 х 1, - 2 мк, Преобладающая форма палочковидная. Ня жидких питатедьных средах в условиях глубинного культивирования клетки подвижные, встречаются в виде коротких и длинных цепей, Перитрихи гралположительны. В период стаииоааарной фязьа701628 5 Составитель М, Шишкина Техред Э, Чужик Корректор В, Синицкая Редактор М, Вирко Заказ 7469/5 Тираж 755ЦНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская набд, 4/5 Подписное Филиал ППП "Патент", г, Ужгород, ул. Проектная, 4 развития образуют споры величиной в 1,5 - 1,8 мк и округлые эцтомоциДные кристаллы, По Н-антигену штамм Н 5 ВТ относится к 5-му серотипу, 5 а 5 б5 Физиологические признаки,Органическая среда для поддерживак- шей селекции и размножения клоновых популяций - сухой питательный агар типа СПА Колонии в К-форме, плоские с неровными краями, Диаметр колоний 5 ти суточной культуры 0,4 - 0,6 см, . Пигмент не образует. Питательный бульон, Всюду помутнение значительное, осадок на 3-5 сутки,Молоко лакмусовое. К 24 ч пептонизация и подшелачивание, затем подкисление и редукция молока, Коагуляция на 3-4 сутки, переваривание сильное, коагулированная сыворотке розовая.Картофель ломтиками, Культура сухая бело кремовая.25Агар с желатиной. Зона гидролиза 6-8 мм.Агар казеин, Просветление полное,Агар - крахмал, Зона гидролиза 2,5- 3 мм.зо Дрожжеполисахарцдцая рогла моцтцапитательная среда, используома ппяпроизводства энтомопатогеццьж банте 1 пальных препаратов. Интенсивный ростнаблюдается к 9 - 11 ч культивирования на обедненной ДПС (2 с;. БВК + 1 Хмуки) достигает 2,5 - 3,5 млрдмл,Отношение к углеводам, Усваиваетбез выделения газа глюкозу, целлобиозу,мальтозу, трегалозу, глицерин и оксалаты, Не усваивает маццозу, сахарозу,лактозу, арабинозу пнулип, сорбит, дульцит, ацетаты,Отношение к фагам, Собствепцые фаги не предуцирует.Устойчив к фагам типа Гс 1-"; Гд-.1;Б -Ъ; 1 о-хАнтагонизм проявляет к ВслсЮРоэ О 1 о.1 ййеоь 15 1,3 и 4 - серотш 1 св,Истопшки информации,принятые во внимаш 1 е прп экспортное11 еверда М Гуу Симонова Лф АеИспользование микроорганизмов в гппотноводстве дпя заппты растений, Л 1 Р 68,с, 123-126,2, Фрейман Б. Б. Результаты селекции производственных штаммов Вас. Оо -гор Ев МЭ ТрВНИ Ибакпрепарат,в, 2, 1973, с, 74-84, (прототип),