Способ получения антибиотического препарата для лечения и профилактики дифтерии

.ССР ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЪСТВУ Л. А. Зильбер и Л. М. Якобсон СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИБИОТИЧЕСКОГО ПРЕПАРАТА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ И ПРОФИЛАКТИКИ ДИФТЕРИИИ;1 ягсгея 0 2 И;йге";,1 Ч 4 И г аи Л," Игг/З 4754 г 5 Миииетеретч Зггрлвнхрдненпи О;СН Как известно, все попытки получения препаратов, подавляюрцих дифтерийные микробы в полости зева и носа, до сих пор не дали результатов.Согласно изобретению, предлагается препарат, обладающий эти. ми свойствами. Исходя из того, что красная кровь животных, болеюших дифтерией, не изменяется при этой инфекции, и полагая, что эта невосприимчивость обусловлена наличием в эритроцитах вешеств антибиотического типа, выделяемых из эритроцитов по методу Любо-Кониковой оыл получен препарат (на. званный Эритрин), бактерицидный в отношении дифтерийной палочки, а также стафилококков, стрептококков и др.Предлагаемый способ получения препарата заключается в следуюшем.Кровь быков, овец, свиней и других животных дефибринируют обычным способом, затем центрифугируют 20 - 30 мин., плазму декантируют, а эритроциты, оставшиеся в осадке, обрабатывают концентрированной соляной кислотой удсльныг 1 вес 1,19) из расчета 100 5 г,г кислоты на 1 л эритроцитов.КислОту ВлиВают Всю С 1)азм при непрерывном помешивании, чтобы не получилось вязкого коагулята. После обработки кислотой, эритроциты представляют собой кашице- образную массу темнокоричневого цвета.Массу эритроцитов, обработанную кислотой, ОстаВляют при комнатной температуре в течение суток, после чего ее фильтруют, заливают по весу 8-кратным количеством ацетона и энергичновстря. кивают.Экстракцию ацетоном производят в течение 18 час. при комнатной температуре.Ацетоновую вытяжку темнокоричневого цвета отфильтровывают через бумажный фильтр и полученный фильтрат упаривают в вакуум-установке до появления опалесценции.Сгугценный экстракт быстро вливают 2,5 - 3-кратный объем 5%-ного раствора хлористого натрия, что вызывает почти немедленное появ69008лсццс орцчнсво-черного осадка,иногда падающего ца Лцо крупць- З 11 ХГОПЪ 51 ЫИ.Солевой раствор, в котором илстОСЯжЛСНПС, ОТ(ТсИГсСТС 51 С 1 ТЕИ,Кяк правило, зя этОт срок В(рхня 51ЧсСТЬ Х(ИЛЕОСТИ УСПСВЯЕТ ПРОСВСТлиться и сс удаляют,декянтяццсй.Нижний слой жидкости цснтрифУГИР)ОТ, ОСЯДОК ПР 0.5 ЫВЯ 10 Т;ИСТИГГГЦРОВЯПЦОЦ, Во:Оц И СООЦРЯОТна б ц 1:Гх чс(овых стек.1 ях и.иЧя П Ес Х 1 1 ст) 11, ЕОТОр ЫС ПОГсця 10 Т Всушльный шеяф пя 6 - 18 часовпри 35 - 40. Предварительно подС 1 ПСННЫ 1 ОСЯЛ 01( ЦОМС 1 ЦЯ 10 Т ЗсТЕМцял фосфорнь.,1 янгцлрцдоь ца цеСЕОГ ЬЕО Лнсй ЛЛ 5 ОКОНЯТЕГЬНО 0просушивяния. 11 з о цОго литраэриТРОЦИТОВ ПРИ ООРс 100 ТЕС ПРСДЛЯГЯСмым сцособоъ пол) чают 1 О - .12 гактивного бяетс 1) ицидцого ирена р атя - эритриця.Прц хранении В эксикаторс прцтемпературе 16 - 18" препарат со-.храняет яктиВНОСГ; пс 00;сс 6 мес.П р С П я р я Т Г р ц:С П 5 К) Т д Г 51 Т С р япиц и пРО(1)РЕсктиР ГГ(РтсРии В ВиЛЕ 0 2)5,(-РЬГХ рс 1 СТВОроВПрс парят растворим в волноцсреде при рН 7,6 - 7,8, а таекс вэтиловом спи р Г(Стандартный раствор препарата,идущий 5 с 5 пр актичсс ких целей,ряствос 3,8 "с,имонноКсС(ОГО НЯТРИЯ, П)С,всРИТСЛЬНО ЛОВСЛСШОМ О КИПСПИ 5.0,25 г сухого препарата рястВОр 5 ют и и кцп 5 чсции В 100 г3,8" -ного раствора лцмоццо-кислоо натрия.Кипячение В тсчсчше 2 - 3 миц.значител.Но повыпаст растворимос;ть препарата.После охлакдсция раствор фильтруют через ватный фильтр.510 но та кжс растворить препарат в 0,25"-цом растворе соды, атакже в фосфатных буферных ра створах с рН 7,6 - 7,8,Растворы препарата в лимоннокислом натрис сохраняют активность 7 дней, в фосфатцом буфере - 2 - 3 лня, в 0,25% соды 1 - 2дня, в спирте 2 - 3 дня.Для испытания бактериостатического действия предлагаемого препарата его растворяот в 3,8 лиЪ 10 ННО.ЕИС(1010 НсТ И 5 ЦЗ РЯССТЯ содержания 2,5 лг препарата в 1 Ояг раствора лимонно-еисгого натрия 0,25" .Ный раствор).Затем в отдельные пробирки с О лл расплявчснного агара цри 45 - 50 вносят по 0,1 л.г илц 0,2 ял РЯГ)ВОРЯ ПРСПЯРс 1 Тс Ц РЯЗ,цвс 10 Тс сц.п Е с 1.Лгяровыс пластинки зяссваот сплошнымазоцом Лифтсрийцой псе О 1.(и ц сСрсз 16 - 18 ч сс. рОстс 1 Отссч яот рсзу,птять, Полное ОтС ТСТ В И С Р ОСТ Я ЦГ 1 И 3 Я гСТ Н с 1 51 ( Г 0 ЗЯЛ( Ж К Я СВИ,СС 1 ЪСТВ УЮТ 0 Оа КТЕ- риостатичсских свойствах прспяряТя. КОНТрогСМ СЛуКИТ ПОСЕВ ТСсХ Кс ;цкробОВ ца сЗГс С ПодгСШ(НПЫ- мц е ц му ),2 л,г 3,8 раствора ли.,10 ццо еис,.ОГО цс 1 трц 51 ця 10,1.г яя- Я.,.1 с 151 ИСНЬТЯ 1.1 ИЯ бак СР И ЦИДН 010 леГстВР 51 препарата 0,2 .г 0,20"-но. го раствора прспарята разводят в 2 м,г бугп ОИЯ и;сла 10 т р 5 д 110 сге. довятсльпых двухкрятных разведений тсК, ЧТООЫ В ПЕВО ПРООИРКЕ Оь,1 Г) рязВслспис Основного 1)ястВО- ря 1:10, во второй 1:20, в третьей 1:40 и т. л., до разведения 1:320 в 6.й пробирке.Во Все пробирки вносят по 0,1 л,г суточной бульонной культуры днфтерийноц палочки, что равняется 600 в 8 млн. клеток на 1 лл. 1 ля контроля 1 л,г бульона без препарата засевают тем жс ко,1 ичеством Лифтсрийной палочки.с 1 ерез 5 час. из каждой пробирки после встряхивания высевают по 0,1 лг на отдельную чашку с яга. ром; па следующий день и затем через 48 час. определяют результаты. Г 1 осцое отсутствие роста в посеве из цяивСшего разведения пре. царата считается его титром.Например, посев из 5-ой пробирки нс дал роста: в 5-ой пробирке разведение основного раствора препарата 1:160, учитывая, что основной растгор препарата разведен в 400 раз, определяют титр эритрина 1:64000 или концентрацию препарата в 1 л,г, равную 15, 8Зя условную единицу активности принимают наименьшую концентрацию препарата, проявившую бактерицидность в вышсописанньхсг П 1 д 1 )и ь к ус,1 О В и я к, т. с. О я кт срицидное действие препарата в отношении 600 млц. клеток дифтерийной палочки в 1 1,11,что соответствует концентрации препарата 81,75; в 1 1,1 или 82 единицы ня 1 лг сукого веса.В суком вндс эритрин сокрзняст. ся в экснкзторс няд пятифосфорцым ангидридом или над клористым кальцием при комнатной тем. ператур 1 не более 6 мсс.После 6 мсс. необкодимо вновь пров рит его активность.Растворы эритрина в 3,8) лимонно-кислого натрия сохраняют в прокл )дц)м мсте; нк 1 одцость - 7 дней.В зависимости от 01 ялпззцин процесса применение эритрина осу- Н 1 ССТВЛ 5110 Т СМЯЗЫВЗНИСМ, КЯПЯНИСМ, пульвсрцзациен или полосканием.Зритрин применяют в теплом сост 051 ции, дл 51 1 СГО прооирк" с препаратом перед употреблением по. хСН 1 ЗОт в стакан с горячей водой.При дифтерии зева применяют пулВ 1)цзацию и смазывание, Полость ртя и зева пульверизируют теплым раствором в течение 10 - 15 сск., после чего зев смазывают рыхлым, пушистым, ватным тампоном. Тампон надо обильно смачивать препаратом.При дифтерии носа препарат набирают в пипетку и вводят в нос больцого, лежа)цего на спине с запрокинутой головой. 1,ля предупреждения образования корочек, на ночь вводят в нос вазелиновое масло. При пора)кении носоглотки вводят препара в большпк количсствак - примерно от 0.5 - 1,0 ся в каждую ноздрю, чтобы обеспечить достаточное емячивание больной полости эритрином.При дифтерии глаза в глазную щель вводят несколько капель теплого раствора эритрина, после чего накладывают на глаз на 10 мин. ватный шарик, обильно смоченный препаратом,При дифтерии гениталий у девочек, обильно смоченную эритрицом полоску ваты вкладь)вают между по,ОВыъи гмбзмн, 11 ПОВ)к Гипс)с мировяцнык отечнык половык гуо накладывают сочно пропитанный ватный тампон.При дифтерии кожи такпс же тампоны накладывают ця 10 мин. ня пораженный участок.В остром периоде болезни все указанные манипуляции повторяют ежечасно В течение дця. После Откождеция 1)ленок можно удлиццть промежутки мс)кду введениями препарата. Лечение прекращают после исчезновения клиничсскик признаков болезни и лечение 1)ольной полости считают законченной после двухкратного отрицательного посеВз нз Ояциллы Лефлеря..сиенце эрнтрнцом,11 Ч)тс 1)иНь к оап 1 ллоноситслсй производят не менее чстырск ряз в день, до ис ЗНОВСНИЯ ДИфТСРИП 11 Ь 1 Х ОЯЦП,Л ИЗ полости зева и носа.Сцячзля Вводят эрнтрин пипеткой в нос по 10 - 15 капель В каждуо ноздрю, зятем обильно орошают эрцтрином зев ц миндалины прн помо)ци пульверизатора илп пышным тампоном, корошо смоченным эритрином, или треккратным полосканием.Лечение контролируют бактсрно. логическим исследованием.Двуккратныш отрипатсльньш результат с промежутком в 4 дня свидетельствует об излечении.Предмет изобретенияСпособ получения антибпотического препарата для лечсш 1 я и про. филактики дифтерии, о т л и ч а ющи йся тем, что эритроциты, выделенные обычным путем из дефибринированной крови быков, свиней, овец и др. животцык, обрабатывают концентрировачной соляной кислотой и затем экстрагируют ацетоном, полученнь)й экстракт сгущают и вводят в раствор клористого натра, после чего цз нижнего слоя отстоявшейся жидкости выделяют известным образом, например центрифугированием, осадок, который высушивают.