Среда для разбавления спермы

Союз Советских Социалистических Республик(45) Дата опубликования оп дарственныи комитет юллетень24сания 30.06,79 УДК 591.463,1:.5 (088.8) ло делам изобретен н открытий(72) Авторы изобретения М, Столбов и В. И. Ершово-исследовательскийсельскохозяйственн 71) Заявител Всесоюзн институт разведеых животных нау нети 54) СРЕДА АЗБАВЛЕНИЯ СПЕРМ Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к искусственному осеменению сельскохозяйственных животных.Защитные среды или разбавители, применяемые в искусственном осеменении животных, используются как для увеличения обьема полученной спермы, так и для поддсржания многих ее биологических свойств, в том числе удлинения срока жизни сперматозоидов, повышения их активности, поддержания процессов гликолиза и дыхания, повышения оплодотворяющей способности и т. д, 11. С этой целью в разбавители вводится ряд веществ органического и неорганического происхождения, должных обеспечивать оптимальные условия для жизнедеятельности сперматозоидов,В настоящее время создано значительное количество защитных сред для разбавления и замораживания спермы, в том числе и среды для оттаивания и дополнительного разбавления спермы, замороженной в гранулах обьемом 0,1 - 0,2 мл. На станциях искусственного осеменения для оттаивания и дополнительного разбавления спермы, замороженной в виде гранул объемом 0,1 - 0,2 мл, используются среды, состоящие из лимоннокислого натрия и глюкозы, растворенных в дистиллированной воде 2. Эти среды обеспечивают в основном хорошее качество спермы после ее оттаивания, однако не являются биологически оптимальными для сперматозоидов и требуют совершенствования.Учитывая исключительную важность набора компонентов, входящих в состав разбавителя, и их влияние на качество спермы после оттаивания, за основу была взята среда, рекомендуемая инструкцией по искусственному осеменению для оттаивания гранул объемом 0,1 - 0,2 мл 13. Среда имеет следующий состав компонентов; на 100 мл дистиллированной воды 3,1 г натрий лимоннокислый, 1 г глюкоза медицинская. Эта среда обеспечивает активность спермы быков после оттаивания 4 - 5 баллов и живучесть при 37 С в течение 4 - бч,Недостатком указанной среды для разбавления семени является ее отрицательное влияние на биологическую активность спермиев.С целью увеличения живучести сперматозоидов и их оплодотворяющей способности, а также активности в состав среды для оттаивания и разбавления гранул спермы объемом 0,1 - 0,2 мл введен экстракт ткани, содержащей большое количество гиалуроновой кислоты и пировиноградно670301 кислый натрий (ТУ 6-09-483 - 70), отвечающий формуле СзНзОзИа при следующем соотношении компонентов, вес, %:Лимоннокислый натрий 2,78 - 3,07 Глюкоза 0,42 - 1,15 5 Пировинограднокислыйнатрий 0,09 - 0,24Экстракт животной ткани 5,75 - 12,46 Вода Остальное При добавлении гиалуроновой кислоты к 10 сперме происходит связывание воды, в результате чего увеличивается концентрация осмотически активных веществ - сахаров, солей, увеличивается вязкость жидкостей. Это способствует повышению устойчивости сперматозоидов к колебаниям температуры, большей их сохранности и живучести после оттаивания и препятствует быстрому вытеканию разбавленной спермы из шейки матки при осеменении коров, что ведет к повышению оплодотворяемости яйце- клеток.По данным 11 введение в разбавитель экстракта животной ткани, являющегося биостимулятором, способствует увеличению 25 сроков переживаемости сперматозоидов и повышению оплодотворяющей способности спермы, Предполагается, что при добавлении биостимулятора вносятся коферменты, которые будучи неспецифичными могут вос станавливать в сперматозоидах необходимый уровень течения реакций, в основном реакции гликолиза.В качестве источника животной ткани в предлагаемой среде для получения экст ракта взята водянистая влага глаза вместе со стекловидным телом. Экстракт готовят из свежей ткани.Добавление в разбавитель пировинограднокислого натрия удлиняет исходный уро Таблица 1 Персжнваемость замороженной оттаяннойспермы прн 37 С, ч Активностьспермы послеоттаивания Количество определений20 7,96 3 ч 53 мин - бч 22 мин Прототип 20 4,46 Использование предлагаемой среды позволит повысить оплодотворяемость скота 45 и получить от 1000 коров дополнительно 60телят в год. Кроме того, за счет сокращения сервис-периода на 20 - 30 дней будет получено дополнительное количество молока от новотельных коров. Общая экономи ческая эффективность в расчете на 1000коров составит сумму 20 - 25 тыс, руб. Оплодотворяемость коров по первому осеменению составила 69,3%, что на 15,9% выше, чем при использовании среды прототипа, В табл. 2 приведены результаты осеменения скота с предлагаемой средой и средой - прототипом (контроль).Предлагаемая среда превосходит среду прототипа по активности сперматозоидов после оттаивания на 0,5 балла, по переживаемости на 3 - 4 ч и по оплодотворяющей способности на 10,5 - 31,6%. вень дыхания сперматозоидов и способствует более длительной их переживаемости.П р и м е р. Сперму животных (быка) разбавляли лактозо-желточным разбавителем (11,5 г лактозы растворяется в 100 мл дистиллированной воды и добавляется 20 мл яичного желтка и 5 мл глицерина или берется 63 мл 11%-ного раствора лактозы, добавляется 30 мл желтка и 7 мл глицерина) и замораживали в форме гранул, объемом 0,1 - 0,2 мл на фторопластовой пластине. После этого замороженную сперму размораживали путем разбавления в предлагаемой среде следующего состава, вес. %:Лимоннокислый натрий 2,97 Глюкоза 0,96 Пируват натрия 0,19 Экстракт животной ткани 11,02,: Вода до 100Для размораживания одной гранулы брали 0,9 - 1 мл предлагаемой среды и определяли активность и выживаемость спермы и производили осеменение коров. Телята, полученные от коров, осемененных спермой с предлагаемой средой, рождались нормальными, никаких отклонений в состоянии половых органов или заболеваний у коров не наблюдалось,Использование предлагаемой среды, включающей экстракт животной ткани с большим количеством гиалуроновой кислоты и пировинограднокислый натрий, обеспечивает активность спермы после оттаивания 4 - 5,5 баллов, переживаемость при 37 С - 9 - 10 ч, тогда как при использовании среды прототипа была активность 4 - 5 балла, переживаемость при 37 С 4 - 6 ч, В табл, 1 представлена биологическая полноценность испытуемых сред.670301 Таблнца 2 Среда - прототип Предлагаемая среда вй 1 щ Р о жО Э 1 ф ьО щ о о и О Оо Ф о л Ож .а О ой Е у я а- - о оооо В о 3о ж дом лжи+12,5 +15,9 88,7 71 80 57,4 - 89,6 1252 53,4 671 44,4 - 58 69,3 864 1245 По всем хозяйст- вам Формула изобретения 15 Составитель А. Макаров Техред Н. Строганова Редактор Н. Суханова Корректор Л. Орлова Заказ 1302/3 Изд.397 Тираж 680 ПодписноеНПО Поиск Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб д. 4/5 Типография, пр. Сапунова, 2 Среда для разбавления спермы преимущественно быков, состоящая из лимонно- кислого натрия, глюкозы и воды, о тл и ч аю щ а я с я тем, что, с целью повышения биологической активности спермиев, она дополнительно содержит пировинограднокислый натрий и экстракт животной ткани при следующем соотношении ингредиентов, вес. %:Лимоннокислый натрий 2,78 - 3,07 Глюкоза 0,42 - 1,15 Пир овинограднокислыйнатрий 0,09 - 0,24 Экстракт животной ткани 5,75 - 12,46Вода ОстальноеИсточники информации,принятые во внимание при экспертизе5 1, Увеличение сроков хранения спермы иповышение оплодотворяемости животныхпутем применения биостимуляторов, Харьков, Прапор, 1965.2. Семаков В. Г. Совершенствование ме 10 тодов замораживания спермы быков. М.,ВНИИТЭИСХ, 1977.3. Инструкция по искусственному осеменению коров и телок. М., Колос, 1969.