Способ выделения одноклеточных микроорганизмов

Союз Советски Социалистических Республик(32) 19.03.7 (83) Велико те Гасударственный камитеСаватв Министрав СССРпа делам иэааретенийи открытий 1) 1210 таниранцыГрант, Питеркобритания),элла и Ален Г 2) Авторы изобретения Шефер д Жан анак ая фирмалеум Компанико британия)) Заявитель Дзе тед 54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ОДНОКЛЕТОЧНЫХ МИКРООРГАНИЗМОВле точныхжидкости, наприродах - легвием сгущенной змы 11. 10 по весу.ПримеЬса СВЯ йо 633щивают в бульо апйда 1 ро водород,выр еремешиващем рабочий р. Штамм дрожжеи 1 использующии угл не при непрерывном м ферментере, имею нии в аэрируемобъем 200 мОсновойсреда следующ питательная на является води состава, г Изобретение относится к микробиологическонпромышленности и касается процессов извлеченияодноклеточных микроорганизмов из содержащегоих ферментативного бульона.Известен способ выделения однокмикроорганизмов иэ культуральноймер дрожжей, выращенных на углеводокие фракции газойль, путем центрифутированиякультуральной жидкости с получефракции, содержащей микрооргани Недоствтком способа является то, что получаемая биомасса содержит значительное количество влаги, которую необходимо удалить высушиванием и она не обладает наибольшим по возможности, со держанием твердых веществ.Цель изобретения - повышение содержания микроорганизмов в целевом продукте.Поставленная цель достигается тем, что полученную после сгущения фракцию нагревают, а затем вновь подвергают центрифугированию, при этомо температуру нагревания повышают на 5 - 70 С, на. грев осуществляют пропусканием пара, а рН нагретой сгущенной фракция поддерживают в пределах от 3,0 до 8,0,Сущность способа заключается в том, что вы деление одноклеточных культур из культуральной жидкости, например, дрожжей семейства Сгуртоооссасеас и в особенности подсемейства Яасспаготпусе.1 одеа или Сгуртососсодеа, выращенных на утлеводородах - метане иля метаноле, или нефтяной фракции, содержащей твердые вещества по весу (сухой вес), подвергают центрифугированию на центрифуге насадочного типа со скоростью 20 м/ч. Полученную фракцию с содержанием 15% твердых веществ по весу нагревают путем пропускаяия пара до повышения температуры фракции от 5 до 70 С и нагретую твердую фракцию - "крем" пропускают через вторую центрифугу, например Вестфалия ЯСОУ 205 со скоростью 9200 об/мин, скорость пропускания 100 л/ч. Полученная сгущенная фракция - "крем" содержит 22 - 24% твердых веществ(он 4) 2 НР 4КС 1М 9804 7 Н Огп 8 О,Мп 80 4 НрОЕе 804 7 НОДрожжей экстрактВодопроводная вода 21,150,650,170,0450,0680,251 л. Вес оставшейсяводы, отнесеннойна единицу весасухого вещества,кг Содержание твердых веществ, после 2-ой стадии центрифугирования (% по весу сухого веса) Температура сгущенной фракции, подвергаемой центрифугированию,С 4,55 18,0г 32 3,54 22,0 3,15 24,1 70 2,85 26,0 80 Источником углерода служит нефтяная фракция, содержащая смесь Н-парафинов, имеющих 11 - 24 углеродных атомов в молекуле. Температура культивационного бульона 30 С, Величина рН 5,5 поддерживается добавлением аммиака, служащим также и источником азота,Скорость подачи питательных веществ в бульон регулируют таким образом, чтобы сохранить скорость разведения 0,1 ч. Бульон энергично перемешивают. Скорость аэрации 0,5 об/мин. П р и м е р 2. Штамм дрожжей Сапсйба тгорса/а использующий углеводород, выращнва. ют в бульоне при непрерывном режиме работы с перемешиванием струей воздуха в ферментере, имеющем рабочий объем 12 м.Основу бульона составляет водная среда, со. держащая следующие компоненты:Фосфор 0,23Калий 0,30Марганец 0,003Железо 0,01Магний 0,02Цинк 0,018Водопроводная вода 1 л.Источником углерода служит нефтяная фракция, состоящая из смеси углеводородов газойля с содержанием нормальных парафинов 11 - 18%. Н-парафины имеют 14 - 28 атомов углерода в молекуле.Температуру бульона поддерживают 30 С и рН 4,0 - 4,2, путем добавления аммиака, который служит и источником азота.Скорость подачи водной питательной среды и газойля в бульоне регулируют так, чтобы сохранить скорость разведения 0,25 ч. Бульон энергичБульон, с содержанием твердых веществ 1,5% по Ьесу пропускают через центрифугу насадочного типа со скоростью 20 м/ч при 5500 об/мии. рН бульона в центрифуге равна 5,5/температура 30 С"Крем", содержащий 15% твердых веществ// отбирают из центрифуги со скоростью 2,0 м /ч, Затем температуру увеличивают до 65 С путем пропускания пара, рН повышается до 6,5. Подогретую сгущенную фракцию - "крем" пропускают через вторую центрифугу насадочного типа Вестфалия 8 СОУ 205 со скоростью 9200 об/мин, скорость пропускания 100 л/ч. Время пребывания по. догретого "крема" 2 мин.Полученная сгущенная фракция содержит 22% твердых веществ по весу.В таблице показано влияние температуры на содержание твердых веществ в целевом продух. те. Бульон, содержащий 0,5 - 1% по весу твер-.дых веществ, пропускают через декантатор, гдепод действием силы тяжести происходит разделе.ние фаз наверхнюю насыщенную воздухом, состоящую из эмульсии углеводорода дрожжей и некоторого количества водной питательной среды и нижнюю фазу, состоящую из воды, которую затем удаляют.К эмульсии добавляют поверхностно-активноевещество эмилии в количестве 0,05% по отноше- .45нию к эмульсии.Эмульсию пропускают через дегазационныйнасос и затем через центрифугу Альфа ЛавальН Ч АХ насадочного типа, где происходит раэделение на сгущенную фракцию - "крем" с содержани.ем твердых веществ 2,5% по весу и температурой32 С и жидкую фракцию. Скорость работы центрифуги 6000 об/мин,рН эмульсии 5,6 - 5,8. После этого "крем" пропускают без нагревания через центрифугу Альфа Лаваль НИАХ. Получают сгущенную фракцию с содержанием 15% су. хих веществ. Температура "крема", выходящеготълй зон/./вийи.и 35 С. оН 6.0.611594 Затем "крем" пропускают через пластинчатый теплообмеиник для нагревания его до 80 С, т,е. температуру увеличивают на 45 С.Нагретую сгущенную фракцию вновь подвергают центрифутированию и получают сгущенную фракцию с содержанием твердых веществ до 24% по весу.Для сравнения вышеуказанную процедуру повто. ряют за исключением того, что сгущенную фракцию не нагревают перед пропусканием через третью центрифугу. "Крем" иэ третьей центрифуги содер. жит 15% твердых веществ по весу. В третьей центрифуге не наблюдают увеличения содержания твердых веществ в креме. 1, Способ выделения одноклеточных микро.организмов из культуральнои жидкости, преимуСоставитель И. Привалова Техред Э, Чужик Корректор С. Шекмар Редактор И. Потапова Тираж 568 Подписное БНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж - 35, Раушская наб., д. 4/5Заказ 2943/49 лъэжтелп ппп и 3 гаилг т ччгтлтълп ып ПзъгъРтфтняя. 4 Формула изобретения щественно дрожжей, выращенных на углеводоро. дах путем центрифутирования культуральной жщ кости с получением сгущенной фракции, содержащей микроорганизмы, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения содержания микроор. ганизмов в целевом продукте, сгущенную фракцию нагревают, а затем вновь подвергают центрифугированию.2, Способ по п,1, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что температуру при нагревании повышают на 5-70 С.3. Способ по п.1, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что сгущенную фракцию нагревают пропусканием пара.4. Способ по п,1, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что рН нагретой сгущенной фракции поддерживают в пределах от 3,0 до 8,0.Источники информации, принятые во внимание при экспертизе.1, Патент Англии Ко 1062005, кл. С 6 Е, 1967