Способ получения полисахарида

-(т 1545266 Сооз Советских Социалистических Республик(31) %Р С 12 д/160809 (ЗЗ) ГДР 2 Р 13/О М. Государственный комитет Совета Министров СССР(53 663 551(088 8 77, Бюллетень4 публиковано по делам изобретении и открытий(72) Авторы изобретеш Иностранцы х Беренс, Бруно Хейне, Райнер Хоп, Вилли айзер, Ханс - Йоахим Мюллер, Вольфган и Манфред Вагнер(71) Заявптел СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИСАХАРИД Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к полученшо полисахарида методом микробной ферментации.Известен способ получения полисахарида 5 путем выращивания бактерий Хапйогпопаз сатпрез 1 пз в условиях аэрации в среде, содержашей в качестве источника углерода углеводы или продукты, содержащие углеводы и другие необходимые питательные вещества, 10 с последующим выделеццем полпсахарида известным способом.В известном способе необходимые ростовые вещества добавляют в фермецтаццонную среду до начала выращивания бактерий, прп 15 этом, стараясь избежать опасности недостатка ростовых веществ, их добавляют больше, чем было бы необходимо, а это приводит к повышенным расходам и наличию примесей в конечном продукте, 20С целью более эффективного использования необходимых для роста бактерий веществ и регулирования их добавления в питательную среду по предлагаемому способу в среде поддеркиваот содержание углеводов равным 25 0,02 - 6,00%, преимущественно 0,5 - 2,0%, в качестве ростовых веществ испол.зуют дрожжевой автолизат в оптимальной для роста и образования полпсахарцда концентраццц, преимущественно 0,3% (по сухому весу), количество аэрцрующего воздуха устанавливают, преимущественно, равным 1 л на 1 л среды в минуту, при этом в процессе выращивания строят кривую роста и при помощи этой кривой определяют полученные нормы прироста и количества бактерий (цли связанные с ними факторы, как, например, образование СО,) в основной культуре в промежутках времени, например, через 3 час, ц в случае пониженных по сравнению со стандартом значений основной культуры дополнительно вводят раствор ростовых веществ с таким расчетом, чтобы его концентрация в основной культуре составляла менее 1%, преимущественно менее 0,25%.Процесс образования полцсахарцда зависит от вида кривой роста и от количества активных бактерий. Поэтому определив вид кривой роста и количества бактерии в условиях, прп которых синтез полисахарнда оптимален, можно использовать полученную кривую роста как ста нда рт.В ходе технического синтеза полцсахарцда через небольшие промежутки времени отбирают пробы и определяют количество бактерий. В случае пониженных по сравнению со стандартом значений добавляют раствор ростовых10 15 20 25 30 веществ на основании полученных опытных данных,П р и м е р 1. 3000 л раствора мелассы, разбавленного водой (содержание редуцирующих веществ после гидролиза 5 а/а), вносят в ферментер с мешалкой объемом 5000 л. Ферментер стерплизуют обычным способом. Затем в него добавляют 300 л посевной культуры после 18-часового выращивания.Посевная культура состоит из раствора минеральных солей (рН 7 - 8) и содержит 1 а/а крахмала и 0,5 а/в дрожжевого автолизата. После 18-часового выращивания число бактерий в посевной культуре составляет 3,6 К К 10 щ клеток/мл.После 10-часового выращивания основной культуры при интенсивной аэрации отбирают первую пробу, определяют количество бактерий и сравнивают его с количеством, указанным на стандартной кривой (см. чертеж). Отбор проб повторяют через каждые 3 час.11 осле 25-часового культивирования количество бактерий в основной культуре понижается по сравнению с количеством, указанным на стандартной кривой. В стерильных условиях добавляют 10 л 15/а-ного раствора дрожжевого автолизата.Результаты опыта изображены графически на чертеже, где А - стандартная кривая роста, Б - кривая роста основной культуры,П р им ер 2. Построение стандартной кривой.Состав оптимального питательного раствора (г);Сахароза 30,00 Дрожжевой автолизат 2,00 ХаКОз 2,00 КН 2 Р 04 1,00 Ге 304 0,01 Водопроводная вода 1,00 (л) В 50 мл стерильной питательной среды (рН 7,5) добавляют 1 л посевной культуры, которая содержит около 2 р,10 щ бактерий/мл. Выращивают в колбе на 200 мл на качалке. Через 4 час после засева и далее каждые 2 час отбирают пробы по 0,5 мл и под микроскопом определяют количество бактерий. После достижения максимального количества бактерий ферментацию прекращают. По полученным данным строят кривую роста А, служащую стандартом.Для синтеза используют посевную культуру, содержащую 2,00 мелассы и 0,15/а дрожжевого экстракта, и основную культуру - 6,5 а/в мелассы.В стерильный питательный раствор (рН 7,5-+0,5) добавляют посевную культуру после 24-часового выращивания и выращивают при перемешивании и пропускании воздуха в количестве 1 л на 1 литр раствора в 1 мин.После 8-часового выращивания отбирают первую пробу и определяют количество бактерий. Время отбора последующих проб и полученные результаты даны в таблице 35 40 45 50 55 60 65 По сравнению со стандартом количество бактерий и норма прироста понижаются. Дооавляют стерильный водный раствор дрожжевого экстракта с таким расчетом, чтобы содержание экстракта в главном ферментере составляло 0,05(по сухому весу). Сразу после этого начинается повышенный рост бактерий.Стандартной величины достигают через 8 час. После 38-часовой ферментации основной культуры пробы больше не отбирают.После 68-часовой ферментации основной культуры синтез полисахарида окончен. Синтезировано 2,5 а/в полисахарида, выход неуправляемой ферментации - 1,75/полисахарида.Вместо определения числа бактерий можно определять другие факторы, связанные и не связанные непосредственно с числом бактерий, такие как, например, субстрат, образующийся СО, потребленный кислород, повышение вязкости и др. Формула изобретенияСпособ получения полисахарида путем выращивания бактерий Хапйоптопаз сагпрез 1 г 1 з в условиях аэрации в среде, содержащей в качестве источника углерода углеводы или продукты, содержащие углеводы и другие необходимые питательные вещества, с последующим выделением пол и сахар ида известным способом, отличающийся тем, что, с целью более эффективного использования необходимых для роста бактерий веществ и регулирования их добавления в питательную среду, содержание углеводов в среде поддерживают равным 0,02 - 6,00/о, преимущественно 0,5 - 2,0/о, в качестве ростовых веществ используют дрожжевой автолпзат в оптимальной для роста и образования полисахарида концентрации, преимущественно 0,3/а (по сухому весу), количество аэрирующего воздуха устанавливают, преимущественно, равным 1 л на 1 л среды в минуту, при этом в процессе выращивания строят кривую роста и при помощи этой кривой определяют полученные нормы прироста и количества бактерий (пли связанные с ними факторы, как, например, образование СО) в основной культуре в промежутках времени, например, через 3 час, и в случае пониженных по сравненшо со стандартом значений основной кульгуры дополнительно вводят раствор ростовых веществ с таким расчетом, чтобы его концентрация в основной культуре составляла менее 1 /а, преимущественно менее 0,25/в,Заказ 246/1ЦНИИ пографпя, пр. Сапунова, 2 Изд. М 190 И Государственн по делам из 13035, Москва, ЖТир го комитета Со бретений и откр