Способ количественного определения индивидуальных классов липидов

О П И С А Н И Е(и)47534 Союз Советских Социалистических Республик(22) Заявлен м заявки чав с присоедин Гасударственный комитет Совета Министров СССР(5 25.05,75, Бюллете ОпубликованоДата опублик лам изобретен открыт ания описания 02,02. 2) Авторы изсбретени И, Кузне(71) Заявител ститут питания АМН СССР 54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИ ИНДИВИДУАЛЬНЫХ КЛАССОВ ЛИПИДОВКоличество индив. пидов можно определя ния приведенных объе При использовании и оксазиновых красите рашивания определяе,альных липидов завис чества и не зависит о ности.дуальных клть по методу оов их пятен.жирораствортлей иитенсивмого классаит только отт степени не ссов ли- пределемых азоность ок- ндивидуих коли- насыщенИзобретение относится к аналитическойхимии,Известен способ количественного определения индивидуальных классов липидов вбиоматериалах, содержащих их, например,в пищевых продуктах, предусматривающийприготовление липидного экстракта из биоматериала, нанесение его на силикагель с последующим хроматографированием и определением количества индивидуальных классовлипидов.После хроматографирования пластину ссиликагелем обрабатывают или парами иодас последующим элюированием, упариваниеми взвешиванием липидов, или раствором би 5хромата калия в серной кислоте с цельюобугливания липидов и последующего ихопределения визуальным или денситометрическим способом, Однако этот способ даетбольшие несистематические ошибки при определении.С целью ускорения и повышения точностиопределения, предложено перед нанесениемлипидиого экстракта в силикагель вводитьжирорастворимый азо- или оксазиновый краситель,Из жирорастворимых азокрасителей рекомендовано использовать метиловый красный,из оксазиновых красителей - сульфат нильского голубого. ЗО П р и м е р. Для приготовления пластины(1 ЗХ 18 см) для анализа состава липидов к1,8 г суспендированного в спирте снликагеляприбавляют в виде спиртового раствора 1,5 мгкислотного азокрасителя - метилового красного (1,5 мл) или 3 мг сульфата нильскогоголубого (3 мл),Полученную суспензию перемешивают намагнитной мешалке в течение 3 лшн до получения однородной массы, которую быстронаносят на стеклянную пластину. После высыхания сорбента на воздухе пластины активируют в сушильном шкафу при 10 С в течение 30 мин.Экстракт липидов в хлороформе или другом подходящем растворителе наносят иаприготовленную вышеуказанным способомпластину и проводят хроматографирование вподходящей системе растворителей, напримергексан - эфир (О: 30),Пятна индивидуальных липидов проявляТаблица 1 Количество вещества в пробе, мкг Относительная ошибка в опыте, %Номер опыта Исследуемое веществонай- дено най- дено най- дено взято взято взято 38 20 Эруковая кислота Изолпнолевая кислота Тримаргарпн 34,7+3,6 11 конуса - 1 2 т ются введенным в силикагель красителем через 2 - 3 мик после развития хроматограммы,При введении в силикагель метилового красного наблюдают фиолетовые пятна липидов на малиновом поле пластины.Для ослабления окраски поля пластину помещают на 30 сек в камеру, насыщенную парами аммиака (интервал рН изменения окраски этого красителя из красной в желтую составляет 4,2 - 6,2).При введении в силикагель сульфата нильского голубого проявляются светло-голубые пятна липидов на темно-синем поле пластины.Количественное содержание индивидуальных классов липидов определяют по калибровочной кривой зависимости приведенной площади пятна от логарифма количества (мкг) вещества определенного класса липидов в этом пятне (см. табл. 1).Прямолинейная зависимость на графике Другим способом количество индивидуальных классов липидов определяют по способу определения приведенных объемов их пятен, который заключается в следующем: количественное содержание индивидуальных классов липидов находят фотоденситометрическим путем (см. табл. 2). Для этого с хроматографической пластины получают фотокопию контактным способом на штриховую пленку (фототехническая, ФТ), которую затем денситометрируют на приборе (например, МФ).На основании полученных фотоденситограмм строят калибровочную кривую в координатах: приведенный объем пятна (Р, =х) - логарифм количества веществак воопределяемого класса липидов (в мкг).Объем пятна определяют по уравнению конуса с эллипсом в основании: для логарифма количества вещества сохраняется в интервале 0,6 - 2,0. Приведенная площадь пятна (Яотн, ) является отношением площади пятна от искомого количества определяемого липида (Я,.) к стандартной площади пятна (5 щ), полученной от стандартного количества вещества того же класса липидов (20 мкг), т, е. Площадь пятна определяют по уравнению15 для площади эллипса: 20где а и Ь - большая и малая оси эллипса,25(Й - максимальное значение оптическоинплотности фотокопии пятна на фотоденситограмме, а и Ь - основания пиков, полученных при сканировании пятна вдоль направления движения растворителя и перпендикулярно к направлению развития хроматограммы соответственно).Открываемый минимум каждого индивидуального класса липидов по измерению площади пятен (1 вариант окончания анализа) равен 0,5 мкг, а открываемый минимум каждого индивидуального класса липидов фотоденситометрическим путем (11 вариант окончания анализа) - 5 мкг,Продолжительность анализа с 1 вариантом окончания не больше 40 мин, со 11 - 2 час.471534 Таблица 2 Количество вещества в пробе, икг Относительная ошибка в опыте, %Номер опыга Исследуемое веществовзятонайдено най 1 епо взято найдено 10 9,1 10 7,6 Эруковая кислотайаргарпновая кислота+ 1,7 20 22,8 36, ,2772 4240 63 Изолпнолевая кислота 12 10,5- 25 67,5 24 Трпмаргарип- 7,9 58 +12 +14,3 - 5 1011,2 21 24 Предмет изобретения Составитель Л. МинееваТсхред 3. Тараненко Редактор А. Бер Корректор В. Гутман Заказ 110/1645 Изд. М 750 Тираж 902 Подщ;спое ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, 5 К.35, Раушская наб д. 4/5Тип, Харьк. фил. пред. Патент Таким образом, предлагаемый способ обеспечивает надежное количественное определение индивидуальных классов липидов, является достаточно быстрым и эффективным, а также позволяет получить достоверные данные по количественному соотношению индивидуальных классов липидов при анализе. 1, Способ количественного определения индивидуальных классов липидов в биоматериалах, содержащих их, например, в пищевых продуктах, предусматривающий приготовление липидного экстракта из биоматериала, нанесение его на силикагель с последующим хроматографированием и определением количества индивидуальных классов липидов, отличающийся тем, что, с целью ускорения и повышения точности определения, перед на несением липидного экстракта в силикагельвводят жирорастворимый азо- или оксазиновый краситель.2. Способ по п, 1, отличающийся тем, чтоиз жирорастворимых азокрасителей исполь О зуют метиловый красный.3. Способ по п. 1, отличающийся тем, чтоиз жирорастворимых оксазиновых красителей используют сульфат нильского голубого.4. Способ по пп. 1 - 3, отличающийся тем, 15 что колпчество индивидуальных классов липидов определяют по методу определения приведенных объемов их пятен.