Способ выделения микроорганизмов

, ЪОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК ПАТЕНТУ 336880 Союз Советскиз Социалистичвскиа РеспубликЗависимый от патентаМ. Кл. С 12 с 11/2 Заявлено 08 Х.1969 ( 1328867/28-13)Приоритет 10 Х 1968,151500, Франция Комитет по делам зобретений и открытий при Совете Министров СССР.1972. Бюллетень14 публиковано Дата опубликования описания 29 Х,1972 Авторы зобретенг Иностранцылод Гателье н Жорж Г(Франция) ман Заявитель Иностранная фирма рансэ дю Петроль, дэ Карбюэ Любрифьян Э СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ Изобретение относмикроорганизмов, впитательной среды, сные фракции нефти.Известны способымов, предусматриваютельную среду полярпример ацетона и этразделением образов тся к области выделения частности дрожжей из одержащей углеводородявляется ективного ракции и т еленных выделения микроорганизщие введение в пита- ного растворителя, наанола, с последующим авшихся фракций. Недостатком известных спосооовто, что они не обеспечивают эффразделения питательной среды на фудовлетворительной очистки вь д микроорганизмов.С целью более эффективного разделения питательной среды на фракции по предлагаемому способу в среду наряду с полярным растворителем дополнительно вводят диалкилкетон, содержащий четыре атома углерода.Диалкилкетон выбирают из группы метилкетона и пропилэтилкетона, при этом диалкилкетон может быть добавлен до введения полярного растворителя или в виде смеси с этим растворителем.Смесь диалкилкетона и полярного растворителя используют в количестве 1 - 10, предпочтительно 2 - 5 объемов на один объем питагельной среды. Весовое соотношение диалкилкетона и полярного растворителя составляет 1 - 8, предпочтительно 1,5 - 5. Предлагаемый способ осуществляют следующим образом.з Жидкие стоки из ферментаторапредварительному разделению нфазу, половину которой возвращаментатор, и эмульсию, содержащуные углеводороды, дрожжи и во10 ральными солями.Полученную эмульсию обрабатывают приинтенсивном перемешивании диалкилкетонами и полярным растворителем, вводимыми последовательно или в виде смеси. Обработку 15 эмульсии проводят при температуре 20 - 45 С,а более предпочтительно при температуре около 30 С. рН эмульсии доводят до 2 - 8.После премешивания эмульсию разделяют на три фракции - от большей плотности к 20 меньшей: нижняя часть (водная паста микроорганизмов); жидкий промежуточный слой, состоящий в основном из воды и полярного растворителя; жидкий слой, образованный в основном диалкилкетоном и остаточными угле водородами.При этом водная паста микроорганизмов,расположенная в нижней части резервуара, не соприкасается с легкой фазой, содержащей остаточные углеводороды.Из трех фракций сцеживают тяжелую водную пасту микроорганизмов, которую затем обрабатывают смесью из полярного растворителя и диалкилкетона или идентичной смеси, используемой для выделения дрожжей из пи тательной среды.Дрожжи, освобожденные таким образом от остаточных углеводородов и побочных продуктов типа жирных кислот, могут быть выделены для обеспечения их длительного хра пения без появления пригорклого вкуса.Две другие фракции также легко разделяют, например, отгонкой остаточных углеводородов из более легкой фракции и воды из промежуточной фракции. 15Полярный раствор и тель и диалкилкетон используют для выделения и очистки микроорганизмов.Весовое соотношение между диалкилкетоном и полярным растворителем зависит от 20 количеств водной фазы и углеводородов, находящихся в подлежащей обработке эмульсии.В предпочтительном случае используют небольшой избыток диалкилкетона по отношению к полярному растворителю. Это весовое 25 соотношение составляет от 1 до 8 или 1,5 до 5. П р и м е р 1. Дрожжи вида СапйЫа 11 ро 1 у 11 са непрерывно культивируют в ферментаторе на питательной среде, состоящей З 0 из газойля, содержащего 11% линейных парафиновых углеводородов, и водной минеральной среды следующего состава, г:диаммонийфосфат 2,2 хлористый калий 1,2 сульфат магния 0,9 проточная вода, содержащаяолигоэлементыэкстракт дрожжейдистиллированная вода 320 0,081000 40 Выращивание осуществляют при аэрировании, рН среды близким к 4,0 и температуреоколо 27 С,Из ферментатора культуральная среда, содержащая 90 вес. й воды с минеральными солями, 5 одрожжей и 5 оостаточных углеводородов, поступает в декантатор, На 1 объемкультуральной среды в декантатор вводят2 объема жидкой смеси, состоящей из 4 об. ч. 50метилэтилкетона и 1 об. ч, ацетона.При этом происходит разделение культуральной среды на три фазы: нижняя - воднаяфаза дрожжей, средняя, состоящая в основном из ацетона и воды, верхняя, состоящая 55в основном из метилэтилкетопа и остаточныхуглеводородов.Нижнюю (тяжелую водную фазу) отделяют, выделяют из нее дрожжи, при этом последние освобождены от остаточных углеводородов и побочных продуктов типа жирныхкислот. Дрожжи сушат и хранят,Две другие фазы (среднюю и верхшою) перегоняют, ацетон и метилэтилкетоц рекуперируют и используют вновь. 65 П р и м е р 2, Выращивание осуществляют так же, как и в примере 1.В культуральную среду после завершения выращивания вводят смесь, содержащую 1 ч. ацетона и 4 ч. изопропанола. Однако разделение суспензии ца фазы не происходит, а увеличивается лишь объем смеси, при этом необходимо смесь центрифугировать для отделения дрожжей, Выделенные таким образом дрожжи содержат 1,2 оуглеводородов.Изменение соотношения между ацетоном и изопропанолом при повторении операции це приводит к успеху.П р и м е р 3. Для выделения дрожжей из культуральной среды используют в одном случае смесь, содержащую метилизобутилкетон и этанол, в другом - метилэтилкетоц+пропанол. Остальные условия соблюдаются такие же, как описаны в примере 1.Б обоих случаях происходит разделение среды на трп фазы, Выделенные дрожжи не содержат углеводородов и побочных продуктов.П р и м е р 4. Повторяют условия, описанные в примере 1, со следующими изменениями.Выращивание осуществляют ца питательной среде, содержащей в качестве источника углерода депарафинизированцые смазочные масла, содержащие 90 О/, линейных парафинов. Водная минеральная среда используется без изменений.В декантатор поступает культуральная среда, содержащая 90 О/о воды, 9,5% дрожжей и 0,5% остаточных углеводородов.В декацтатор вводят 5 объемов смеси, содержащей 1,5 вес. ч. метилэтилкетона и 1 вес, ч. ацетона, при этом происходит расслоение образовавшейся смеси на три фазы. Выделенные дрожжи из более тяжелой фазы практически освобождены от углеводородов и побочных продуктов.П р и м е р 5, Повторяют условия, описанные в примере 4.Однако в декантатор вводят смесь, содержащую гексан и этанол (весовое соотношение гексан/этанол равно 1,5, а объемное - 65/35), при этом не наблюдается разделение эмульсии на три фазы. Эмульсию подвергают центрифугированию, при этом получают дрожжи, содержащие около 0,2 оостаточных углеводородов.Предмет изобретения 1. Способ выделения микроорганизмов, например дрожжей, из питательной среды, содержащей углеводородные фракции нефти, путем введения в нее полярного растворителя, например ацетона, этанола, с последующим разделением образовавшихся фракций, отликаощийся тем, что, с целью более эффективного разделения питательной среды ца фракции, в среду наряду с полярным растворителем дополнительно вводят диалкцлкетоц, соерка ций 4 атома углерода,336880 Составитель А, КиселеваТехред Л, Евдонов Коррскгор Т. Грсвцова Редактор В. Блохина Заказ 149212 Изд.611 Тираж 448 ПодписноеЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССРМосква. Ж, Раугиская наб., д. 4,5 Типография, пр. Сапунова,2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве диалкилкетона используют метилэтилкетон, метилизобутилкетон, диэтилкетон и пропилэтилкетон. 3, Способ по пп. 1 и 2, отличающийся тем, что дналкнлкетон вводят перед введением полярного растворителя, например ацетона, спирта. 4. Способ по пп. 1 и 2, отличающийся тем,что диалкилкетон вводят в смеси с полярным растворителем, в количестве 1 - 10 объемов, предпочтительно 2 - 5 объемов смеси ча 5 1 объем питательной среды.5. Способ по пп, 1, 2 и 4, отличающийся тем,что весовое соотношение диалкнлкетона и полярного растворителя составляет 1 - 8, предпочтительно 1,5 - 5.