Способ определения нарушения уровня ко-а-индуцированной супрессии лимфоцитов

(Я)5 6 01 ТЕ АТЕН дицина иммунология для способа определения наруеения уровня Кон-А-индуцировэнной супрессии лимфоцитов. Сущность изобретения: исследуют периферическую кровь человека нэ функциональную активность Кон А-индуцированной супрессии в эутосистеме с исследованием показателя - "холодовой" супрессии. Установлен норматив последнего,9. 2,7. Способ позволяет повысить точность и комплексность оценки иммунологичвского статуса человека, упрощает, ускоряет и расширяет возможности его применения, и кроме того, отпадает необходимость в использовании донорской крови. аучно-исследователь лактической и клиниче ре эта субпо- Я Изобретен ины, а именн спользовано ого" статуса автором впервые и в литерату пуляция не описана.Поставленная цель дости в способе определения функ тивмости Кон А-индуцирован который включает взятие кро го больного и донора, выдел леарных клеток по мет последующим определением рованной и спонтамной супр ве отвечающих клеток и лимфоциты того же индиви щиеся при т 2-4 С с последую нием процента супрессии:(71) Туркменский научно-исследователь ский институт профилактической и клинической медицины(73) Туркменский нский институт профиской медицины(54) СПОСОБ ОНИЯ УРОВНЯ КОСУПРЕССИИ(57) Использование: экспериментальная мед. 1976, 143, р. 1100-1106. ПРЕДЕЛЕНИЯ НАРУШЕ Н А-ИНДУЦИРОВАННОЙ е относится к области медииммунологии и может бытья определения "супрессороровых и больных людей. Целью данного изобретения является повышение точности и комплексности оценки иммунологических показателей с помощью проведения способа определения функциональной активности субпопуляций клеток-супрессоров в аутосистеме, где контролем служат клетки тех же больных или доноров, вследствие чего исключается необходимость в использовании донорской крови. С помощью такой модификации и предложенной формулы расчета была впервые обнаружена возможность определения новой, не изученной функциональной активности клеток-супрессоров, условно мазвэнных "холодовыми". Этот термин предложен где Й - отвечающие клетки гается тем, что циональной акной супрессии,ви исследуемо- ение мононукоду Воуоа сКон А-индуциессии, в качестспользуются да, инкубирующим определе 18366398 х - облученные клетки, инкубировавшиеся в холодильнике;ФГА - митоген фитогемагглютинин,причем, среднестатистическая норма процента супрессии после охлаждения составляет для здоровых лиц - 10,9+ 2,7,Определение функциональной активности Кон А-ийдуцированной, спонтанной исупрессии после охлаждения определяетсяследующим образом: 10Первые этапы реакции аналогичны описанной выше, Отличие от стандартной методики состоит в том, что в качествеотвечающих клеток предлагается использовать лимфоциты того же индивида, которые 15ресуспендируют в рабочей среде в концентрации 5 х 10 кл/мл и инкубируют в центрифужной пробирке 72 часа при т 2-4 С. После72-х часовой инкубации клетки 8+ отмываютдважды средой 199 от Кон А, а клетки 8- и В 20отмывают один раз и освобождаются от над- .осадочной жидкости. Клетки 8+, В- и 1/4часть респондеров (В) обрабатывают митомицином С в течение 30 мин при ( 37 С илиреже облучают. Затем снова отмывают 25трижды и ресуспендиуют в рабочей средев концентрации 5 х 10 кл/мл. Облучвннуючасть клеток-респондеров обозначают 8(холодовые супрессорц). Необлученныеклетки-респондеры ресуспендируют в рабачей среде в концентрации 5 х 10 кл/мл.Клетки раскапывают на стандартные 96-тилуночиые микроплата по 0,1 мл в соотношении 1;1 и культивируют 72 часа прит 37 С ватмосфере 5 С 02 и 100 влажности в следующих комбинациях;1, В; 2. В+ Ф ГА; 3. В + 8 , 4. В+ 8+ ФГА;5, В + 8-; 6. В + 8-+ ФГА; 7, В + 8+; 8. В+ 81+ФГА, Все комбинации выполняются вц триплетах, Последующие этапы аналогичны описанной выше реакции. Формулы расчета:Кон А-индуцированной супрессии(6 о . спонтанной супрессиисупрессии ли ения) (С)фоцитов (после охлаже В - отвечающие клетки исследу 8+ - клетки исследуемого, культ е в присутствии Кон А;мого;вируе 8- - клетки исследуемого, культивируемые в отсутствии Кон А;8 х - облученные клетки, инкубировавшиеся в холодильнике.Данным способом обследовано 53 донора и с помощью статистической обработки по методу Стьюдента установлен нормальный показатель супрессии лимфоцитов после охлаждения у здоровых лиц - 10,9 2,7,Изобретение иллюстрируется следующими примерами.П р и м е р 1, При обследования здоровых донора Петровой А,Ф., (группа крови (О) 1 ВЬ +) 38 лет, с помощью предложенного способа была выявлена функциональная активность Кон А-индуцированной супрессии - 20.1 и спонтанной супрессии - 16,2. что не выходит за рамки нормальных показателей - 22,3+ 2,6 и 18,1+ 1,3 соответственно, Суп рессорная активность лимфоцитов после охлаждения так же оказалась нормальной,4, Эти показатели указывают на благополучие в супрессорном звене иммунитета и у данного донора,П р и м е р 2. При обследовании больного Юрченко К.Ф., 56 лет, страдающего Иб стадией заболевания раком желудка функциональная активность Кон А-индуцированной супрессии оказалась повышена до 34,5, спонтанная супрессорная активность составила 17,2, а супрессорная активность лимфоцитов после охлаждения оказалась равной 42,4, что превышает нормальный показатель в 4 раза, Таким образом, у больного Юрченко К.Ф, наблюдается выраженный дисбаланс в супрессорном звене; активность Кон А-индуцированной и супрессии лимфоцитов после охлаждения резко повышена при нормальном показателе спонтанной супрессии.П р и м е р 3. Больная Григорян А,В., 48 лет, страдающая поллинозом, была обследована на Кон А-индуцированную супрессорную активность, которзя составила 20,1, спонтанная супрессия - 15,2, что не превышает нормальные показатели, а активность супрессии после охлаждения оказалась подавленной в 2 раза - 5,4, что говорит о явном патологическом сдвиге в супрессорном звене иммунитета у данной больной,Формула изобретения Способ определения нарушения уровня Кон А-индуцированной супрессии лимфоцитов, включающий отбор крови пациента, выделение мононуклеарных клеток, инкубацию их в присутствии Н-тимидина, регистрацию спонтанной и Кон А-индуцированной супрессии лимфоцитов с последую1836639Яф Составитель А.АгуреевРедактор Т,Куркова Техред М, Моргентал Корректор М.Куль Заказ 3018 Тираж Подписное 8 НИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-ЗБ, Раушская наб;, 4/Б Производственно-издательский комбинат "Патент". г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 щим сравнением результата с нормой, о тл и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности способа, дополнительно регистрируют спонтанную супрессию лимфоцитЪв пациента после их инкубации при 2-4 С в течение 72 ч, в качестве отвечающих клеток используют лимфоциты того же пациента, рассчитывают процент супрессии лимфоцитов (С) в пробе, подвергавшейся инкубации при 2-4 С, после охлаждения по формуле где й - отвечающие клетки исследуемо го;Зк - облученные клетки, инкубировэвшиеся в холодильнике;ФГА - фитогемагглютинин,и при значении 8,2С13,6 определя ют нарушение.