“способ получения комплекса липидов “тимихол” из животного сырья”

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКРЕСПУБЛИК А,В.ПалладинаКомиссаренко,ими олуча ожет ентрифу- ернатаниспол как сы ющих "тима левого сырья чая и н ниГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНВЕДОМСТВО СССР(ГОСПАТЕНТ СССР) 1) 5014086/14 2) 20.11,91 6) 23.08.93. Бюл. 1) Институт биохи 2) С,Н.Тихонов А. Богуславский и 3)Малое предпри 6) Патент США гв. А 61 К 31/685, 1 4) СПОСОБ ПОЛ ИПИДОВ "ТИМИ) Изобретение относится к х цевтичеекой промышленност ый комплекс липидо Изобретение относится к химико-фарцевтической промышленности, а получаый комплекс липидов может пользоваться в медицине как средство, особствующее очищению гнойной раны, генерации мягких тканей, реорганизации бца и эпителизации раневой поверхности словиях нарушенной трофики,Новый способ предлагает использовать ачестве сырья вилочковую железу крупго рогатого скота и включает следующие ерации: измельчение и гомогенизация рья в физиологическом растворе, отделее жидкой фазы (центрифугирование). прим обрузуется осадок и супернатант с отирующей липидной фракцией, из флоующей липидной фракции экстрэгироваизопропэнолом комплекса липидов, еление твердой фазы (центрифугировэили декантация), растворение в гексане 1836091 АЗ 51)5 А 61 К 35/24 О 31/6 использоваться в медицине как средство для очищения гнойных ран, регенерации мягких тканей, реорганизации рубца, эпителизации раневой поверхности в условиях нарушенной трофики. Сущность изобретения; в качестве сырья используют вилочковую железу крупного рогатого скота. которую измельчают, гомогенизируют в физиологическом растворе, центрифугируют из флотирующей фракции суспернатанта путем экстракции изопропанолом при соотношении 1;(5 - 10) выделяют комплекс липидов, центрифугируют, осадок растворяют в гексане при соотношении 1:(5-10) и выделяют целевой продукт,биологически активных липидов, ц гирование, концентрирование суп та (вакуумная отгонка гексана) и сушка . конечного продукта.Получаемый комплекс биологически активных липидов содержит следующие компоненты, %; глицериды 30-45, глицерофосфаты 40-70, холестерин (в свободном и этерифицированном состоянии) 1,5-4, неомыляемые вещества 3-5, жирные насыщенные кислоты при массовом отношении к ненасыщенным 2:1.В настоящее время вилочковую железуьзуют нерентабельно, исключительно рье для получения иммунокоррегирубелковых препаратов типа "вилозен", лин", "тактивин", при этом выход цепродукта составляет 5-7, от веса. Новый способ позволяет, не исклюараллельного выделения указанныхбелковых препаратов, получать липиды за счв опгимальной утилизации фракций гомоге,1 изирован 1 чого сырья после центрифугирования: суг ернатант - для выделения вышеуказанных препаратов, флотлрующая лиг 11 лд 11 ая фракция - для Быделен 1 чя нового липидноГО комплекса,Следо 11 ательно, использование Билочковой железы для выделения колчплекса липидов, несмотря, на разнообразие источников сырья, является решением неординарньБч и рациональным, "ОБЫЙ комплекс липидов, выделенный из богатой на широкий спекгр липидов флотлрующей фракции путем экс Гракции иэопропанолом, центрифугирования. экстракцией липидов иэ Осадка гексапом, повторного центрифу; ирова 11 ия и концеГ 1 трирова 11 и 11 супернатанта, обладает лэчебным эффектом - ускоряет процесс рсгенерации мягких ткаиел, и оказ ы Бает бактерицидное дейчствие 11 а инфицированные ранььИзобретение илл 1 острируется примерами ко;1 кретного Быг 1 олнения способа (Г 1 римеры 1-3) и испытания биологи 1 ескгй активности получаемого продукта (примеры 4 - 6)П р и м е р 1, 10 кГ БилочкОБОЙ железы измельчакт на мясорубке с диаметром фильеры 2 мм, гомогенизиру 1 от Б двух обьемах физиолог 1 чческого раствора, центрифуГируют 30 мин при 3000 об/мин и темг 1 ера уре -4 "С Б Офр 1 чкератор 11 ой центр 1 чфу е, ГОлучаемый сугернатант используют для ьыделения Г 1 репаратов,типа "Билозен", Из флотиру 1 ощей фракции супернатанта экстрагиру 1 от комплдкс липидов иэопропанолом Б соотношении гомогенат: спирт 1:5 Б течение 2 ч при комнатной температуре, затем снова центрифугируют при 3000 ОИ 1 чин, 30 мин, Осадок смешивают с гексаном в соотношении 1;10, провод 11 т реэкстракцию при перемешивании в течение 3 ч при комнатной.гемпературе, а затем оставля 1 от на 16 ч для разделения фаэ, Надосадочну 1 о жидкость декантируют, растворитель удаля 1 от вакуумной отгонкой, комплекс биологически активных липидов сушат, Целевой продукт составляет 5% от веса железы или 25% от флотиру 1 ощей фракции гомогената, Полученный липидный комплекс "тимихол" соДержиг 45% ГлицериДОБ, из них 114 моноглицеридов, 12% Диглицеридов, 22% триглицеридов, 1,5% холестерина и 54,5% глицерофосфатов, Б составе которых 30% фосфолипиДОБ и 70% Ядхен-иловых эфиров глицерина.П р и и е р 2, Все операции по получеНИ 1 О ф 1 ОТИУ 1 ОГЦЕЙ Р 1 КЦИИ ПРОБОДЯТ СО 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 гласно описанию примера 1, Флотиру 1 ощую фракцию обрабатыва 1 от изопропанолом в соотношении 1;5 в течение 30 мин при 25 - 30 С с последующим центрифугированием при 3000 об/мин, 30 мин и отделением центрифугата, Из осадка липиды экстрагируют гексаном в соотношении 1:7 в течение 2 часов при 40 С, снова центрифугируют при 3000 об/мин, в течение 30 мин. Из супернатанта удаляют гексан вакуумной отгонкой, а зателч сушат получаемый комплекс биологически активных липидов, Целевой продукт составляет 7% веса железа и 30% веса флотиоующей фракции гомогената, Полученный липидный комплекс "тимихол" содержит 36% глицеридов, из них 6% моноглицеридов, 9% диглицеридов и 21% триглицеридов, 4% холестерина и 60% глицерофосфатов,Г р и м е р 3, Все операции по получению флотиру 1 ощей фракции проводят согласно описанию примера 1, Из флотирующей фракции экстрагиру 1 от липидные компоненты изопропанолом в соотношении к растворителю 1:5 в течение 1 ч при комнатной температуре, Смесь центрифугируют при 3000 об/мин, 30 мин, Осадок ресуспендируют с гексаном Б соот 1 чошен 1 чи 15. Экстракци 1 о проводят при перемешивэнии Б те 1 е 11 ие 2 часов при 45 С, снова центрифугируют при 3000 об/мин, в течение 30 мин. Из супернатанта удаляют гексгн вакуумной отгонкой, а затем сушат получаемый комплекс биологически активных липидов.Целевой продукт составляет 7% веса железы и 30% Беса флотиру 1 ощей фракции из гомогената.Б составе целевого продукта: 30% глицеридов, из них 5% моноглицеридов, 8% диглицеридов и 17% триглицеридов; 3% холестерина, остальные липиды представлены глицерофосфатами: 25% фосфолипидов и 75% алкен-иловых эфиров глицерина.П р и м е р 4, Больной А.,28 лет. Диагноз: компрессионный перелом С 5 позвонка, ослокненный повреждением спинного мозга. Травма 10-ти месячной давности. Отсутствие движений в никних конечностях, нарушена функция тазовых органов, У больного пролекни в области крестца 5 х 6 см и в области вертела 4 х 5 см, оперативное закрытие швами которых и аутодермопластикой были безусг 1 ешными, Местное лечение на первом этапе осуществляют "Ируксолом" и "Левосином", После очищения ран, когда применение указанных мазей становится нецелесообразным, так как они задержива 1 от рост грануляций, которые приобретают мелкозернистый вид и становятся тусклыми, применяют препараты, стимулиру 1 ощиерегенеративные процессы в ране, Для уско,рения роста грануляций и эпителизации ,тканей пролежень в области крестца обрабатывагот новым комплексом липидов "ти 1 михол", а пролекень в области вертела 5 1 винилином - бальзам Шостаковского (конт роль) в течение 3 недель ежедневно один рэз в день, В конце указанного срока пролежень в области крестца полностью закил, :а в области вертела (контроль) уменьшился 10 по площади всего на 50%,П р и м е р 5, Больной Б., 42 года. иагноз: компрессионный перелом С 5-С 6 озвонков, синдром полного поперечногоовреждения спинного мозга, Травма 17- 15 етней давности,Пролежни размером 2 х 3 см на правой и евой ягодицах, вялое, малосимптомное эзвитие нагноения, В раневом отделяемом ыявлена ассоциация протея и энтеробак ерий. Общее небольшое недомогание, тойкий и длительный субфебрилитет, снисение показателей клеточного и гуморального иммунитета. На первом этапе роводят курс иммунотерапии с использо анием тэктивинэ, декариса, а пролежни леат обычным методом с применением нтибиотиков, протеолитических ферменов, препарата "Ируксол", После очищения ролежней от некротических тканей и ис чезновения в отделяемом протея и энтероакгерий в течение 2-х недель, ежедневно, дин раз в сутки пролежень на левой ягодие обрабатывают облепиховым маслом (контроль), э на правой новым комплексом 35 ллпидов "тимихол", Последний обеспечив в ет более быструю регенерацию клетокягких тканей, способствуя росту грэнуляц й и ускоряя эпителизацию, Так, в течение 2 х недель под действием нового липидного 40 к мплекса происходит полное заживление р ны, тогда как при лечении облепиховым мслом (контроль) пролежень уменьшается и площади только на 70%, но не зарубцов гвается в те же сроки. 45П р и м е р б. Больной В., 27 лет. Диагн 3: переломо-вывих ТЬБ-Тп 11 позвонков с и вреждением спинного мозга, Травма дави стью 1 месяц. В области крестца пролек нь размером 4 х 7 х 3,5 см. Иэ отделяемого 50 и олежня высеяны протей и кишечная пал чка (10 /мл), чувствительные к гентамици 5н, хлоргексидину, рифом пицину и фуразолидону, Местное применение 0,02% хлоргексидина для промывания раны и "Левосина" в течение недели, ежедневно, один раз в сутки позволяет снизить число микробов до 10 на мл отделяемого, Последующее ежедневное применение один раз в сутки нового комплекса липидов "тимихол" для лечения пролежня способствует полокительной динамике бактериологических исследований, полному исчезновению гибе родной микрофлоры к концу 1-й недели, появлению грануляций. За последующие 2 недели возбудители не высеваются ни разу, а пролежень уменьшается в размерах до 2.5.1,5 см, т.е. рана подготовлена к оперативному закрытию швами или аутодермопластикой. После хирургического закрытия рана заживет первичным натяжением, что соответствует состоянию неинфицированной раны.Результаты клинических испытаний показывают преимущество использования нового комплекса биологически активных липидов по сравнению с известными аналогами: облепиховое масло, бальзам Шостаковского, которое заключается в ускорении регенерации мягких тканей, реорганизации рубца и эпителизации раневой поверхности, заживлении ран первичным натяжением после хирургического лечения раны за счет улучшения антибэктериального состояния раневой поверхности,Формула изобретения 1. Способ получения комплекса липидов "тимихол" из животного сырья, включающий измельчение сырья, экстракцию органическим растворителем, отделение супернатанта центрифугированием с последующим концентрированием отгонкой целевого продукта, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что в качестве сырья используют вилочковую железу крупного рогатого скота, которую после измельчения гомогенизируют в физиологическом растворе, флотирующую фракцию супернатанта экстрагируют иэопропанолом, дополнительно центрифугируют и осадок, содержащий целевой и родукт, растворя от в гексане.2, Способ по п,1, о т л и ч э ю щ и й с я тем, что экстрадицию супернатантэ изопроанолом и растворение осадка в гексанроводят в соотношении 1:5 - 10.