Способ оценки репаративного остеогенеза на гистологическом препарате

(5)5 6 01 М 1/2 ОПИС И ниям при иэыс соединений, ТОЧНОСТИ СПОС исследования этом эфФект к го резца нижн сти репарати показателю а ормуле покаб осуществля ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕВЕДОМСТВО СССР(71) Медико-инженерный центр "Гиперселективное воздействие" 1-го Ленинградского медицинского института им, акад.И.П.Павлова(54) СПОСОБ ОЦЕНКИ РЕПАРАТИБНОГООСТЕОГЕНЕЗА НА ГИСТОЛОГИЧЕСКОМПРЕПАРАТЕ(57) Изобретение относится к медицине, аименно химиотерапевтическим исследоваИзобретение отно тся к медицине, а именно к способам моделирования повреждений костной системы и может быть использовано для изыскания средств оптимизации репаративного остеогенеза в стоматологии, травматологии и ортопедии,Целью изобретения является повышение точности оценки репаративного остеогенеза путем использования цифрового показателя стандартизованного дефекта на большом количестве линейных животных, а также удешевление и снижение трудоемкости.Спосо ютследующим обра. Под общим обезболиванием (эфирный ингаляционный, внутрибрюшной тиопенталовый наркоз) обоюдоострым узкании биологически активных Целью является повышение оба, Цель достигается тем, что производят на грызунах, при ости создают удалением одноей челюсти, а оценку активновного процесса проводят по ктивности, рассчитанному по Я 1 - Я 21000/де Р -Я 1 затель активности; Ь 1 - площадь сечениялунки неудаленного резца; Я 2 - площадь поперечного сечения лунки удаленного резца. Способ позволяет выявить вещества, стимулирующие костеобразование, 2 ил. ким ланцетом рассекают на 1/2 длины лунки периодонтальный связочный аппарат нижнего резца мелкого лабораторного животного. Специрьно заточенный кровоостанавливающий зажим с параллельно раскрывающимися браншами накладывают на коронковую часть нижнего резца и несколькими возвратно-поступательными движениями, направление которых совпадает с изгибом корня, извлекают зуб из лунки. Для гемостаза в лунку удаленного зуба с помощью шприца и инъекционной иглы с затупленным концом вводят 20 ь-ный раствор перекиси водорода, После остановки коовотечения вглубь лунки на 2/3 ее длины вводят испытуемое вещество с помощью шприца или тупфера, имеющего изгиб, соответствующий изгибу корня зуба, Слизистая оболочка десны над входом в лунку сближается швом, После выведения в запланированные сроки животного (крысы) из опыта производят вычленение нижней челюсти с последующей ее декальцинацией тем или иным способом и заливкой в парафин или 5 целлоидин. Перед заливкой сближают обе половины нижней челюсти до соприкосновения их внутренних поверхностей (фиксация в этом положении осуществляется кетгутовой лигатурой) и устанавливают на "0 дно кюветы перпендикулярно поверхности ее дна и параллельно ее боковым стенкам, что позволяет в дальнейшем одновременно производить поперечные срезы через лунку правого и левого резцов (стандартизиро ванный туннельный дефект) на одном и том же уровне и под одним и тем же углом к их продольной оси. Это имеет принципиальное значение, так как в силу изгиба продол ьной оси лунки резца, получить срез, строго 20 перпендикулярный этой оси на разных уровнях практически оказывается невозможным. Необходимость одновременного получения поперечных срезов правой и левой половины нижней челюсти обусловлена 25 тем обстоятельством, что по мере нарастания репаративных процессов четкость границ лунки удаленного зуба утрачивается и возникают трудности в подсчете исходной площади поперечного сечения лунки. Нали чие в препарате среза другой половины нижней челюсти с резцом позволяет достаточно точно определить площадь поперечного сечения лунки этого зуба на выбранном уровне, которую и принимают за исходную 35 площадь лунки удаленного зуба. С помощью оптического устройства увеличенное изображение проецируют на лист бумаги с мэштабной сеткой и нэ нем отмечают контуры участков просвета лунки, свободных от 40 новообраэованной кости на стороне опыта и контуры границ поперечного сечения лунки контрольной половины нижней челюсти (с сохраненным зубом), Затем с помошью масштабной сетки или сканирующего уст ройства подсчитывают площадь поперечного сечения лунки резца контрольной половины нижней челюсти 31(фиг. 1) и суммарную площадь свободных от новообразованной костной ткани участков лунки 50 опытной половины нижней челюсти 52 (фиг.2). После этого высчитывают показатель Р, характеризующий отношение площади новообрэзованной костной ткани к исходной площади лунки в данном сегменте по формуле: Для повышения достоверности результатов исследования количественную оценку репаративного остеогенеза по описанной методике у каждого животного следует производить на нескольких уровнях поперечных срезов,П р и м е р. С целью изучения влияния на репаративный остеогенеэ композиции фосфатов были проведены опыты на белых крысах-самцах массой 120,0 г, У животных первой (опытной) группы в количестве 10 шт. под внутрибрюшным гексеналовым наркозом удаляли по описанной выше методике левый резец на нижней челюсти, осуществляли гемостаэ промыванием лунки 20-ным раствором перекиси водорода, после чего ее на 2/3 заполняли композицией пастообразной консистенции, состоящей иэ смеси фосфатов кальция. Края десны над лункой сближали шелковым швом, У животных второй (контрольной) группы таким же образом удаляли левый нижний резец и после проведения гемостаза накладывали шов шелком на края десны над лункой зуба. Рацион подопытных животных включал мягкую пищу, На 14-е, 28-е и 56-е сутки по три крысы иэ каждой серии выводили из опыта, После вычленения и декальцинации нижней челюсти из нее готовили поперечные срезы толщиной 5 и на разных уровнях лунки нижних резцов, которые окрашивали гематоксилин-эозином и по Ван-Гизон. После описания микроскопической картины проведено планиметрическое изучение препаратов по описанной выше методике, При этом установлено, что у крыс контрольной группы показатель Р, характеризующий отношение площади новообразованной кости к исходной площади лунки резца, спустя 4 недели после начала опыта составил 23,2- 2,37, спустя 8 недель - 48,5+3,9. У, крыс опытной группы показатель Р спустя 4 недели после начала опыта составил 36,9+2,85;, а спустя 8 недель - 72,7+5;60, Проведенные исследования с использованием предлагаемого способа оценки репарэтивного остеогенеэа позволили не только выявить ускорение заполнения стандартизированного туннельного дефекта в нижней челюсти новообразо ванной костной тканью, но и определить количественный цифровой показатель, характеризующий активность препарата, что чрезвычайно важно при проведении многочисленных экспериментальных исследований,Использование предлагаемого способа оценки репаративного остеогенеза зэ счет обеспечения моделирования стандартизованного туннельного дефекта нэ линейных1816989 Составитель Л.Стебаеваедактор С.Кулакова Техред М,Моргентал Корректор Н,Гунько 1718 Тираж ПодписноеНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СС113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 роизводственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагари 101 животных и создания возможности точного количественного сравнения полученных результатов позволяет достичь повышения точности и достоверности оценки результатов испытаний различных лекарствен ных препаратов или физических воздействий. Использование в способе мелких лабораторных животных позволяет повысить репрезентативность результатов исследования по сравнению с исследовани ями подобного рода, производимыми на собаках. Формула изобретенияСпособ оценки репаративного остеогенеза на гистологическом препарате путемсоздания дефекта кости, воздействия изучаемого агента с последующей регистрацией активности репаративного процесса в кости, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности способа, исследование проводят на грызунах, при этом дефект создают удалением одного резца нижней челюсти, а оценку активности репаративного процесса проводят по показателю активности. рассчитанному по формулеР=Х 100;6,31где Р - показатель активности;Я - площадь сечения лунки неудаленного резца нижней челюсти;Яг - площадь поперечного сечения лунки удаленного резца нижней челюсти,