Способ определения гидрозида изоникотиновой кислоты

(54) СПОСОБ ОПРЕД ИЗОНИКОТИНОВО (57) Сущность изобр зируемой пробы под тов - роданида амм кислой среде образу конового альдегида, руется со спирто димедона в нейтраль разованием окраше рые фотометрируют ЕЛЕН И КИСЛ етения; расще ония и ет про после водн ной ср нных и при 525 ИЯ ГИДРАЗИДА ОТЫраствор аналиплением реагенхлорамина Б в изводное гл ютадний конденсиым раствором еде рН 6,8 с обродуктов, котонм, 2 табл,скои ного овой иоте- ного стГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕВЕДОМСТВО СССР(71) Алма-Атинский государственный медицинский институт им, С.Д. Асфендиарова(56) Авторское свидетельство СССРВ 974228, кл. 6 01 й 21/78, 1982.Авторское свидетельство СССРМ 941890, кл. 6 01 й 21/78, 1982,Изобретение относится к аналитиче химии, а именно, к способам количествен определения гидразида изоникотин кислоты, применяемого в качестве хим рапевтического противотуберкулез средства (тубазид, изониазид, ГИНК).Цель изобретения - повышение ч вительности и точности определения,Поставленная цель достигается тем, что в способе определения гидразида изоникотиновой кислоты анализируемую пробу обрабатывают вначале растворами роданида аммония и хлорамина Б ведут в кислой среде, создаваемой 0,1 н. раствором хлороводородной кислоты, а в качестве органического соединения, содержащего метиленовую группу, используют 2 ф(з спиртовый раствор димедона в присутствии универсального буферного раствора рН 6,8 - 7,2 с последующим фотометрированием окрашенного раствора при 525 нм,Способ осуществляют следующим образом, Анализируемую пробу препарата последовательно обрабатывают 1 оз раствором роданида аммония, 2 оо раствором хлорамина Б и 0,1 н, раствором хлороводородной кислоты; через 10 - 15 мин ф прибавляют 2 спиртовый раствор димедо- СО на, универсальный буферный раствор рН,в 6,8 - 7,2 и фотометрируют при 525 нм. Подчи- ф нение закону Бера соблюдается в пределах (р от 0,20 до 2,00 мг препарата в 25 мл раство- . ц 1 ра, Чувствительность реакции 0,5 мкг препарата в 1 мл раствора,П р и м е р 1, Качественное определение тидразида изоникотиновой кислоты. Около )юв 3 - 5 мг препарата растворяют в 0,5 мл воды, а прибавляют 0,5 мл 1раствора роданида аммония, 2 мл 2раствора хлорамина Б, 0,5 мл 0,1 н. раствора хлороводородной кислоты и оставляют на 10 - 12 мин, Полученный раствор нейтрализуют, прибавляя по каплям 0,5 н, раствор гидроксида натрия, и добавляют 0,5 мл 2 спиртового растворадимедона, Через 3 - 5 мин появляется розово-фиолетовое окрашивание. Предел обнаружения 5 мкг препарата.П р и м е р 2. Определение содержания гидразида изоникотиновой кислоты в фармакопейном препарате.В одну пробирку вносят 1 мл раствора стандартного образца, 1 мл которого содержит 0,5 мг гидразида иэоникотиновой кислоты, а, в другую - 1 мл испытуемого раствора препарата (0,05-100). В обе пробирки последовательно вносят по 0,5 мл 1 раствора роданида аммония, 2 мл 2 раствора хлорамина Б, 0,5 мл 0,1 н. раствора хлороводородной кислоты и оставляют на 15 мин; доводят реакцию среды до нейтральной добавлением по каплям 0,5 н, раствора гидроксида натрия; и прибавляют 0,5 мл 2 спиртового раствора димедона. Объемы доводят до 10 мл универсальным буферным раствором рН 6,8 и через 20- 25 мин измеряют оптическую плотность на СФ - 26 в кюветах с толщиной слоя до 10 мм при 525 нм; в качестве контроля используют воду,Содержание гидразида изоникотиновой кислоты в граммах рассчитывают по формуле;х 0 00О.ргде Ох - оптическая плотность испытуемого раствора;О 0 - оптическая плотность раствора стандартного образца;С - содержание препарата в 1 мл раствора стандартного образца, г;р - точная масса препарата, взятая на определение, г.Результаты количественного определения гидразида изоникотиновой кислоты в фармакопейном препарате сведены в табл. 1.П р и м е р 3. Определение содержания изониаэида в таблетках, Точную массу порошка растертых таблеток изониазида (0,025 г) обрабатывают 20 мл воды в мерной колбе вместимостью 50 мл, интенсивно перемешивая в течение 5 мин; доводят объем водой до метки и фильтруют, отбрасывая первые и последние 5-8 мл фильтрата испытуемый раствор, В одну пробирку вносят 1 мл раствора стандартного образца гидразида изоникотиновой кислоты (0,05-100), а в другую - 1 мл испытуемого раствора; далее определение проводят по методике (см, пример 2).Содержание иэониазида в граммах, считая на среднюю массу одной таблетки. рассчитывают по формуле: Ох Со Ь 50 СхОо р 1(2) Способ определения гидразида изони.котиновой кислоты путем обработки аналигде Ох - оптическая плотность испытуемогораствора;00 - оптическая плотность растворастандартного образца;С - содержание препарата в 1 мл раствора стандартного образца, г;р - точная масса порошка растертых"5 таблеток изониазида, г;Ь - средняя масса одной таблетки изониазида, г.Результаты определения изониазида втаблетках сведены в табл,1.П р и м е р 4. Определение содержаниясуммы метаболитов изониазида в крови,Для осаждения белков 2,5 мл сывороткикрови смешивают с 2,5 мл 10 ф растворатрихлоруксусной кислоты и центрифугиру 25 ют при 3000 об/мин в течение 10-15 мин.Далее, к 3,6 мл полученного центрифугатаприбавляют 0,4 мл 0,0050 раствора стандартного образца гидраэида изоникотиновой кислоты, в 1 мл которого содержится30. 0,02 мг препарата. Определение проводятпо калибровочной кривой.Построение калибровочной кривой.В ряд пробирок вносят соответственно0,02; 0,04; 0,06; 0,08; 0,1; 0,16; 0,2 мл стан 35 дартного раствора ивониазида, прибавляютпо 0,5 мл 10 раствора роданида аммония, 2мл 2; раствора хлорамина Б и оставляют на10 - 15 мин. Нейтрализуют полученный раствор вначале 10%, а, затем, 0,5 н, растворами гидроксида натрия, прибавляют по 0,5 мл2, спиртового раствора димедона и доводят до 10 мл универсальным буферным раствором рН 6,8,Через 15 мин измеряют оптическуюплотность на Сф - 26 в кюветах с толщинойслоя до 10 мм при 525 нм, В качестве контроля используют воду,.Предлагаемый спектрофотометрический метод в 200 раз более чувствителен по50 сравнению с известным (прототип). Точность количественных определений выше в2-4 раза; способ применим для определения суммы метаболитов гидраэида изоникотиновой кислоты в крови (см. таблицу 2).55формула изобретения%Определение содержания гидраэида изоникотиновой кислоты в фармакопейном препаратеи в таблетках (иэ 5 определений). 2 абл Результаты количественного определения суммы метаболитов изониаэида в крови (из 4 о ределении)зируемой пробы растворами роданида ам- .мония и хлорамина Б в кислой среде, азатем органическим соединением, содержащим метиленовую группу, измеренияоптической плотности окрашенного растворе, по которой рассчитывают концентрацию определяемого вещества, о т л и ч аю щ и й с я тем, что, с целью повышениячувствительности и точности определения. обработку анализируемой пробы рас творами роданида аммония и хлорамина Б ведут в кислой среде, создаваемой 0,1 н, раствором хлороводородной кислоты, а в качестве органического соединения, содержащего метиленовую группу, используют 2-ный спиртовой раствор димедона в присутствии универсального буферного раствора рН 6,8-7,2 с последующим фотометрированием окрашенного раствора при 525 нм,