Способ получения активированных онкосфер цестод

9) (1 Н ОПИСА К АВТОРСКО ИДЕТЕЛЬСТВУ ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНВЕДОМСТВО СССР. (56) Ячегвап Р,Н. 5 тцбез оп йе оооду о 1зове тареаогвз о йе депцз Тасйа, 11=астогз афТестпд ЬатсЫпд апб асбчат 1 оп оФтаевб оча, апб зове сгйега о 1 Йе 1 гча);)1 цту//Аппа 1 з от Тгор 1 са чеб 1 спе апбРагаз 11 оаду, 1954, ч, 48, р. 207-215.Неай Р.Р., Звуй Р,Р. пчТго сцЮчатоп .о 1 Есб)пососсцз дгапц 1 озцз, ТаепаЬцбат 1 депа, Т. оч 1 з, Т. рзОогвз апб Т,. зега 1 з 1 гов опсоср 1)еге то сузой1 агча,//Рагазтооду, 1970, ч, 61, р, 329-343. Изобретение относится к области биологии, в частности к получению активированных онкосфер гельминтов, и может быть использовано при приготовлении биопре.паратов.Цель изобретения - повышение выхода . активированных онкосфер для дальнейшего их культивирования и ч 1 го с использованием отечественных недорогих компонентов.Поставленная цель достигается тем, чтона стадии обработки онкосфер искусственным кишечным соком в его состав дополнительно вводится липаза и повышается процентное содержание желчи.Примеры конкретного исполненйя.П р и м е р 1, Зрелые членики цестодпомещают в.чашки Петри с физиологическим раствором, с помощью препаровальных игл из них извлекают яйца, Взвесь яиц. в количестве 200 тыс, в физиологическом 5)5 А 61 В 10/00, 6 01 й 33(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АКТИВИРОВАННЫХ ОНКОСФЕР ЦЕСТОД(57) Изобретение относится к области ветеринарии, а именно к получению активированных онкосфер гельминтов, и может быть использовано при приготовлении биопрепаратов. Цель изобретения - повышение : выхода активированных онкосфер для дальнейшего их культивирования 1 п чтго. Способ включает освобождение яиц онкосфер цестод из зрелых члеников, обработку яиц в искусственном желудочном соке при 37,5- 38 С в течение 2 ч и в искусственном кишечном соке, содержащем липаэу в количестве 0,01-0,03 ф 4 и 5-20 О свежей желчи крупного рогатого скота, при 37,5-38 С в течение 25 мин, Данный способ позволяетполучить 3 60 активированных онкосфер. 1 табл,растворе переносят в центрифужные пробирки и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 3 мин. Надосадочную жидкость сливают, а к осадку добавляют ИЖС и плотно закрывают пробирки пробками. ИЖС имеет следующий состав: пепсина 1 , концентрированной соляной кислоты 1 ь и физиологического раствора до 100 мл, рН ИЖС составляет 1,0-1,5, инкубацию проводят в термостате при 37,5-38 С в течение 2 ч. После обработки в ИЖС пробирки с взвесью яиц снова центрифугируют при 3000 об/мин в течение 3 мин, надосадочную жидкость слйвают, к осадку приливают 5 мл ИКС. Опять плотно закрывают пробирки пробками и помещают их в термостат с температурой 37,5-38 С на 25 мин. ИКС имеет следующий состав: панкреатина 17 ь, бикарбоната натрия 1 ф, трипсина 0,04, липазы 0,01, свежей желчи крупного рогатого скота (КРС) 50 и дистиллированной воды до 100 мл, рН ИКС составляет 8,1 - 8,4, но при соединении с остатком ИЖС снижается до 7,1-7,4. По истечении времени инкубации пипеткой на предметное стекло наносят 5 каплю взвеси яиц предварительно встряхнув пробирки) и проводят микроскопию при малом (х 8) и. большом (х 40) увеличениях, подсчитывают количество активированных онкосфер. 10Результаты представлены в таблице.П р и м е р 2, Получение взвеси яиц и обработку их в ИЖС проводят аналогично примеру 1. После инкубации яиц и центрифугирования, ИЖС сливают, а к осадку до бавляют ИКС следующего состава: панкреатина 10 , бикарбоната натрия 1%, трипсина 0,04 , липаэы 0,02%, желчи КРС 10 и дистиллированной воды до 100 мл, Дальнейшую обработку и микроскопию 20 взвеси онкосфер проводят аналогично примеру 1.Результаты представлены в таблице, П р и м е р 3. Получение взвеси яиц и обработку их в ИЖС проводят аналогично 25 примеру 1, После инкубации яиц и центрифугирования ИЖС выливают, к осадку прибавляют ИКС следующего состава: панкреатина 1%, бикарбоната натрия 1%, трипсина 0,04%, липазы 0,030 , желчи КРС 30 200 и дистиированной воды 100 мл. Дальнейшую обработку и микроскопию взвеси онкосфер проводят аналогично примеру 1.Результаты представлены в таблице, 35 П р и м е р 4. Выполняют по известному способу.Этот способ является прототипом предлагаемого способа получения активированных онкосфер цестод, Яйца цестод 40 первоначально обрабатывают в ИЖС, имеющем следующим состав: пепсина 1%, концентрированной соляной кислоты 1 % и физиологического раствора до 100 мл, Пробирки закрывают пробками. Инкубацию 45 проводят в течение 1 ч в термостате при 37,5-380 С. По истечении срока инкубации центрифугируют в течение 3 мин при 3000 об/мин, после центрифугирования ИЖС сливают и к осадку добавляют ИКС; пробка ми плотно закрывают пробирки и помещают их в термастат с температурой 37,5 - .38 С на 30 мин, ИКС состоит иэ панкреатина 1 , рбоната натрия 1, желчи КРСиллированной воды до 100 мл. Мию взвеси онкосфер проводят ао примеру 1.Результаты представлены в таблиАнализ данных, приведенных в табзывает, что предложенный спасония активированных онкосферльно повышает процент выходаованных онкосфер, не треогостоящих импортных реактист в применении,По сравнению с прототипом 21 аконкосфер повышается в 10 раз.енный способ может успменяться для получения активиронкосфер в целях их дальнейшегорования и чтго.Сопоставительный анализ с пропозволяет сделать вывод, что заяспособ получения активироваосфер отличается от известного вм в состав ИКС липазы и повышцентного содержания желчи.Анализ известных составов пищеных соков показал, что один из ввв заявляемое решение компоненчь - известен.Однако ее применение в искусствеечном соке с панкреатином, бикарнатрия и трипсином, но беэ липаспечивает повышения количестваованных онкосферформула изобретенияСпособ получения активированныфер цестод, включающий обработккусственном желудочном соке инном кишечном соке, содержащиатин, трипсин, бикарбонат нажую желчь, дистиллированную водч а ю щ и й с я тем, что, с целью повыхода онкосфер для дальнейшеьтивирования, в состав искусствеечного сока дополнительно вводу при следующем соотношении ктов, мас. %:Панкреатин 1,0Трипсип 0,04Бикарбонат натрия 1,0Липаза 0,01 - 0,04Свежая желчь 5,0-20,0 бика 5 идист икроскоп налогичнце.лице,пока б получе значите активир буетдор вов ипротивации Предлож ешнопри ованных культивитотипом вляемый нныхонк ведение ениемпроваритель еденных тов -желнномкиш бонатом зы необе активирх онкос у яицв ис искусстве м панкре трия,све у, о тли вышения го ихкул нногокиш ят липаз омпоненВода дистиллированная Остальное1813410 Влияние различного состава ИКС на выход эктивировэнных онкосфер Составитель Т.Судьина Редактор Л.Волкова Техред М.Моргентал Корректор Н. Корольтвенно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 из аказ 1793 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СС 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 П