Способ моделирования сахарного диабета

%10медицин Л.В.Аб скии институтрамов и Г.В.Ваво СССР28, 1988,детельс 09 В 23 ЕЛИРОВАНИЯ САХАР е: экспериментальная меоделирования сахарного изобретение относи именно к способам мод ногодиабета, что может для зучения патогенез разв тия заболевания, а способов его профилакт Йель изобретения -изве ения доклиническо зави имаго сахарного д стой. ой формы заболеватся к медицине, а елирования сахар- быть использовано а возникновения и также разработки ики и лечения.ускорение воспрой стадии инсулиниабета и получение ния. особ ос твляется следую разой,С целью ускорклинической стадхарн)го диабета изаболевания, в кафонирмочевины/пар -аминобензмоче ина) вдозе 6крыс м подкожно17 дней, причем,инъекции проводяобъемом полного ения воспроизвеии инсулинэависи получения стойкочестве производниспользуют букаолсульфонил/-й-н -7 мг/кг, препара , ежедневно в теч первую, пятую и т одновременно с адьюванта Фрей дения домого сай формы ого сульрбан (М- -бутилт вводят ение 14- десятую равным нда. ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОВЕДОМСТВО СССРГОСПАТЕНТ СССР) К АВТОРСКОМУ СВИДЕТ(57)1 спользованидицйна, способы диабета, изучение патогенеза возникновения и развития заболевания, разработка способов его профилактики и лечения. Цель изобретения - сокращение сроков получения начальных стадий сахарного диабета, упрощение способа, получение стойкой формы заболевания, Сущность изобретения: белым лабораторным крысам линии Вистар обоего пола вводят сахароснижающий препарат из группы производных сульфонилмочевины - букарбином в дозе 6-7 мг/кг на протяжении 14 - 17 дней совместно с полным адьювантом Фрейнда, 2 табл. П р и м е р, Испольэовали 10 крыс-сам- Жцов линии Вистар массой 230-250 г, До на- С чала эксперимента определяли исходный уровень глюкозы (до этого животные 24 ч не Я получали пищи), На протяжении 15-ти дней животным производили подкожные инъекции суспензии букарбана в дозе 6 мг/кг, причем, первая, пятая и десятая иньекции - . ОО в равном объеме с полным адъювантом С) Фрейнда. Через 15 дней уровень глюкозы у Я животных, определяемый натощак, досто- (Д верно возрастал (табл,1), изменялся тест то- ( ) лерантности к глюкозе по диабетическому типу (через 2 ч после внутрибрюшинного введения глюкозы в дозе 4 г/кг уровень глюкозы оставался достоверно выше исходного, а у контрольных становился ниже ф (табл,1).После определения глюкозы животных под легким эфирным наркозом забивали, брали кровь для радиоиммунного определения гормонов, а также извлекали поджелудочные железы, которые для дальнейшей морфологических исследований фиксирова1802330 Таблица 1 ли в жидкости Буэна. Выделяли плазму и сыворотку, в которых при помощи стандартных наборов определяли инсулин (РИО-ИНС-ПГ1, СССР), С-пептид (ВуМЗап 9 тесацпозт 1 са, ФРГ), глюкагон (В 100 АТА, Италия) и соматостатин (1 псзтаг, США). Контролем служила группа животных, получавших на протяжении 15-ти дней подкожные инъекции чистого физиологического раствора в таком же объеме. Определение уровня гормонов проводилось одновременно у опытных и контрольных животных. Через 15 дней эксперимента, по сравнению с контролем, уровень инсулина и С-пептида в сыворотке крови достоверно снижался (табл.2), а глюкагона и соматостатина в плазме возрастал.Поджелудочную железу после фиксации и стандартной обработки в спиртах возрастающей концентрации заливали в парэфиновые блоки, из которых готовили гистологические срезы толщиной 4 мкм, Срезы окрашивали гематоксилин-зозином, а также хромовым гематоксилин-флоксином для дифференцировки А-, В- и Д-клеток. Морфометрия ядер В-клеток выявила уменьшение их площади по сравнению с контролем, а также отмечены дегенеративные изменения в клетках, что является признаком морфофункциональных нарушений инсулярного аппарата поджелудочной железы. Кроме того, с помощью метода непрямой иммунофлюоресценции проводилось количественное выявление содержания инсулина в В-клетках. Срезы поджелудочной железы толщиной 4 мкм после депарафинирования подвергали трипсинизации в течение 60 мин, а затем инкубировали с моноклональными антителами к инсулину (АМЕРЯНАМ, Англия) в течение 6 ч, а затем со вторичными антителами, конъюгированными с Р 1 ТС (АМЕРЗНАМ, Англия) 60 мин, После этого препараты изучались под люминесцентным микроскопом ЛЮМАМ-И 2. Интенсивность свечения, прямо связанная с количеством инсулина в В-клетках, определялась фотометрической насадкой ФМЭЛ 1 А, с последующей обработкой данных на ЭВМ, Установлено, что при введении букар бана количество инсулина в В-клетках резкоснижается (табл.2), что соответствует обнаруженному уменьшению концентрации инсулина в сыворотке крови, а также наблюдается деструкция части островков.10 Кроме того, к концу 15-дневного срока уживотных наблюдались повышенная жажда и аппетит, полиурия и агрессивное поведение, что является субъективными признаками сахарного диабета, Эти же изменения 15 (гормональные и морфофункциональные)сохранялись и через 30 дней после прекращения инъекций букарбана.Аналогичные результаты получены как усамцов, так и самок, как половозрелых, так 20 и неполовозрелых.Преимуществом данного способа моде лирования инсулинзависимого сахарногодиабета является быстрота получения доклинической стадии заболевания, по срав нению с прототипом в 6 - 18 раз, простотавоспроизведения, стабильность результатов, экономичность благодаря использованию крыс, высокая степень приближения к клиническому течению заболевания.30 Формула изобретенияСпособ моделирования сахарного диабета, включающий ежедневное введение животным производного сульфонилмочевины, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью 35 ускорения воспроизведения доклиническойстадии инсулинзависимого диабета и получения стойкой формы заболевания, в качестве производного сульфонилмочевины используют букэрбан К-(пэрээминобензол сульфонил)-М-н-бутилмочевина в дозе 6-7мг/кг, препарат вводят крысам подкожно ежедневно в течение 14 - 17 дней, причем первую, пятую и десятую инъекции проводят одновременно с инъекциями равного 45 объема полного адиовата Фрейнда.1802330Таблица 2Составитель Ю.КолесникРедактор В,Трубченко Техред М.Моргентал Корректор М,Самборсказ 847 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СС 113035, Москва, Ж, Раушская нэб 4/5 изводственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина