Способ повышения иммуногенности антигенов

-исследо и эпидеми тельский огии им,ко, И зброж и ьство СССР3/53, 13,07.88. вета на антигены, по ции иммунного отве тным вводят одно антигенами штамм Е ВИ, двукратно, с инт 4 О СУДАРСТВЕ ННОЕ ПАТЕНТНОЕДОМСТВО СССРОСПАТЕНТ СССР) Изобретение относится к медицине и биологии, может быть использовано при получении специфических высокоактивных -антигенов различной природы и предназначено как для научно-практической работы, так и для создания высокоэффективных биологических препаратов специфического действия.Известны способы повышения иммуногенности антигенов с использованием адъювантов, иммуностимуляторов путем встраивания антигенов в состав липосом.Однако использование адъювантов и иммуностимуляторов требует специальных технологий, приводит к дополнительной антигенной нагрузке на организм, при их применении возможны побочные реакции, Получение липосомальных препаратов нуждается в выделении очищенных антигенных белков и не может быть использовано для повышения специфической активности живых вакцин.Известен способ стимуляции иммунологического статуса животных и иммунного от(54) СПОСОБ ПОВЫШЕНИЯ ИММУНОГЕННОСТИ АНТИГЕНОВ(57) Использование: в области медицины и иммунологии. Поставленная цель достигается тем, что для иммунизации используют антиген, обработанный электрическим током. Сущность изобретения: антиген обрабатывают постоянным электрическим током в специальной камере, разделенной полупроницаемой мембраной, причем антиген помещают в катодную часть камеры. Изобретение позволяет ускорить получение антигена. 2 табл,которому для стимуляа на антигены живо- временно с этими мегоч 1 гоз зц 1 зУНИ- врвалом 12-21 день в дозе 10-10 ТЦД 5 о на 1Недостаткомуказанного сп двукратное введение в ор нужного антигена культурал содержащей дополнительн этом требуются расходы на турального вируса. на повт зацйю, удлиняются сроки нельзя предсказать возм ствия генетического вз вводимого вируса с другими кулирующими среди животнЦель изобретения - ус кг массы тела. особа является ганизм помимо ьной жидкости, ый вирус. При получение кульориую иммунииммунизации, ожные последаимодействия вирусами, цирых.коренное повышение иммуногенности антигенов и получение целевого продукта с повышенной специфической активностью.Поставленная цель достигается путем обработки растворов антигенов электрическим током. Для этого в камеру, разделен1794250 Формул э и зоб р.ете н и я 50 целью ускорения способа, антиген, помеСпособповышейияиммуногенностиан- щенный в катодную часть камеры, отдетигенов. включающий иммунизацию живо- ленную полупроницаемой мембраной, тных предварительно обработанным обрабатывают постоянным электрическим антигеном, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с током.55 ную на две части полупроницаемой мембраной; помещают раствор антигена, через который пропускают постоянный электрическийток в определенном режиме,Изучение иммуностимулирующих 5свойств антигена проводят путемиммунизации животных и последующей оценки иммуногенности по изменению титров антителв сыворотках крови. Антигенную активностьантигена оценивают методом иммунофер- "0ментного анализа (ИФА) в реакциях со стандартными диагностическими сыворотками.В качестве антигенов используют антиген,не обработанный электрическим током, иантиген, полученный после электрохимической обработки из катодной части камеры,По сравнению с прототипом предлагаемый способ повышения иммуногенностиантигенов имеет следующие преимущества."1) повышение специфической активности 20. антигена не сопровождается введением ворганизм дополнительных, балластных белков (антигенов); 2) сохраняются биологические свойства антигена; 3) повышениеспецифической активности антигена осущесталя ется в короткие сроки (5-30 мин),Изобретение иллюстрируется следующими примерами.П р и м е р 1, Аллантоисную жидкость,содержащую вирус гриппа А/Ленинград/92/17/89 Н 1 В 1), титр ГА 1:64, в коли.честве 9 мл помещают в катодную частькамеры, разделенной полупроницаемоймембраной, в анодную часть помещают 9 млраствора: нормальной аллантоисной жидкости куриных эмбрионов, В течение 5 минпропускают постоянный электрический токсилой 15 мА, напряжением 6 В. В дальнейшей работе используют растворантигенаизкатодной части камеры, Две группы животных белые мыши) иммунизируют подэфирным наркозом по 0,3 мл внутрибрюшинно: вируссодержащей жидкостью, непрошедшей и прошедшей обработку элект 45 рическим током, Сыворотки крови животных исследовали в реакции торможения гемагглютинации (РТГА) на наличие специфических антител спустя 5 недель от момента иммунизации. РТГА ставили по общепринятой методике в плексиглассовых пластинах с 1 Д взвесью куриных эритроцитов в изотоническом растворе хлорида натрия. Данные РТГА (табл. 1) свидетельствуют о том, что. иммуногенная активность вируса гриппа А/Ленинград/92/17/89, обработанного электрическим током, в 2,35 раза превышает иммуногенную активность необработанного вируса.П р и м е р 2, Стандартный токсоплазменный антиген из. ИФА-тест-системы в рабочем разведении разделяют на две части: одну часть оставляют в качестве контроля, а вторую часть подвергают обработке постоянным электрическим током, 10 мл раствора антигена помещают в катодную часть камеры, разделенной полупроницаемой мембраной, в анодную часть помещают 10 мл фосфатного буфера. 8 течение 10 мин пропускают постоянный электрический ток силой 2 мА напряжением 2 В. Раствор из катодной части камеры отбирают, выдерживают 3 ч при 4 С и используют в дальнейшей работе. Одну половину планшеть 1 для ИФА сенсибилизируют необработанным раствором токсоплазменного антигена, другую половину - обработанным раствором антигена. После инкубации в течение 16 ч при 4 С и отмывки, в лунки планшета вносят контрольные сыворотки: положительную и отрицательную. Учет результатов проводят на аппарате "Мультискан" МСС/340 Р. Результаты опыта табл.2) свидетельствуют о том, что специфическая активность оЬработанного Электрическим током токсоплазменного антигена по выявлению специфических антител достоверно превышает соответству.ющую активность необработанного антигена в 1.5-2 раза.1794250 Таблица 1 Уровень антигемагглютининов в сыворотках крови животных после иммунизациивирусом гриппа А/Ленинград/92/17/89, прошедшим и не прошедшим обработкуэлектрическим током Препарат для иммунизации Титры антигемагглютининов в сыворотках крови животных через 5 недель после иммунизации (обратные величины1. Исходный вирус гриппа2. Вирус, обработанньй электрическим током 44,17 + 10,14 103,76 + 16,63 1:64 1:64 Кратность прироста титра антител остове ность отличия 2,35 0,01 Таблица 2 Результаты ИФА при использовании в тест-системе обработанного и необработанного электрическим током токсоплазменных антигенов Кратность увеличения оптическ.плотности Достоверность отличийОптическая плотность в лунках, содержащих контрольную положительн ю сыво отк плюс:необработанный антиген, обрабоантиген танный электич, током П р и м е ч а н и е: Контроль антигена с отрицательной сывороткой:необработанный - 0,069обработанный - 0,060 Составитель А. ПономаренкоТехред М.Моргентал Корректор А,Мотыль Редактор Г, Федотов Заказ 532 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул. Гагарина, 101 хх:2х:4 х:8 х;16 0,358 .+ 0,0020 0,235 + 0,0030 0,170 + 0,0020 0,081 ч 0,0015 0,045 й 0,0020 0,537 -ф 0,0044 О,423 О,ОО 50 0 291 ч 0 0021 0,159 -ф 0,0064 0,082 + 0,0043 1,5 1,8 1,7 2,0 1,8 р 0,001 р 0,001 р 0,001 р 0,001 р 0,001