Способ консервирования фармакоцитов с включенной l аспарагиназой

С 0103 СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК А ю)5 А 61 К 47/00 ГОСУДАРСТВЕННЫИПО ИЗОБРЕТЕНИЯМПРИ ГКНТ СССР МИТЕТТКРЫТИЯ ИСАНИ И тологический научн области медицинско и при консервирова вание: в частнос Изобретение икак вопросы консеэритроцитов, содерлогический препарарубежной научно-иизучены,е имеет, так и хранения ри фармаковенной и затературе не ототипа н вирования жащих внут т, в отечест тентной ли ТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(57) Использобиохимии, в Ф,И,Атауллаханов, ияткин, А,М,.Жаботин,И,Синауридзе РВИРОВАНИЯ ФАРЮЕННОЙ-АСПАРАИзобретение относится к медицинскои биохимии и может быть использовано при хранении новых лекарственных форм на основе эритроцитов,Эритроциты-носители,заполненныелекарственным препаратом (фармакоциты), не равнозначны целым эритроцитам по устойчивости к различным воздействиям и хранению, Прочность этих клеток по сравнению с исходными эритроцитами снижена и зависит от способа их получения, Методы консервировании фармакоцитов должны отличаться от методов консервирования целых эритроцитов и различаться в зависимости от того, каким способом они были получены (т,е. насколько сохранилась целостность их мембраны и функциональная полноценность)..,Ж 17778 нии новых лекарственных средств на основе эритроцитов. Сущность изобретения: получение фармакоцитов с включенной(-аспарагиназой диализным методом, с полным соблюдением условий асептики, Фармакоциты консервируют в соотношении 2:1 в растворе "Эритронаф", содержащем глюкозу в концентрации 1,5 г/100 мл. Полученные фармакоциты хранятся при температуре 4+ 2 С, Способ позволяет сохранить жизнеспособность и функциональную полноценность фармакоцитов в течение 7 сут. 1 табл. Целью изобретения является разработка способа хранения (консервирования) эритроцитов с -аспарагиназой внутри, полученных диалиэным методом,Поставленная цель достигается путем строгой стандартизации процесса диализного получения эритроцитов-носителей, нагруженных -аспарагиназой, и хранения полученных фармакоцитов при 4+2 С в ресуспендирующем растворе "Эритронаф" (в соотношении эритроциты: раствор "Эритронаф" = 2:1), содержащем дополнительно глюкозу в концентрации 1,5 г/100 мл.П р и м е р. Получение и хранение фармакоцитов, заполненных препаратом (.-аспарагиназы),Для приготовления эритроцитов-носителей с фармакологическим препаратом внутри использовали эритроцитную массу, полученную путем удаления плазмы из дозы консервированной донорской крови, заготовленной на стандартном гемоконсерванте "Глюгицир" и хранившейся в контейнере "Гемакон 500/300" при температуре 4:2 С в течение 1-2 сут,1777887 Изменение ряда параметров фармакоцитов в процессе хранения В качестве фармакологического препарата, вводимого в эритроциты, использовали препарат-аспарагиназы, применяемый в клинике при терапии ряда лейкозов(с активностью 10000 М.Е. во флаконе),Все процедуры приготовления фармакоцитов проводили в строго стерильных условиях на аппарате "Искусственная почка" - диализаторе ДИП,Эритроцитную массу отмывали трижды стерильным апирогенным раствором 0,9 - ного хлорида натрия (охлажденного до температуры 4+2 С). Параллельно готовили раствор-аспарагиназы, для чего 20 флаконов препарата растворяли в 20 мл дистиллированной воды, Приготовленный раствор :аспарагиназы переводили в контейнер с эритроцитами в стерильном ламинарном боксе через стерилизующий фильтр Суинекс (фирмы Миллипор, США), Затем тщательно перешивали содержимое контейнера.Диализная установка заполнялась предварительно охлажденным до 4-ф:2 С лиэирующим раствором, который содержал: АТФ -5 г/л; глюкозу - 5 г/л; М 9504 -1,2 г/л, Ца 2 НР 04 х 12 Н 20 - 16 г/л, Гипотонический диализ проводили при комнатной температуре в диализной установке путем 10-минутной встречной циркуляции смеси эритроцитов с 1-аспарагиназой и данного лизирующего раствора. Через 10 мин после начала гипотонического диализа в смеси восстанавливали нормальную тоничность, для чего в емкость с лизирующим раствором вносили рассчитанное количество КаС (45 г/5 л). Температуру смеси за 10 - 15 мин поднимали до 37 С с .помощью водяного термостата. Процесс репарации проводили при данной температуре в течении 30 мин, после чего суспензию готовых эритроцитовносителей с препаратом Е-аспарагиназы внутри вновь переводили из диализной установки в полимерный контейнер "Гемакон500/300",Для полного удаления вышедшего из5 эритроцитов гемоглобина фармакоцитысначала откручивали, а потом трижды отмывали физиологическим раствором путемцентрифугирования (20009 х 5 мин). Последний супернатант имел бледно-розовый10 цвет.Для дальнейшего консервирования ихранения к отмытым фармакоцитам прибавляли ресуспендирующий и консервирующий раствор "Э ритронаф" (ВФС 42-1859-88)15 в соотношении 2;1, к которому предварительно стерильно добавляли раствор глюкозы до концентрации 1,5 г/100 мл,Содержимое контейнера тщательно перемешивали и хранили затем при темпера 20 туре 4.+2" С.Из одной дозы крови получали шестьлечебных доз препарата-аспарагиназы (сактивностью по 10000 М,Е.),. Стерильность, жизнеспособность и25 функциональная полноценность фармакоцитов, оцененные по данным бакпосева, атакже по тестам на осмотическую резистентность эритроцитов и по сохранению до48 уровня внутриклеточного АТФ (между 30 народный трансфизиологический стандарт)сохранялись в течение 7 сут. В течение всегоэтого срока сохранялась также активностьпрепарата Е-аспарагиназы внутри фармакоцитов (см,таблицу).35 Формула изобретенияСпособ консервирования фармакоцитов с включенной-аспарагиназой, полученных диализным методом,заключающийся в том, что фармакоциты ре 40 суспендируют в соотношении 2:1 в растворе